抗肿瘤雷公藤内酯醇半合成衍生物理化性质及其有关物质的研究

目的研究雷公藤内酯醇半合成衍生物（MC002）的理化性质和有关物质,为剂型设计提供依据。方法采用紫外分光光度法测定MC002在甲醇中的吸收系数;采用红外光谱仪测定MC002的红外吸收光谱;按中国药典2010版二部中溶解度的测定方法测定在不同溶剂中的近似溶解度;采用摇瓶法测定MC002在正辛醇-水、正辛醇-pH=7.4磷酸盐缓冲液中的油水分配系数;用Thiele管测定熔点;采用X-射线粉末衍射法测定其晶型。结果 MC002在甲醇中的吸收系数（E1%）为226.23±29.18;样品红外吸收光谱图与标准品谱图基本一致,易溶于水、甲醇、乙醇、丙酮,微溶于氯仿和乙酸乙酯,在乙醚中极微溶解;在正辛醇-水和正辛醇-pH=7.4磷酸盐缓冲液中的分配系数分别为0.074 0和1.080;熔点为50∽52℃;X-射线粉末衍射说明MC002为非结晶型粉末。3批有关物质测定均〈1%,样品纯度〉99%。结论 MC002是一个亲水性很强的盐类药物,本实验确定的MC002部分理化性质和有关物质分析,可为其生物药剂学的研究及剂型设计提供依据。

抗肿瘤化合物MC002的活性代谢产物雷公藤内酯醇在大鼠体内药代动力学与组织分布

目的探讨抗肿瘤前药MC002的活性代谢产物雷公藤内酯醇(TP)在大鼠体内的药代动力学和组织分布。方法 SD大鼠iv给予MC002 0.25～2.25 mg.kg-1,于不同时间点采集血样;另SD大鼠iv给予MC002 0.75 mg.kg-1后于5,15,30和90 min后采集心、肝、脾、肺、胃等组织样品和血样。应用高效液相色谱-质谱联用方法测定全血和组织中TP的含量。DAS 2.0软件计算相关药代动力学参数。结果雄性SD大鼠iv给予MC002 0.25,0.75和2.25 mg.kg-1后,MC002在大鼠体内迅速转化为活性代谢产物TP,cmax分别为105±2,257±74和(747±154)μg.L-1;AUC分别为1827±151,5604±1141和(16 833±3654)μg.min.L-1,与MC002给药剂量呈线性正相关,消除半衰期分别为31.7±7.3,23.8±3.4和(19.2±2.5)min。大鼠iv给予MC002 0.75 mg.kg-1后5 min,大鼠各组织活性代谢产物TP含量达到最高,30 min后浓度大幅下降。结论 MC002在大鼠体内迅速转化为活性代谢产物TP。在MC002 0.25,0.75和2.25 mg.kg-1范围内,活性代谢产物TP代谢符合线性药动学特点,TP在大鼠体内广泛分布,快速消除。

MC002对A-549、HT-1080荷瘤小鼠肿瘤生长抑制作用的研究

目的MC002是雷公藤内酯醇的半合成衍生物,本实验主要观察和评价MC002对人肺腺癌A-549、人纤维肉瘤HT-1080小鼠模型的肿瘤抑制作用。方法用Balb/C裸小鼠接种人肺腺癌A-549瘤株和人纤维肉瘤HT-1080瘤株造成小鼠肿瘤模型,以MC002对荷瘤小鼠的相对肿瘤增殖率、瘤重、抑瘤率为指标评价MC002对小鼠的抑瘤作用。结果对于两种不同瘤株,MC002各剂量组体积明显小于模型对照组,瘤重均降低,在大剂量组1.5(mg.kg-1)时T/C%在给药几次后均小于60%(P<0.05),且具有量效关系。结论MC002能有效抑制人肺腺癌A-549、人纤维肉瘤HT-1080荷瘤小鼠体内肿瘤生长。MC002有可能发展成为一种新型抗癌药。

雷公藤内酯醇前药MC002在大鼠体内药代性别差异研究

目的研究雷公藤内酯醇前药MC002在♀♂大鼠体内代谢是否存在差异。方法两组实验各设♀♂对照。♀♂SD大鼠静脉注射给予MC002 0.75 mg.kg-1,于不同时间点采集全血样品,另♀♂SD大鼠静脉注射给予MC0020.75 mg.kg-1,于5、15、30、90 min后采集各组织样品。样品用乙酸乙酯提取后,LC-MS/MS方法测定,DAS2.0计算药代动力学参数。结果 MC002在♀♂大鼠体内均迅速转化为代谢产物PG490,♀♂大鼠的AUC分别为(8046.2±634.75)和(5604.0±1140.9)μg·min·L-1,CL分别为(0.089±0.01)和(0.128±0.02)L·min-1·kg-1,两组参数统计学上有显著性差异(P<0.05),♀♂大鼠组织内浓度变化趋势相同,给药后5 min各组织药物浓度均达到最大值。结论 MC002在大鼠体内迅速转化为活性代谢产物PG490,PG490在大鼠体内代谢呈现出较明显的性别差异,总体表现为♀大鼠血中药物暴露高,代谢慢。♀♂大鼠组织中药物浓度变化趋势无明显差别。

重组水蛭素-2鼻腔给药纳米粒冻干粉制备工艺及体外渗透特性研究

目的:优选重组水蛭素-2(rHV2)鼻腔给药纳米粒冻干粉最佳制备工艺;考察rHV2纳米粒冻干粉稳定性及经家兔鼻黏膜的体外渗透特性。方法:选用不同冻干保护剂制备水蛭素纳米粒冻干粉末,以外观、再分散性及包封率作为评价指标,对冻干保护剂及制备工艺进行优选,并考察了光照、高温等因素对冻干粉的影响;采用直立式扩散池法,以家兔鼻中隔黏膜为渗透屏障,测定rHV2壳聚糖溶液、rHV2纳米粒溶液及冻干粉的渗透系数(P),并计算与rHV2生理盐水溶液的促渗比(ER)。结果:rHV2鼻腔给药纳米粒冻干粉最佳制备工艺为:用5%甘露醇与葡萄糖(1∶1)作为冻干保护剂,于-70℃预冻24h后,置真空冻干箱中冷冻干燥,24h后取出,该冻干粉中rHV2的含量为1.1μg/mg。光照对rHV2纳米粒冻干粉的外观、再分散性以及包封率影响均较小,而高温对rHV2纳米粒冻干粉的影响较大;rHV2壳聚糖纳米粒具有较高的渗透系数,是生理盐水组的5倍多,冻干粉仍然保持了良好的渗透性。结论:壳聚糖鼻腔给药纳米粒冻干粉有可能成为rHV2鼻腔给药的良好给药剂型。

抗肿瘤化合物MC004对雄性大鼠生殖毒性的研究

背景与目的:研究新型抗肿瘤化合物MC004对雄性大鼠的生殖毒性。材料与方法:健康成熟雄性Wistar大鼠48只,随机分为3个实验组和1个对照组,实验组分别隔日尾静脉注射给予0.25、0.50、0.75 mg/kg的MC004,共28 d。对照组给予相同体积的生理盐水。给药结束后24 h剖杀动物,用计算机辅助精子分析系统分析精子数量和活力,显微镜下观察精子形态。结果:与对照组相比,MC004 0.75 mg/kg组大鼠体重增长缓慢;各给药组大鼠睾丸、附睾的绝对重量及脏器系数均显著降低(P<0.01);各给药组大鼠的精子数量显著降低(P<0.01),0.50 mg/kg和0.75 mg/kg剂量组的精子运动速度降低明显(P<0.01);各实验组大鼠均出现大量畸形精子(P<0.01)。结论:MC004隔日按0.25 mg/kg剂量尾静脉注射,28 d后即对雄性大鼠生殖系统产生明显毒性。

雷公藤内酯醇在不同种属肝微粒中体外稳定性性别差异研究

目的研究雷公藤内酯醇(PG490)在不同种属不同性别肝微粒代谢稳定性差异。方法药物加入大鼠、比格犬以及人不同性别肝微粒体中孵育,于不同时间点加入终止剂,LC-MS/MS测定PG490浓度,计算固有清除率CLint和肝清除率CLh。结果PG490孵育2h后雄性大鼠肝微粒体中转化了80%,而雌性大鼠转化了20%,在比格犬和人肝微粒体较稳定,孵育2h均转化不到15%。结论PG490在大鼠不同性别肝微粒中代谢统计学上有差异,而在比格犬和人肝微粒中没有表现出性别差异。

雷公藤内酯醇半合成衍生物对人结肠癌细胞系荷瘤小鼠肿瘤抑制作用的研究

目的:观察和评价雷公藤内酯醇的半合成衍生物(MC002)对人结肠癌HCT-8小鼠模型的肿瘤抑制作用。方法:用BALB/C裸小鼠接种人结肠癌HCT-8瘤株造成小鼠肿瘤模型,以MC002对荷瘤小鼠的相对肿瘤增殖率、瘤重、抑瘤率为指标评价MC002对小鼠的抑瘤作用。结果:MC002各剂量组瘤体积明显小于模型对照组,瘤重均显著降低,在1.5 mg.kg-1、1.0 mg.kg-1给药10次后T/C%均小于40%(P<0.05),且具有量效关系。结论:MC002能有效抑制人结肠癌HCT-8荷瘤小鼠体内肿瘤生长。通过深入研究MC002有可能发展成为一种新型抗癌药。

环黄芪醇对D-半乳糖致衰老小鼠的抗衰老作用

目的:探究环黄芪醇(cycloastragenol,CAG)延缓衰老作用及其机制。方法:采用D-半乳糖致小鼠衰老模型,小鼠随机分为正常组、模型组、环黄芪醇低、中、高3个剂量组(2.5,5.0,10.0 mg.kg-1)和维生素E(VE)组(2.5 mg.kg-1),除正常组ip给予等量的生理盐水外,其余各组在给药同时均ip D-半乳糖(125 mg.kg-1),连续给药6周。测定心、肝及皮肤等组织总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HYP)的含量。结果:与正常组比较,模型组肝、心和皮肤的T-SOD,T-AOC活性以及HYP含量均显著降低,差异显著(P<0.01),MDA含量明显增加,有显著性差异(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,环黄芪醇能显著提高小鼠肝、心和皮肤的T-AOC,T-SOD活性(P<0.01),对肝、心和皮肤的MDA含量呈显著的降低作用(P<0.01,P<0.05),并可提高皮肤、心和肝等组织中HYP含量(P<0.01,P<0.05)。但环黄芪醇对上述指标的影响并未呈现明显的剂量依赖关系。结论:环黄芪醇具有显著的抗小鼠衰老作用,主要作用机制可能与提高T-SOD,T-AOC活性,降低MDA含量,增加HYP含量有关。

雷公藤内酯醇与不同种属血浆蛋白结合率的研究

目的考察雷公藤内酯醇在不同种属的血浆蛋白结合率。方法超滤法分离结合型药物和游离型药物,LC-MS/MS法测定药物的浓度。结果雷公藤内酯醇在不同浓度下与大鼠血浆的蛋白结合率分别是(25.4±1.8)、(12.7±8.5)和(11.5.±3.2)ng/ml,与比格犬血浆的蛋白结合率分别是(16.1±2.2)、(28.6±0.3)和(25.0±1.2)ng/ml;与人血浆的蛋白结合率分别是(21.5±2.1)、(18.9±5.7)和(21.3±2.6)ng/ml。结论雷公藤内酯醇在实验浓度范围内与大鼠、比格犬和人血浆中蛋白结合率均较低,相同浓度雷公藤内酯醇与不同种属血浆蛋白结合率,以犬血浆最高[(28.6±0.3)ng/ml],与大鼠[(25.4±1.8)ng/ml]、人血浆[(18.9±5.7)ng/ml]相比均具有统计学差异(P<0.05),大鼠与人血浆之间无统计学差异。各种属血浆蛋白结合率与药物浓度无明显依赖关系。

MC004对雄性大鼠生育能力的影响

目的:研究新型雷公藤甲素衍生物MC004对雄性大鼠生育能力的影响。方法:雄性Wistar大鼠48只,随机分为4组。隔日尾静脉注射,分别给予0,0.25,0.50,0.75mg·kg-1的MC004,共28d。观察临床症状,记录动物体重,进行生育力检查并观察孕鼠各项妊娠指标变化。结果:与对照组相比,0.25mg·kg-1剂量组大鼠各项指标均未见明显变化;0.75mg·kg-1组大鼠生育率明显降低(P<0.01);与0.75mg·kg-1剂量组雄性大鼠交配的雌性大鼠子宫重,胎盘重,卵巢重,平均着床数,活胎窝数,总活胎数,窝均活胎数,活胎率均明显降低(P<0.05或P<0.01),着床前死亡率和着床后死亡率显著升高(P<0.01);与各剂量组雄性大鼠交配的雌鼠在平均黄体数和吸收胎数上差异无显著性(P>0.05)。结论:雄性大鼠隔日尾静脉注射给药28d0.75mg·kg-1剂量的MC004,对生殖系统产生明显毒性,导致雄性大鼠生育力降低。

MC004对大鼠胚胎中脑细胞增殖和分化的影响

目的:探讨新型抗肿瘤化合物MC004对胚胎发育的影响。方法:从孕13日龄大鼠胚胎中采集中脑细胞,将其稀释到细胞密度为5×106/ml的细胞悬液,细胞存活率>95%。6孔板和96孔板的每个孔分别注入10μl细胞悬液,在37℃5%二氧化碳培养箱孵化2h。孵化后,6孔板每孔分别加入不同浓度的MC004(5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.0195、0.0098、0.0049μg/ml)终体积为2ml,96孔板的每个孔分别加入不同浓度的MC004(5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.0195μg/ml)终体积为200μl,对照组采用相应体积的Ham’sF-12完全培养基,体外培养5d后,弃培养液,细胞固定和染色。在光学显微镜下计数6孔板内微团集落数目,计算细胞分化半数抑制浓度。用酶标仪570nm波长处测定96孔板各孔吸光值,计算细胞增殖半数抑制浓度。结果:不同MC004剂量组细胞集落和集落间神经纤维束减少,有明显量效关系。MC004半数细胞分化抑制浓度为0.0624μg/ml,MC004半数细胞增殖抑制浓度为0.1963μg/ml。结论:MC004在体外能非特异性地抑制细胞增殖和分化,可能具有致畸作用。