化学发光法检测抗HEV IgG试剂盒的研制和评价

目的研制化学发光法检测血清抗戊型肝炎病毒(HEV)IgG试剂盒,并评价其临床应用。方法以HEV重组抗原包被化学发光微孔板,辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗人IgG为二抗,鲁米诺化学发光反应体系作为底物。通过检测抗HEV抗体国家参考品评价其灵敏度、特异性、精密性等技术指标,并与已商品化的化学发光法抗HEVIgG检测试剂盒对比检测1012份临床血清样本。结果3个批次的试剂盒的灵敏度、特异性、精密性、稳定性均达到国家标准。对1012例临床血清样本检测,两种试剂盒检测阳性符合率为97.4%,阴性符合率为99.4%,总符合率达98.4%。结论成功研制出化学发光法检测抗HEVIgG试剂盒,该试剂盒敏感性高、特异性强、操作简便,适用于HEV感染的临床诊断及流行病学调查。

HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测方法的建立及应用

目的建立HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测的酶免疫检测方法,用于HIV感染的实验室诊断,缩短HIV感染的检测窗口期。方法制备抗HIVP24单克隆抗体和多克隆抗体,联合使用基因工程HIV1/2型抗原和抗HIVP24单克隆抗体包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的HIV1/2型抗原和生物素化的兔抗HIVP24抗体作为标记物,建立联合检测HIV1/2抗体和P24抗原的ELISA方法,并对其特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。结果检测P24抗原质控品的灵敏度可达0.2ng/ml;检测187份HIV阳性血清、210份其他疾病患者血清和520份正常人血清,其敏感性和特异度分别为100%和99.62%。同时重复12次检测4份HIV阳性血清,变异系数均小于10%。结论本方法可以在1.5h内一步同时检出特异性HIV-1/2抗体和HIVP24抗原,缩短了HIV感染的检测窗口期,具备快速、简便、特异、敏感等优点,适用于HIV感染的实验室诊断和流行病学调查。

SARS冠状病毒核壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早 期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具。 方法 以重组SARS CoVN蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维 素半固体培养基法制备单克隆抗体。通过间接酶联免疫分析、间接免疫荧光、免疫双向扩散等方法鉴定抗体的特 异性、亲和力、类型及亚类、配对效果等。 结果 共获得15个阳性克隆,其中10个与天然SARS CoV呈阳性反应。 10株单抗的相对亲和常数在108～109mol L-1之间;10株中有1株为IgG2b、1株为IgG3,其余均为IgG1;10株单抗中 有8株与12种肺炎相关的病原体无交叉反应,1株与流感病毒A、B,副流感病毒有交叉反应,1株与流感病毒A、B 有交叉反应;10株单抗中的5株可形成5种配对,其中两种配对用于检测重组SARS病毒N蛋白,灵敏度可达1μg L。 结论 获得了特异性针对SARS冠状病毒N蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测SARS CoVN蛋白的酶联 双抗体夹心法,为SARS的早期诊断、蛋白质组学的研究奠定了基础。

HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测试剂盒的研制与评价

目的研制HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测酶免疫试剂盒并评价其实用性。方法联合使用基因工程HIV1/2型抗原和抗HIVP24单克隆抗体包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的HIV1/2型抗原和生物素化的兔抗HIVP24抗体作为标记物,研制了联合检测HIV1/2抗体和P24抗原的ELISA诊断试剂,并对其特异性、敏感性、稳定性等进行评价和临床考评。结果检测P24抗原质控品的灵敏度可达0.2ng/ml;与雅培公司试剂比较检测78份AIDS患者血清和85份正常人血清、对照检测中国药品生物制品检定所研制的HIV参比血清,特异度和灵敏度均为100%。临床考核检测12051份各种血清,灵敏度为100%(543/543),特异度为99.48%(11448/11508)。试剂在37℃放置6d后,试验结果无明显差异。结论本试剂盒具备特异度强、敏感度高、稳定性好、操作简便等优点,可以一步检出HIV特异性抗体和HIVP24抗原,缩短了HIV感染的检测窗口期,适用于HIV感染的实验室诊断和流行病学调查。

四川省MSM人群HIV-1原发耐药性分析

目的分析四川省男男同性恋(MSM)人群中未经抗病毒治疗的人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)感染者的耐药突变的流行情况。方法采集成都、绵阳和达州3个地区MSM中未经治疗的HIV-1感染者血样,进行核酸提取、PCR及基因测序,对所得结果登录美国斯坦福大学HIV耐药数据库进行在线分析确定耐药突变情况。结果 77例样本中,11例存在蛋白酶抑制剂次要相关突变,4例存在核苷类逆转录酶抑制剂相关突变,5例存在非核苷类逆转录酶抑制剂相关突变,其中1例潜在耐药。结论四川省MSM中未经治疗的HIV-1感染者少数存在原发耐药相关基因变异,未发现新耐药毒株,原发耐药株仍处于较低流行状态,感染者在抗病毒治疗开始前应定期检测耐药基因突变情况以指导用药。

化学发光法检测HCVIgG抗体方法的建立和初步应用

目的利用化学发光原理建立一种检On,0HCVIgG抗体的方法，用于HCV感染的检测并为试剂盒研制奠定基础。方法方法学建立。2013年1月至6月完全随机选取的解放军第三。二医院的198份丙型肝炎患者和222份献血员的血清样本。采用间接ELISA方法，用基因工程表达的丙型肝炎病毒（HCV）-NS3、HCV-Core抗原包被化学发光微孔板，辣根过氧化物酶标记抗人IgG抗体，初步建立HCVIgG抗体的化学发光检测方法，进一步与已批准的丙型肝炎病毒抗体检测试剂（化学发光法）同时检测并进行结果对比。结果自制试剂与对照试剂的阳性符合率为99．0％（196／198），阴性符合率为98．2％（218／222），总符合率为98．6％（414／420）。用自制试剂同时检测同1份HCV阳性血清重复10次，其变异系数〈10％。结论初步建立了HCVIgG抗体的化学发光检测方法，此法特异性强、敏感性高，适用于献血员的筛选和临床HCV感染的检测及流行病学调查。

化学发光法检测抗-HEV IgG方法的建立

目的 建立化学发光检测抗HEV IgG方法,用于HEV感染的实验室诊断及流行病学调查,为试剂盒研制打下基础.方法 以HEV重组抗原包被微孑孔板,辣根过氧化物酶标记的单克隆抗人IgG抗体为第二抗体,建立抗HEV IgG的化学发光检测方法,评价其灵敏度、特异性、精密性等指标.检测患者血清中抗HEV IgG抗体并与第三方试剂比较.结果 建立了检测抗HEV IgG的化学发光方法,检测500例临床患者标本并与对照试剂盒对比,阳性符合率为99.32％,阴性符合率为98.58％,总符合率98.80％,其灵敏度、特异性、重复性均达到设计要求.结论 建立了化学发光检测血清中抗-HEV IgG的方法,具有敏感性高、特异性强、操作简便等特点,适用于戊型肝炎的临床诊断和流行病学调查.