胰岛β-细胞的衰老

随着年龄的增加,机体血糖水平也逐渐升高,糖耐量试验也出现改变;然而,血浆胰岛素水平不仅没有下降,反而升高。这种现象与胰岛β-细胞衰老有着密切的关系。动物实验表明,机体血糖、糖耐量试验出现改变的时候,β-细胞分泌胰岛素的功能下降,而血浆胰岛素的升高,则是由于老龄动物较青龄动物β-细胞数量多的结果。这可能是随血糖变化而出现的代偿变化的缘故。代偿变化不能完全补偿血糖的改变。不仅如此,β-细胞的其它一些功能也出现与年龄相关的改变,这些功能都与分泌胰岛素有关。因此,胰岛β-细胞的衰老问题,对于老年性糖尿病来说,可能是相当重要的。

热量限制对人二倍体成纤维细胞衰老相关基因表达的影响

目的观察热量限制对人二倍体成纤维细胞IMR-90衰老相关基因表达的影响。方法应用RT-PCR和Western blot的方法，对含低浓度（3．0mmol／L）、高浓度（22．5mmol／L）葡萄糖和正常对照组（含5．0mmol／L葡萄糖）培养条件下的IMR-90细胞衰老相关基因p16、p21和p53的mRNA和蛋白表达水平进行分析。结果与对照组和高糖培养条件下的早期和晚期细胞相比较，低浓度葡萄糖培养条件下的早期和晚期细胞p16和p21在mRNA水平均显著下降（P〈0．05）；低浓度葡萄糖组、对照组和高浓度葡萄糖培养组晚期细胞p16蛋白水平分别为4．2、7．4、9．7，比各自早期细胞表达（0．6、1．0、1．8）增加5～7倍；低浓度葡萄糖组，对照组和高浓度葡萄糖培养早期细胞和低糖培养晚期细胞p21蛋白水平差异无统计学意义，分别为1．1、1．0、1．3、0．9，但与对照组和高糖培养晚期细胞p21蛋白水平（3．1、4．2）相比较则降低3～4倍；各组培养条件下的早期和晚期细胞中p53表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论各组晚期细胞比各自早期细胞p16基因表达增高；对照组和高糖培养条件下的晚期细胞比各自早期细胞p21基因表达增高；低浓度葡萄糖培养延缓IMR-90细胞衰老并伴有p16和p21基因表达下调；p53基因可能不是IMR-90细胞复制衰老主要调节因子。

胰高血糖素样肽1通过调控葡萄糖调节蛋白78表达改善高糖及波动性高糖诱导的内皮细胞内质网应激及凋亡

目的探讨胰高血糖素样肽1（GLP-1）对持续性高糖和波动性高糖诱导的内皮细胞内质网应激及凋亡的保护作用和机制。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECS）分成6组：正常葡萄糖对照组（5．5mmol／L葡萄糖培养）、持续性高糖tN30mmol／L葡萄糖培养）、波动性高糖组（5．5mmol／L和30mmol／L葡萄糖培养，每12h交替1次）、正常葡萄糖＋10nmol／LGLP-1组、持续性高糖＋10nmol／LGLP-1组、波动性高糖＋10nmol／LGLP．1组。后3组均先加入10nmol／LGLP-1预处理半小时，后以相应浓度葡萄糖培养。各组细胞经处理48h后，流式细胞仪测定细胞凋亡率，Westernblotting法检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）表达水平的变化。应用30mmol／L高糖处理HUVECS不同时间（0、3、6、12、24、48h），Westernblotting法检测加入GLP-1前后GRP78蛋白表达水平的变化。两组问比较采用LSD—t检验，多组比较采用单因素方差分析。结果将正常对照组的细胞凋亡率设定为1，波动性高糖组细胞凋亡率增至1．20＋0．05，与对照组差异有统计学意义（F=45．086，P〈0．05）；波动性高糖＋GLP-1组细胞凋亡率降至0．87-＋0．01，与波动性高糖组差异有统计学意义（t=17．400，P〈0．05）。与对照组（0h组，设定为1）相比，高糖处理HUVECS3hGRP78的表达量升高至1．62±0．48，差异有统计学意义（t=2．584，P〈0．05）；6h达到高峰（2．82±0．59），与对照组差异有统计学意义（t=6．123，P〈0．05）；12h后开始下降，高糖作用48h下降至0．98±0．59，与对照组相比无统计学差异（t=0．378，P〉0．05）。波动性高糖组GRP78的表达水平降至（0．77±0．04），与持续性高糖组（0．96±0．10）相比，差异有统计学意义（t=3．134，P〈0．05）。结论持续性高糖和波动性高糖均可引起内皮细胞发生内质网应激和凋亡，后者通过进一步抑制防御蛋白GRP78的表达，加重内质网应激；GLP-1可通过增加细胞内GRP78的表达改善内质网应激进而改善凋亡。

微小RNA-92a抑制剂对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨微小RNA（microRNA，miR）92a抑制剂对高糖诱导的内皮细胞损伤的作用。方法分离原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs），脂质体转染miR？92a抑制剂或阴性对照，采用5 mmol/L正常浓度葡萄糖或30 mmol/L葡萄糖刺激HUVECs 48 h后，分为4组：空白组（5 mmol/L葡萄糖），高糖组（30 mmol/L葡萄糖），阴性对照＋高糖组（转染阴性对照＋30 mmol/L葡萄糖处理），miR？92a抑制剂＋高糖组（转染miR？92a抑制剂＋30 mmol/L葡萄糖处理）。处理后，用荧光实时定量PCR法分析miR？92a水平，Hoechst染色观察细胞核改变，MTS观察HUVECs活力，Western blotting检测caspase？3和cleaved caspase？3蛋白表达。2组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果高糖组（30 mmol/L）HUVECs与空白对照组相比，miR？92a水平增加31%（1.31±0.37比1，t=1.93，P〈0.05）。细胞数目减少，排列不规则，轮廓模糊。细胞核染色质浓缩凝集、边缘化，凋亡小体增加。细胞活力下降19%（81%±2%比1，t=-29.85，P〈0.01），cleaved caspase？3/caspase？3增加24%（0.31±0.07比0.25±0.02， t=2.18，P〈0.05）。miR？92a抑制剂＋高糖组HUVECs与高糖组相比，形态损伤减轻，凋亡小体减少，细胞活力增加9%（88%±11%比81%±2%，t=1.82，P〈0.05），cleaved caspase？3/caspase？3减少26%（0.23±0.03比0.31±0.07，t=-2.65，P〈0.05）。结论 miR？92a抑制剂可缓解高糖诱导的内皮细胞形态损伤、活力抑制，减少caspase？3激活。miR？92a具有成为防治糖尿病血管并发症靶点的临床价值。