加速创新型技术应用,实现终止结核病目标

结核病是一种古老的传染性疾病,至今仍对全球人口构成严重威胁,其普遍性和影响力给社会带来了沉重的经济负担。为实现2035年全球“终止结核病”的宏伟目标,持续的技术创新和研发势在必行。本文综合梳理了21世纪以来结核病诊治的最新动态,涵盖了实验室诊断技术的进步、药物治疗策略的更新,以及疫苗研发的前沿进展,旨在为全面理解结核病的现状及未来走向提供参考。

结核分枝杆菌黏附素HBHA的克隆表达及其免疫原性研究

目的应用克隆表达技术从大肠杆菌中获得重组的结核分枝杆菌黏附素HBHA蛋白,并以HBHA免疫小鼠观察抗HBHA抗体的产生并探讨其免疫原性。方法1)应用PCR技术扩增结核分枝杆菌hbhA编码基因的特异片段。2)结核分枝杆菌hbhA编码基因的克隆及在大肠杆菌中的表达。3)应用克隆表达的HBHA蛋白免疫小鼠,并用ELISA法测定小鼠血清抗HBHA抗体水平。结果1)结核分枝杆菌hbhA基因成功地克隆到PET-32 a(+)表达载体中,并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组HBHA主要存在于包涵体中,纯化包涵体并获得了大量的重组HBHA。2)重组HBHA免疫小鼠可产生较高水平的抗HBHA抗体(>1∶102 400),表明重组HBHA在纯化过程中仍保留较强的免疫原性。结论结核分枝杆菌黏附素HBHA具有较好的免疫原性。

Toll样受体在结核病免疫应答中的作用

结核病（Tuberculosis）主要是由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,MTB）引起的传染性疾病，全球有113的人是该致病菌的携带者，2008年约有182万人死于结核病，且新增病例940万。中国结核病疫情的严重性尤为突出，患者人数居世界第二，

结核分枝杆菌黏附素HBHA的克隆表达及其免疫原性研究

目的应用克隆表达技术从大肠杆菌中获得重组的结核分枝杆菌黏附素HBHA蛋白，并以重组HBHA免疫小鼠观察抗HBHA抗体的产生并探讨其免疫原性。方法①应用PCR技术扩增结核分枝杆菌hbhA编码基因的特异片段。②结核分枝杆菌hbhA编码基因的克隆及在大肠杆菌中的表达。③应用克隆表达的HBHA蛋白免疫小鼠，并用ELISA法测定小鼠血清抗HBHA抗体水平。结果①结核分枝杆菌hbhA基因成功地克隆到PET-32a（＋）表达载体中，并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组HBHA主要存在于包涵体中，纯化包涵体并获得了大量的重组HBHA。②重组HBHA免疫小鼠可产生较高水平的抗HBHA抗体（〉1：102400），这表明重组HBHA在纯化过程中仍保留较强的免疫原性。结论结核分枝杆菌黏附素HBHA具有较好的免疫原性。

北京地区2008-2010年肺结核病复发流行病学和机制分析

目的研究北京地区肺结核病的复发情况,确定复发病例中内源性复燃和外源性再感染的比例。方法对北京各区县随机收取的4694例肺结核病临床病例进行回顾性研究,从中筛选出治疗痊愈后,间断6个月以上再次ty院确定为复发的病例。对复发病例进行背景资料分析,分析和复发有关的风险因素;并且对复发病例临床分离株应用数目可变串联重复序列基因分型方法进行分析,确定复发形式。结果从4694例肺结核病临床病例中发现265例复发病例,复发率为6.7%;在复发风险上30~59岁年龄段和其他年龄段人群相比差异有统计学意义(OR=1.780,95%CI:1.406~2.255.P<0.05);复治患者和初治患者相比差异有统计学意义(OR=1.032,95%CI:1.010~1054,P<0.05)。配对的复发病例中64%(37/58)为内源性复发,36%(21/58)为外源性再感染。结论在北京地区30~59岁年龄段人群、初始入院为复治的患者更容易出现肺结核病复发;复发病例主要为内源性复燃,同时也存在一定的外源性再感染和近期传播。

长链非编码RNA在结核分枝杆菌感染的巨噬细胞中的作用机制及研究进展

结核病是由结核分枝杆菌感染导致的一种传染病,是严重威胁人类健康的传染病之一。尽管结核病的诊断和治疗方法取得了重大进展,但目前仍没有适当的工具用于早期筛查和诊断。长链非编码RNA(longnon-coding RNA,lncRNA)可以通过染色质修饰、转录或转录后处理从而调控基因表达,在免疫反应中起重要作用,结核分枝杆菌感染后lncRNA的差异表达与巨噬细胞炎症、自噬及细胞凋亡等相关。随着研究的深入,lncRNA在调控宿主对结核分枝杆菌的抗菌反应中的作用逐渐被重视,而巨噬细胞作为先天免疫的重要组成部分,参与结核病的发生发展。因此,阐明巨噬细胞中lncRNA与结核分枝杆菌感染之间关联的调控机制,可能为结核病诊断、判断疾病进展及治疗提供新策略。

PCR-SSOP并Southern杂交检测实验室筛选耐氧氟沙星结核分枝杆菌的研究

目的 探讨PCR-SSCP并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性，并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限。方法 ①体外诱导筛选耐OFLX的自然突变株，并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)；②扩增结核分枝杆菌的gyrA基因(包括H37Rv、H37Ra、临床分离的OFLX敏感株及体外诱导筛选的耐OFLX的菌株)并对此扩增产物进行单链构象多态性(SSCP)分析及Southern杂交，以判定应用该技术的效果。结果经PCR-SSCP及Southern杂交检测，85株体外诱导的自然耐OFLX菌株，均检测到gyrA基因突变。研究发现．在OFLX 10μg／ml这一点上，明显地存在着一个耐OFLX结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药并存的交叉区。结论PCR-SSCP合并Southern杂交可清晰地区分OFLN敏感与耐药株。本研究结果显示，以10μg／ml为界作，为判别耐OFLX的标准是适宜的。

细菌中非编码小RNA的研究进展

非编码小RNA（small non—coding RNA，sRNA），sRNA广泛存在于从细菌到高等哺乳动物的各种生物体中，长度大约在50～250bp范围内。sRNA虽然不合有任何的开放阅读框（ORF），但是在调节基因表达方面却发挥了重要作用。2002年12月20日，Science杂志将“Small RNA＆RNAi”评为2002年度的最耀眼的明星^[1]!同时，Nature杂志亦将Small RNA评为年度重大科技成就之一^[2]。sRNA研究的突破性进展，是生物医学领域近20年来，可与人类基因组计划相提并论的最重大成果之一。

喹诺酮类抗生素对体外获取耐氟嗪酸结核菌的抗菌机制研究

目的:如何早期判断结核菌是否对氟嗪酸已经产生耐药,如何划分结核菌对氟嗪酸敏感与耐药界限是临床工作中殛待解决的问题.……

结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素与结核病

细菌黏附（bacterial adherence）是细菌与宿主细胞之间相互作用的复杂过程，是细菌侵入宿主细胞的第一步，也是细菌寄生活动的基础和前提条件。细菌的黏附素是细菌在其表面表达或其分泌的参与黏附宿主细胞的一种物质。有关细菌与动物细胞粘附的研究始于20世纪之初，直至1980年前后细菌的粘附素的概念才逐渐地系统、明确。

免疫学和结核菌持留现象

结核分支杆菌的耐药性和持留现象是关系结核病临床疗效和结核病流行控制的两大课题.结核杆菌能存在人体内数十年并不复制繁殖,但在一定条件下可以启动结核菌的复制,通常情况下,持留结核菌对化疗药物处于耐受状态,这对结核病在全球范围内的控制和消除是一个重要的障碍.宿主的免疫系统对结核菌持留现象的形成也起着重要的关键作用.……

新型抗结核化合物体内外活性评价方法的研究进展

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的慢性呼吸道传染病,是全球十大死因之一,也是由单一传染源导致死亡的主要原因,排名高于艾滋病。2019年因TB死亡的人数是120万人[1]。MTB具有特殊的生理特征,包括生长缓慢、自然状态下基因突变率较高以及用药后易形成持留菌株等,导致TB治疗用药周期较长、患者的依从性较差,因此耐药MTB的检出率不断攀升。

CRISPR-Cas系统在结核分枝杆菌研究中的应用进展

成簇的规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和他们相关的蛋白(Cas)组成了一个新的分布于结核分枝杆菌(MTB)的获得性免疫防御系统。此外,CRISPR-Cas系统与MTB的毒力、耐药以及定向基因编辑方面可能存在重要的关系。笔者主要通过对CRISPR-Cas系统在MTB的免疫作用及其相关研究进展进行综述,以期为进一步研究MTB致病性和抗结核治疗提供一种新思路。

新型抗结核化合物体内外活性评价方法的研究进展

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的慢性呼吸道传染病,是全球十大死因之一,也是由单一传染源导致死亡的主要原因,排名高于艾滋病。2019年因TB死亡的人数是120万人[1]。MTB具有特殊的生理特征,包括生长缓慢、自然状态下基因突变率较高以及用药后易形成持留菌株等,导致TB治疗用药周期较长。

肺结核患者外周血单核细胞中差异表达miRNA的筛选

目的研究肺结核患者外周血单个核细胞中miRNA的差异表达。方法选择10例肺结核患者和10例健康人。每人抽取5ml静脉血,提取外周血单个核细胞(PBMC),分别将肺结核患者组和健康对照组的PBMC混合,提取总RNA和miRNA,进行miRNA荧光标记和纯化,用芯片筛选差异表达的miRNA,以校正后的两个样本间杂交信号强度的比值,来判断芯片的结果。以实时定量PCR验证。结果筛选出26个差异表达的miRNA,其中13个上调的miRNA和13个下调的miRNA。通过比较肺结核患者与健康对照者实时定量PCR结果证实,hsa-miR-1(分别为1.085±0.005,1.018±0.011)表达上调(t=4.334,P<0.01),hsa-miR-146a(分别为0.948±0.008,1.036±0.005)(t=4.460,P<0.01)与hsa-let-7e(分别为1.020±0.007,1.091±0.004)(t=4.149,P<0.01)表达下调。结论多种miRNA在肺结核患者外周血单个核细胞中有异常表达。

γ-干扰素诱导蛋白10在结核性胸膜炎辅助诊断中的应用价值

目的探讨胸腔积液γ-干扰素诱导蛋白10(IP-10)在结核性胸膜炎中的诊断价值。方法选择2010年10月至2011年10月在北京胸科医院门诊及收住入院的胸腔积液患者195例,其中结核性胸腔积液患者112例(结核性胸腔积液组),恶性肿瘤胸腔积液患者83例(恶性胸腔积液组),采用双抗夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者胸腔积液IP-10浓度,研究两组患者IP-10浓度的差异。结果结核性胸腔积液组IP-10浓度[196 855(4518～1 512 550)pg/ml]明显高于恶性胸腔积液组[7432(173～97 881)pg/ml],差异有显著统计学意义(U=575.00,P<0.001);结核性胸腔积液组IP-10阳性患者构成比为82.14%(92/112),恶性胸腔积液组IP-10阳性患者构成比为6.02%(5/83),两组比较差异有显著统计学意义(χ2=110.49,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,胸腔积液中IP-10的诊断临界值为10 964pg/ml,诊断敏感度为82.14%(92/112),特异度为93.98%(78/83),准确度为87.18%(170/195)。结论胸腔积液IP-10水平检测对结核性胸膜炎的早期诊断与鉴别诊断具有重要价值。

结核分枝杆菌天然黏附素HBHA的制备及其检测应用

目的探讨HBHA在ELISA检测结核病方面的应用。方法将BCG培养至稳定生长期将其苏通培养基上清通过CL-6B层折柱．利用含NaCL的PBS溶液梯度洗脱得到天然HBHA．然后以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组血清各47例进行ELISA检测抗HBHA抗体水平。结果在进行梯度洗脱时含有375mMNaCL的PBS洗脱液可以获得较纯的天然HBHA蛋白。ELISA检测结果表明肺结核组和肺外结核组的血清抗体水平高于PPD阳性和PPD阴性健康对照组（x^2=36．48，P〈0．01），肺结核组和肺外结核组之间（x^2=0.27。P〉0．05）、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间（x^2=0．30，P〉0.05）血清抗体水平没有显著差异。结论利用天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白进行ELISA结核病诊断都具有较高的特异性和敏感性，可以较好地用于结核病的诊断。以天然HBHA为基础的血清学诊断方法具有更好的敏感性和特异性。

用变性高压液相色谱技术检测耐氧氟沙星的结核分枝杆菌临床株

目的利用变性高压液相色谱（DHPLC）技术快速检测结核分枝杆菌gyrA基因的突变，从而对结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物做出初步判断。方法提取试验菌株基因组DNA，扩增gyrA基因的氟喹诺酮药物耐受决定区（QRDR）核酸片段；分别与H37Rv标准株（或者含有单纯Ser284突变的临床分离株作为标准）的相应PCR产物混合、杂交后，利用WAVE核苷酸片段分析系统对各杂交产物进行DHPLC检测；序列测定结果与相应的DHPLC检测结果进行比较以验证DHPLC检测的准确性。采用2mg/L的药物浓度进行氧氟沙星（OFLX）药物敏感性试验，确定101株结核分枝杆菌临床分离株对OFLX的敏感性，通过比较药物敏感性和DHPLC检测结果，建立两者之间的对应关系。结果利用DHPLC检测QRDR突变与序列测定具有同样的检出率（100％），两者都能够很好地检测QRDR突变。采用单纯含有Ser284突变的临床分离株代替H37Rv作为标准进行DHPLC检测，可以检测出除Ser284突变点外所有的点突变形式。在101株结核分枝杆菌临床分离株中，有49株对2mg／L OFLX敏感；52株耐受。52株耐药菌株中，有27株能够通过序列测定和DHPLC法得到准确判定。采用含有单纯Ser284突变的临床分离株作为标准进行DHPLC检测菌株的耐药性，检测结果更准确。结论DHPLC法是快速检测出结核分枝杆菌gyrA基因碱基突变的好方法，但是碱基突变与结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物存复杂的关系，因此该方法应用于临床检测尚需进一步验证。

结核分枝杆菌对人急性白血病单核细胞株THP-1凋亡和死亡水平的影响

目的通过对不同毒力的结核分枝杆菌感染细胞后的细胞凋亡和死亡程度的检测,以期发现结核分枝杆菌和细胞相互作用的新的方向和观点,以及对结核病免疫学发病机制的新认识。方法选用不同毒力的结核分枝杆菌H37Ra、H37Rv及北京基因型敏感菌株(BJTB)分别感染人的巨噬细胞THP-1细胞株,模拟细胞体外感染的过程。以流式细胞仪检测细胞凋亡水平,免疫荧光检测细胞的凋亡蛋白的分布,末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记染色检测细胞晚期凋亡的变化,台盼兰染色检测细胞死亡水平的变化。结果H37Ra引起THP-1细胞的凋亡水平最高,H37Rv次之,BJTB引起的凋亡水平最低。BJTB引起的死亡水平最高,H37Rv次之,H37Ra最低。结论毒力不同的结核分枝杆菌刺激细胞后和细胞的相互作用不同,毒力越高引起的凋亡水平越低,毒力越低引起的凋亡水平越高;对死亡水平的影响是毒力越高的结核分枝杆菌引起的死亡水平越高,毒力越低引起的死亡水平越低。