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脱氧尿嘧啶核苷酸掺入量对尿苷酶抗污染效果的影响
被引量:
11
1
作者
杜绍财
吴娟
+2 位作者
张敏
刘峰
韩建德
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期339-341,共3页
目的 了解脱氧尿嘧啶核苷酸 (dUTP)掺入量与尿苷酶 (UDG)抗污染的关系。方法 通过聚合酶链反应将 5 0 %dUTP和全dUTP掺入HCVcDNA ,并观察UDG的抗污染效果。结果 0 0 5U、0 1U、0 2U的UDG 37℃消化 6 0min ,PAGE检测可抗 10 1~ ...
目的 了解脱氧尿嘧啶核苷酸 (dUTP)掺入量与尿苷酶 (UDG)抗污染的关系。方法 通过聚合酶链反应将 5 0 %dUTP和全dUTP掺入HCVcDNA ,并观察UDG的抗污染效果。结果 0 0 5U、0 1U、0 2U的UDG 37℃消化 6 0min ,PAGE检测可抗 10 1~ 10 85 0 %dU DNA模板污染。 0 1UUDG 37℃ 10min能抗 10 6,2 0min~ 30min可抗 10 5,PAGE虽阴性 ,但DNA EIA杂交A值0 6 17,仍为阳性 ;40min可抗 10 3,未经杂交证实。 37℃消化 2 0min电泳检测可抗 10 1~ 10 8全dU DNA污染 ,DNA EIA杂交A值在 0 0 0 5~ 0 0 49均为阴性。结论 本文研究结果证实 ,用 5 0 %dU DNA为模板 ,37℃ 10~ 2 0min时 ,抗污染效果较差 ,需增加抗污染时间。应用全dU DNA为模板时 。
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关键词
聚合酶链反应
尿苷酶
丙型肝炎病毒
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职称材料
采用十二烷基硫酸钠抑制PCR产物中残留尿苷酶
被引量:
2
2
作者
杜绍财
张敏
+4 位作者
刘峰
韩建德
吴娟
陶其敏
冯百芳
《北京大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期729-731,共3页
目的 :研究抑制PCR产物中残留尿苷酶 (uracilDNAglycosylase ,UDG)活性的试剂。 方法 :采用DNA EIA技术检测在全dU DNA扩增物中含有稳定剂和不含稳定剂的样品 ,置室温 2 4h和 37℃ 4 8h的DNA杂交百分率。结果 :(1)在PCR产物中加入稳定剂...
目的 :研究抑制PCR产物中残留尿苷酶 (uracilDNAglycosylase ,UDG)活性的试剂。 方法 :采用DNA EIA技术检测在全dU DNA扩增物中含有稳定剂和不含稳定剂的样品 ,置室温 2 4h和 37℃ 4 8h的DNA杂交百分率。结果 :(1)在PCR产物中加入稳定剂A液和B液置室温 2 4h ,取 5 μl直接杂交 ,其杂交百分率为 6 1.4 70 %和6 8.996 % ,对照组为 99.2 83%。 (2 )在 30 μlPCR产物中加入稳定剂后 ,并加 1×PCR缓冲液稀释至 70 μl,置 37℃4 8h取 10 μl样品杂交 ,5 μl和 2 .5 μlA液组杂交百分率为 71.0 92 %和 6 7.6 91% ,对照组为 6 8.0 2 0 %和 6 3.90 6 %。5 μl和 2 .5 μlB液组杂交百分率为 91.333%和 80 .30 7% ,对照组为 6 3.90 6 %和 6 8.0 2 0 %。 结论 :B液可抑制PCR产物残留UDG活性 ,对保护全dU
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关键词
尿嘧啶DNA糖基化酶
稳定剂
基因扩增
聚合酶链反应
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职称材料
稳定剂保护PCR扩增dU-DNA效果研究
被引量:
4
3
作者
杜绍财
张敏
+3 位作者
韩建德
吴娟
冯百芳
陶其敏
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
2003年第2期4-6,共3页
目的 :了解 94℃灭活UDG与不灭活及扩增产物加稳定剂与不加稳定剂对DNA杂交效率的影响。方法 :采用微孔板DNA杂交技术检测PCR扩增dU -DNA杂交效果。以不加UDG组DNA杂交A值为对照、计算杂交百分率。结果 :不加UDG组扩增前后未经 94℃灭...
目的 :了解 94℃灭活UDG与不灭活及扩增产物加稳定剂与不加稳定剂对DNA杂交效率的影响。方法 :采用微孔板DNA杂交技术检测PCR扩增dU -DNA杂交效果。以不加UDG组DNA杂交A值为对照、计算杂交百分率。结果 :不加UDG组扩增前后未经 94℃灭活处理 - 2 0℃保存 2 0h杂交效率为 90 .2 93% ,加UDG组在 4℃、室温、37℃放置 2 0h ,杂交效率为 2 0 .15 % ,2 1.37% ,2 9.37%。加UDG并增加 94℃灭活步骤、37℃水浴放置 2 0h ,杂交效率为 73.5 7% ,78.82 %。在此基础上加入稳定剂 37℃水浴 4 3h杂交效率达到 99.88%~ 10 0 %。 37℃水浴 6 7h杂交效率仍达到 86 .0 6 %~ 97.10 %。结论 :上述结果证实用于抗污染时 ,扩增前后增设 94℃灭活 10min可提高杂交效率。加入稳定剂可使杂交A值 1.80达到对照组A值 1.81水平。提示稳定剂对保护PCR扩增dU -DNA有极其重要作用。
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关键词
UDG
稳定剂
微孔板DNA杂交
PCR
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职称材料
残留尿苷酶对HCV cDNA破坏作用的研究
被引量:
3
4
作者
杜绍财
季颖
朱凌
《中国医师杂志》
CAS
2000年第12期713-715,共3页
为了解残留尿苷酶对dUTP掺入cDNAPCR产物的破坏作用。采用PAGE和DNA -EIA杂交技术检测抗污染效果和DNA杂交百分率。结果表明⑴每反应 0 2单位尿苷酶 37℃ 2 0min可获得良好的抗污染效果。⑵ 94℃ 10min可灭活尿苷酶的活性。对照组PCR...
为了解残留尿苷酶对dUTP掺入cDNAPCR产物的破坏作用。采用PAGE和DNA -EIA杂交技术检测抗污染效果和DNA杂交百分率。结果表明⑴每反应 0 2单位尿苷酶 37℃ 2 0min可获得良好的抗污染效果。⑵ 94℃ 10min可灭活尿苷酶的活性。对照组PCR产物室温放置 65h杂交效率为 94 18%。试验组 - 2 0℃保存 65h杂交效率为 87 69%、77 2 4 %、76 83% ,室温 65h杂交效率为 74 77%、72 50 %、70 2 9% ,对照组与试验组间比较差异有显著性 (P <0 0 5)。试验组间比较差异无显著性 (P >0 0 5)。以上结果证实对照组室温放置 65h杂交效率下降 5 82 % ,试验组 - 2 0℃保存下降 19 4 1% ,放置 65h下降 2 7 4 8% ,可能与残留尿苷酶有关。
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关键词
尿苷酶
聚合酶链反应
脱氧尿嘧啶核苷三磷酸
原文传递
基因扩增技术中抗污染的研究
被引量:
2
5
作者
韩建德
杜绍财
+1 位作者
刘峰
邱国华
《中国医师杂志》
CAS
2004年第12期1594-1596,共3页
目的 了解残留UDG对dU -DNAPCR产物的影响及灭活UDG时对Taq -P的影响。方法 采用微孔板杂交技术检测dU -DNAPCR产物 3 7℃放置 2 0h杂交百分率 ;检测在 -2 0℃、4℃、室温、3 7℃时不同保存条件下的杂交百分率 ;94℃灭活 10min对Taq -...
目的 了解残留UDG对dU -DNAPCR产物的影响及灭活UDG时对Taq -P的影响。方法 采用微孔板杂交技术检测dU -DNAPCR产物 3 7℃放置 2 0h杂交百分率 ;检测在 -2 0℃、4℃、室温、3 7℃时不同保存条件下的杂交百分率 ;94℃灭活 10min对Taq -P活性的影响。结果 加 0 2单位、1 0单位UDG组比不加UDG组杂交A值下降 13 2 81%~ 2 0 5 5 7%。t检验差异有显著性 (t=2 85 5 ,2 869,P <0 0 5 ) ;经 94℃灭活产物组 3 7℃杂交A值比 -2 0℃A值下降 5 5 47% ,未经 94℃灭活杂交A值下降 10 3 45 % ;94℃预变性 3 0s杂交A值为 98 714 %、10min 3 0s组杂交A值为 96 818%。结论 以上结果提示经 94℃加热灭活对PCR产物保存有重要作用 ,不仅对灭活UDG有作用而且还可灭活来源于UDG以外可破坏DNA的酶。表明含UDG组杂交A值比不加UDG组低13 2 81%~ 2 0 5 5 7%与UDG有关。
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关键词
灭活
术中
基因扩增技术
活产
微孔板杂交技术
DNA
放置
UDC
百分率
结论
原文传递
题名
脱氧尿嘧啶核苷酸掺入量对尿苷酶抗污染效果的影响
被引量:
11
1
作者
杜绍财
吴娟
张敏
刘峰
韩建德
机构
北京
大学人民医院肝病研究所
北京
大学人民医院
北京肝炎试剂研制中心
北京
大学人民医院
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期339-341,共3页
基金
卫生部"九五"攻关项目
No .96 90 6 0 30 6
文摘
目的 了解脱氧尿嘧啶核苷酸 (dUTP)掺入量与尿苷酶 (UDG)抗污染的关系。方法 通过聚合酶链反应将 5 0 %dUTP和全dUTP掺入HCVcDNA ,并观察UDG的抗污染效果。结果 0 0 5U、0 1U、0 2U的UDG 37℃消化 6 0min ,PAGE检测可抗 10 1~ 10 85 0 %dU DNA模板污染。 0 1UUDG 37℃ 10min能抗 10 6,2 0min~ 30min可抗 10 5,PAGE虽阴性 ,但DNA EIA杂交A值0 6 17,仍为阳性 ;40min可抗 10 3,未经杂交证实。 37℃消化 2 0min电泳检测可抗 10 1~ 10 8全dU DNA污染 ,DNA EIA杂交A值在 0 0 0 5~ 0 0 49均为阴性。结论 本文研究结果证实 ,用 5 0 %dU DNA为模板 ,37℃ 10~ 2 0min时 ,抗污染效果较差 ,需增加抗污染时间。应用全dU DNA为模板时 。
关键词
聚合酶链反应
尿苷酶
丙型肝炎病毒
分类号
R512.63 [医药卫生—内科学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
采用十二烷基硫酸钠抑制PCR产物中残留尿苷酶
被引量:
2
2
作者
杜绍财
张敏
刘峰
韩建德
吴娟
陶其敏
冯百芳
机构
北京
大学人民医院肝病研究所
北京肝炎试剂研制中心
出处
《北京大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期729-731,共3页
基金
卫生部"九五"攻关项目 (96-90 6-0 3 -0 60 )~~
文摘
目的 :研究抑制PCR产物中残留尿苷酶 (uracilDNAglycosylase ,UDG)活性的试剂。 方法 :采用DNA EIA技术检测在全dU DNA扩增物中含有稳定剂和不含稳定剂的样品 ,置室温 2 4h和 37℃ 4 8h的DNA杂交百分率。结果 :(1)在PCR产物中加入稳定剂A液和B液置室温 2 4h ,取 5 μl直接杂交 ,其杂交百分率为 6 1.4 70 %和6 8.996 % ,对照组为 99.2 83%。 (2 )在 30 μlPCR产物中加入稳定剂后 ,并加 1×PCR缓冲液稀释至 70 μl,置 37℃4 8h取 10 μl样品杂交 ,5 μl和 2 .5 μlA液组杂交百分率为 71.0 92 %和 6 7.6 91% ,对照组为 6 8.0 2 0 %和 6 3.90 6 %。5 μl和 2 .5 μlB液组杂交百分率为 91.333%和 80 .30 7% ,对照组为 6 3.90 6 %和 6 8.0 2 0 %。 结论 :B液可抑制PCR产物残留UDG活性 ,对保护全dU
关键词
尿嘧啶DNA糖基化酶
稳定剂
基因扩增
聚合酶链反应
Keywords
Uracil DNA glycosylase
Stablizing agent
Gene amplification
Polymerase chain reaction
分类号
Q342 [生物学—遗传学]
下载PDF
职称材料
题名
稳定剂保护PCR扩增dU-DNA效果研究
被引量:
4
3
作者
杜绍财
张敏
韩建德
吴娟
冯百芳
陶其敏
机构
北京
大学人民医院肝病研究所
肝病研究所
北京肝炎试剂研制中心
出处
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
2003年第2期4-6,共3页
基金
卫生部"九五"攻关项目编号 :96-90 6-0 3 -0 6
文摘
目的 :了解 94℃灭活UDG与不灭活及扩增产物加稳定剂与不加稳定剂对DNA杂交效率的影响。方法 :采用微孔板DNA杂交技术检测PCR扩增dU -DNA杂交效果。以不加UDG组DNA杂交A值为对照、计算杂交百分率。结果 :不加UDG组扩增前后未经 94℃灭活处理 - 2 0℃保存 2 0h杂交效率为 90 .2 93% ,加UDG组在 4℃、室温、37℃放置 2 0h ,杂交效率为 2 0 .15 % ,2 1.37% ,2 9.37%。加UDG并增加 94℃灭活步骤、37℃水浴放置 2 0h ,杂交效率为 73.5 7% ,78.82 %。在此基础上加入稳定剂 37℃水浴 4 3h杂交效率达到 99.88%~ 10 0 %。 37℃水浴 6 7h杂交效率仍达到 86 .0 6 %~ 97.10 %。结论 :上述结果证实用于抗污染时 ,扩增前后增设 94℃灭活 10min可提高杂交效率。加入稳定剂可使杂交A值 1.80达到对照组A值 1.81水平。提示稳定剂对保护PCR扩增dU -DNA有极其重要作用。
关键词
UDG
稳定剂
微孔板DNA杂交
PCR
Keywords
Uracil DNA Gly cosylase(UDG)
Stablizer
Microwell Hybridization
PCR
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
残留尿苷酶对HCV cDNA破坏作用的研究
被引量:
3
4
作者
杜绍财
季颖
朱凌
机构
北京
医科大学第二临床肝病研究所
北京肝炎试剂研制中心
出处
《中国医师杂志》
CAS
2000年第12期713-715,共3页
文摘
为了解残留尿苷酶对dUTP掺入cDNAPCR产物的破坏作用。采用PAGE和DNA -EIA杂交技术检测抗污染效果和DNA杂交百分率。结果表明⑴每反应 0 2单位尿苷酶 37℃ 2 0min可获得良好的抗污染效果。⑵ 94℃ 10min可灭活尿苷酶的活性。对照组PCR产物室温放置 65h杂交效率为 94 18%。试验组 - 2 0℃保存 65h杂交效率为 87 69%、77 2 4 %、76 83% ,室温 65h杂交效率为 74 77%、72 50 %、70 2 9% ,对照组与试验组间比较差异有显著性 (P <0 0 5)。试验组间比较差异无显著性 (P >0 0 5)。以上结果证实对照组室温放置 65h杂交效率下降 5 82 % ,试验组 - 2 0℃保存下降 19 4 1% ,放置 65h下降 2 7 4 8% ,可能与残留尿苷酶有关。
关键词
尿苷酶
聚合酶链反应
脱氧尿嘧啶核苷三磷酸
Keywords
Uracil DNA glycosylase(UDG)
PCR
dUTP4
分类号
R446 [医药卫生—诊断学]
原文传递
题名
基因扩增技术中抗污染的研究
被引量:
2
5
作者
韩建德
杜绍财
刘峰
邱国华
机构
北京肝炎试剂研制中心
北京
大学人民医院肝病研究所
出处
《中国医师杂志》
CAS
2004年第12期1594-1596,共3页
基金
卫生部"九五"攻关资助项目 (96 - 90 6 - 0 3 - 0 6)
文摘
目的 了解残留UDG对dU -DNAPCR产物的影响及灭活UDG时对Taq -P的影响。方法 采用微孔板杂交技术检测dU -DNAPCR产物 3 7℃放置 2 0h杂交百分率 ;检测在 -2 0℃、4℃、室温、3 7℃时不同保存条件下的杂交百分率 ;94℃灭活 10min对Taq -P活性的影响。结果 加 0 2单位、1 0单位UDG组比不加UDG组杂交A值下降 13 2 81%~ 2 0 5 5 7%。t检验差异有显著性 (t=2 85 5 ,2 869,P <0 0 5 ) ;经 94℃灭活产物组 3 7℃杂交A值比 -2 0℃A值下降 5 5 47% ,未经 94℃灭活杂交A值下降 10 3 45 % ;94℃预变性 3 0s杂交A值为 98 714 %、10min 3 0s组杂交A值为 96 818%。结论 以上结果提示经 94℃加热灭活对PCR产物保存有重要作用 ,不仅对灭活UDG有作用而且还可灭活来源于UDG以外可破坏DNA的酶。表明含UDG组杂交A值比不加UDG组低13 2 81%~ 2 0 5 5 7%与UDG有关。
关键词
灭活
术中
基因扩增技术
活产
微孔板杂交技术
DNA
放置
UDC
百分率
结论
Keywords
PCR
Uracil DNA glycosydase(UDG)
Microplate hybridization
Anti-contamination
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
脱氧尿嘧啶核苷酸掺入量对尿苷酶抗污染效果的影响
杜绍财
吴娟
张敏
刘峰
韩建德
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001
11
下载PDF
职称材料
2
采用十二烷基硫酸钠抑制PCR产物中残留尿苷酶
杜绍财
张敏
刘峰
韩建德
吴娟
陶其敏
冯百芳
《北京大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2002
2
下载PDF
职称材料
3
稳定剂保护PCR扩增dU-DNA效果研究
杜绍财
张敏
韩建德
吴娟
冯百芳
陶其敏
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
2003
4
下载PDF
职称材料
4
残留尿苷酶对HCV cDNA破坏作用的研究
杜绍财
季颖
朱凌
《中国医师杂志》
CAS
2000
3
原文传递
5
基因扩增技术中抗污染的研究
韩建德
杜绍财
刘峰
邱国华
《中国医师杂志》
CAS
2004
2
原文传递
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