免疫性血小板输注无效患者HLA/HPA抗体特性分析及其对血小板输注效果的影响

目的 探讨免疫性血小板输注无效(PTR)患者HLA/HPA抗体特异性分布特征及其对血小板输注效果的影响。方法 本研究以86例免疫性PTR患者为研究对象,收集其性别、年龄、身高、体重、配血次数、疾病类型、输注前后血小板计数等临床资料,通过微珠法进行HLA特异性抗体的检测,并分析抗体特性对血小板输注效果的影响。结果 86例PTR患者中,单独HLA抗体、单独HPA抗体、HLA+HPA抗体阳性的患者分别为72例(83.72%)、8例(9.30%)、6例(6.98%)。HLA抗体在各位点中检出频率最高的抗体对应等位基因分别为A*25:01、B*15:12、C*02:02(和C*17:01),检出率分别为81.48%、87.04%、48.15%;而对应抗原表位出现频率最高的前三位为163LG、97V、71ATD,检出率分别为87.04%、77.78%、74.07%。仅存在HLA抗体的患者,输注交叉配型相合血小板的24 h血小板计数纠正增加指数(CCI)及输注有效情况均明显优于随机血小板(P<0.01)。在血小板交叉配型阴性结果的患者中,HLA抗体强度与交叉配型相合血小板的24 h CCI值及输注有效情况呈负相关关系,强度越高,输注效果越差(P<0.01)。HLA抗体强度为中、低等水平的患者,输注交叉配型相合血小板的24 h CCI值及输注有效情况均优于输注随机血小板(P<0.05)。结论 本研究所得到的PTR患者HLA/HPA抗体特性及其对血小板输注效果影响的结果,可为血小板库建立时供者的选择提供指导,同时对临床PTR患者的治疗方式选择有一定的参考价值。

HLA多态性对造血干细胞移植患者成功配型的影响

目的通过对造血干细胞移植患者HLA多态性的分析,包括基因型和单倍型的特征,确定影响患者成功筛选出HLA相合无关供者的关键因素。方法回顾性分析2013年1月至2016年4月北京市红十字血液中心HLA室完成的768名造血干细胞移植患者以及与其进行HLA配型的1 172名中华骨髓库无关供者的基因型和单倍型数据,确定HLA等位基因和单倍型的分布及特征,比较含有常见基因型(CWD表中的Common基因)或非常见基因型(CWD表中的Well-documented基因及Rare基因)以及至少含有一种常见单倍型或不包含常见单倍型的患者找到相合供者(定义为HLA等位基因9/10相合或10/10相合)的几率、找到的相合供者平均数以及找到相合供者的等待天数。结果在768名患者中共有481名找到了相合供者,占62.6%。在研究群体中,HLA-A、-B、-C、-DRB1和-DQB1的等位基因数量分别是38、67、34、43和26个,常见的五位点单倍型为25种。通过比较发现,只包含常见基因型的患者找到相合供者的可能性显著高于包含非常见基因型的患者(63.91%vs.40.48%,P<0.01),其找到的相合供者数目也比后者高(1.25±0.55 vs.1.06±0.24,P<0.01)。至少含有一种常见单倍型的患者与不包含常见单倍型的患者相比,其找到相合供者的几率也更高(77.99%vs.44.29%,P<0.001),找到的相合供者也更多(1.32±0.62 vs.1.10±0.30,P<0.001)。结论 HLA基因型和单倍型是否常见对患者能否成功找到相合供者至关重要,包含至少一种常见单倍型以及基因型中全部为常见基因是患者成功配型的有利因素。

新等位基因HLA-DRB1*1462的核苷酸序列分析

本研究验证一个新的HLA等位基因DRB1*1462的核苷酸序列。应用PCR-SSO和PCR-SSP基因分型技术对HLA分型,对怀疑是HLA新等位基因进行DNA测序。结果发现,该序列与已知的所有HLA-DRB1等位基因序列不一致,与HLA-DRB1*140101的序列差异仅表现在第2外显子区域中256位碱基发生了G->A的替换,导致相应的氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸。结论:该基因是HLA-DRB1位点的一个新等位基因,已经被WHOHLA命名委员会于2006年1月30日正式命名为HLA-DRB1*1462。

血小板输注无效患者中人类白细胞抗原抗体和人类血小板抗原抗体分布情况及其基因频率分析

目的分析血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR)患者中人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)抗体和人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)抗体的分布情况以及PTR患者的HPA基因频率。方法选取2020年1—12月北京市红十字血液中心86例因PTR进行血小板抗体检测的血液系统疾病患者,包括急性髓细胞性白血病(acute myelogenous leukemia,AML)、慢性髓细胞性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)、急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)、慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphoblastic leukemia,CLL)、骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)、再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)、特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP),采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析其血清中HLA抗体和HPA抗体,采用序列特异引物引导的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对患者进行HPA-1~6、9及l5系统的基因分型。结果86例患者中有33例的血清显示血小板相关抗体阳性,阳性率为38.4%,其中24例(27.9%)只表达HLA抗体,6例(7.0%)只表达HPA抗体,3例(3.5%)共同表达HLA抗体和HPA抗体。不同疾病之间血小板抗体的发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HPA基因分型结果显示,HPA-3和HPA-15具有较高的多态性,HPA-3系统中a的基因频率高达61.5%,b为38.5%;HPA-15中a的基因频率为54.2%,b为45.8%。结论HLA和(或)HPA抗体的产生是导致PTR的重要因素,其中HLA抗体占主要地位,这些患者的HPA基因多态性分布特征与中国北方汉族人群的HPA分布特征一致,确定PTR患者的抗体特异性及HPA基因分布特征将为血小板库的建立提供数据支持。

新等位基因HLA-A*240212的认定

目的发现和认定1个HLA新等位基因。方法应用PCR-SSO基因分型技术筛选可能的HLA新等位基因,PCR产物测序,确认与最同源HLA等位基因序列的差异。结果发现一个样品的HLA-A位点结果异常。其序列与已知所有HLA-A等位基因序列不一致,与同源性最高等位基因A*24020101的差异只是在第2外显子区域中的230位碱基发生了C→T碱基的替换,但并未改变第77密码子编码的氨基酸。结论该等位基因为HLA-A位点的1个新等位基因,已被WHO HLA因子命名委员会于2006年8月23日正式命名为HLA-A*240212。

北方汉族HLA-DRB1、DQB1基因多态性的研究

目的从基因水平了解北方汉族ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＢ１多态性分布，获得更完整、更准确的遗传学数据。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法对１０７名北方汉族健康人进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＢ１等位基因分型。结果鉴定了１４个ＤＲＢ１等位基因，９个ＤＱＢ１等位基因，包括了ＤＲ、ＤＱ位点的全部血清学特异性。结论提供了一套比较完整准确的ＤＲＢ１、ＤＱＢ１等位基因的基因频率和连锁不平衡参数。对群体遗传和疾病关联的研究具有重要的意义。

人类白细胞抗原HLA-B／DR座位间基因重组一家系

目的 了解一家系人类白细胞抗原（human leucocyte antigen，HLA）复合体HLA—B／DR座位间的基因重组。方法 采集拟进行造血干细胞移植的1例急性淋巴细胞白血病患者（男，16岁）及其父母和3个姐姐的外周血标本,首先对其HLAⅠ、Ⅱ类A、B、DRB1 3个位点采用聚合酶链反应序列特异寡核苷酸探针技术（polymerase chain reaction—sequence specific oligonucleotide，PCR—SS0）和聚合酶链反应-序列特异性引物技术（polymerase chain reaction sequence specific primer，PCR—SSP）进行低分辨基因分型，然后用基于测序的分型方法（sequencing-based typing，SBT）进行高分辨基因分型，再进行遗传家系分析研究，确定HLA基因重组相关位点。结果 HLA高分辨基因分型的结果证实患者的2条单倍型分别为A＊3101-B＊1301-DRB1＊0701和A＊3303-B＊4403-DRB1＊1302；其父亲的2条单倍型为A＊3001-B＊1302-DRB1＊0701和A＊3101-B＊1301-DRB1＊1501。从遗传家系分析显示，患者所携有的父源A＊3101-B＊1301单倍体是源自父亲的1条染色单体，而DRB1＊0701则源自父亲的另1条染色单体，这表明父亲的2条染色单体在减数分裂时HLA—B和-DRB1基因座位间发生了交换，重组后的单倍型又完整地遗传给了患者。结论 发现了1个中国汉族人群HLAB／DR基因座位间的基因重组家系。

免疫性血小板输注无效患者血清中血小板相关抗体的变化及其临床意义

目的分析免疫性血小板输注无效(IPTR)患者血清中血小板相关抗体的变化情况及其对血小板输注效果的影响。方法30例确认为IPTR的患者,收集其性别、年龄、血型、身高、体重、疾病类型、输注前后血小板计数等资料,分别于0、1、3、6个月时检测其血清中的HLA抗体和HPA抗体。ELISA方法进行血小板相关抗体检测,通过计算获得抗体相对强度。微珠法进行HLA特异性抗体检测。结果在随访的30例患者中,共有12例患者的抗体转阴,平均转阴时间为(4.08±1.78)M,7例患者呈现强度逐渐减弱的趋势,另有10例患者呈现稳定存在状态。HLA抗体相对强度的变化同时伴有HLA特异性抗体种类的变化,二者呈正相关趋势。患者HLA抗体相对强度的降低使患者更容易找到交叉配型相合的供者,但是对输注交叉配型相合血小板后的24 h血小板计数纠正增加指数(CCI)和输注有效率没有显著的影响。结论大多数IPTR患者血清中的HLA抗体在6个月内减弱或消失,部分患者的HLA抗体持续稳定存在。抗体减弱或消失同时伴随特异性抗体种类的减少,使患者更容易找到交叉配型相合的供者,但对其输注效果无显著影响。

血小板自身抗体在血小板输注无效中的临床意义

目的观察血小板自身抗体与同种抗体对血小板交叉配型难易程度及输注效果的影响。方法选择2021年7月—2023年9月在本实验室完成血小板抗体鉴定的106例血小板输注无效(PTR)患者,根据血小板抗体类型将患者分为两组,20例自身抗体阳性患者为观察组,86例同种抗体阳性患者为对照组。比较两组患者配型相合次数百分率、配型相合供者百分率、输注交叉配型相合血小板及随机血小板的24 h血小板计数增加指数(CCI)值及输注有效率的差异,并对观察组自身抗体变化情况进行追踪。结果观察组的配型相合次数百分率及配型相合供者百分率均高于对照组(P<0.05)。观察组患者输注交叉配型相合血小板与随机血小板的24 h CCI值及输注有效率均无显著性差异(P>0.05),对照组患者输注交叉配型相合血小板的24 h CCI值及输注有效率均高于输注随机血小板(P<0.001),对照组患者输注交叉配型相合血小板后24 h CCI值及输注有效率比观察组高(P<0.05),对照组和观察组输注随机血小板后24 h CCI值及输注有效率无显著性差异(P>0.05)。观察组多数患者的自身抗体强度呈下降趋势。结论血小板自身抗体对血小板交叉配型难易程度及输注效果的影响比同种抗体小。血小板自身抗体强度随时间推移呈现逐渐下降乃至消失的规律。在临床实践中,对于自身抗体患者的治疗,应当首先查找病因,并进行针对性治疗,如果需要输注血小板,可以选择输注随机血小板。

矽肺与人类白细胞抗原-DRB1*和-DQB1*基因相关性的研究

目的 探讨我国北方汉族人矽肺的易感性与人类白细胞抗原 (HLA) DRB1 、DQB1 位点等位基因多态的相关性。方法 用序列特异性引物的聚合酶链式反应 (PCR SSP)方法 ,分析 48名汉族矽肺患者及 10 0名汉族无血缘关系对照者 (均为有过 14年以上接尘史的井下凿岩工 )HLA DRB1 、DQB1 位点的基因频率分布 ,以相对危险度 (RR)代表相关程度。结果 在矽肺患者组中 ,DRB1 140 1、DQB1 0 5的等位基因频率明显高于对照组 ,经统计学处理 ,两组间差异具有显著性 (χ2 =5 .6 1,P =0 .0 0 6 6 ,RR =17.40 ;χ2 =10 .70 ,P =0 .0 0 11,RR =3.81) ;而DRB1 0 9的等位基因频率则明显低于对照组 ,差异有显著性 (χ2 =5 .70 ,P =0 .0 187,RR =0 .2 1) ;其他等位基因频率的分布差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 HLA DRB1 140 1、DQB1 0 5可能与矽肺的易感性有关 ,而DRB1 0 9则可能与机体抗矽肺的保护性有关。HLA DR位点与机体易感及保护的双重作用有关 ,等位基因之间的共同作用可能是影响矽肺发生的原因之一。

快速AS-PCR技术用于血小板HPA-1,-2,-3,-4,-5抗原系统等位基因的分型

目的 研究建立快速等位基因特异性 (AS)引物 PCR技术 ,同时对人血小板同种异型抗原系统 (HPA 1,2 ,3,4,5 )等位基因进行分型。方法 设计合成 15条等位基因特异性引物 ,摸索最适引物浓度、Mg+ + 浓度及扩增参数。用该技术对 10 0名北京地区健康献血者HPA 1～ 5系统等位基因进行分型。结果 从 10 0名北京地区献血员观察到的HPA基因频率分别是HPA 1a和 1b为 0 .995和 0 .0 0 5 ,HPA 2a和 2b为 0 .90 0和 0 .10 0 ,HPA 3a和 3b为 0 .775和 0 .2 2 5 ,HPA 4a和 4b为 1.0 0 0和 0 ,HPA 5a和 5b为 0 .970和 0 .0 30。结论 该方法简单、快速 ,结果准确 ,适用于临床及常规献血员血小板分型。

DNA测序鉴定新等位基因人白细胞抗原-Cw^＊1521

人白细胞抗原（HLA）系统是人类最复杂的遗传多态性系统，迄今已发现3095个等位基因。HLA—Cw属于经典的HLA—I类基因，位于HLA—A和HLA—B位点之间，于1970年被发现，目前HLA—Cw位点已经被发现了190多个等位基因。我们在常规白血病患者高分辨率分型的样本中发现了1个新的HLA-Cw等位基因，2007年4月被世界卫生组织人白细胞抗原命名委员会正式命名为HLA—Cw^＊1521。