液相色谱串联质谱技术平台在临床代谢组学研究中的应用

代谢组学是研究生物体内源性代谢物质的整体及其随内因和外因变化的科学分支,是系统生物学的一个重要组成部分。代谢组学是继基因组学、蛋白组学之后又一热点学科。本文着重介绍液相串联质谱和其统计分析软件在代谢组学中的应用,和目前临床生物标志物发现上取得的成果。

高效液相色谱-串联质谱法测定人体内30种氨基酸

建立了以12种同位素标记氨基酸做内标,采用衍生化方法,LC-MS/MS采用MRM方式同时定量30种氨基酸的检测方法。生物样本加入含有同位素内标的甲醇溶液,沉淀蛋白后氮气吹干加入衍生试剂,样本氨基酸与同位素氨基酸内标同步衍生,减小实验误差。选用TC-C18色谱柱,以水-乙腈(均含有0.01%七氟丁酸和0.1%甲酸)为流动相,采用梯度洗脱进行分离,30种氨基酸及其中的同分异构体都能基线分离。选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行检测。本方法用于实时监测恶性血液病患者血浆氨基酸谱的变化,可以直接反映机体的代谢及营养状况,对患者的移植成功率及改善移植后患者的生存质量均有重要意义。

稳定同位素iTRAQ标记/高效液相色谱-串联质谱法同时定量分析人体中42种氨基酸及典型病例

建立稳定同位素iTRAQ标记/高效液相色谱-串联质谱法同时定量分析人体中42种氨基酸的方法。人生物样本经磺基水杨酸沉淀蛋白,稳定同位素iTRAQ-115衍生化后,加入iTRAQ-114同位素标记的氨基酸内标液进样,选用AAA-C18色谱柱,以水-乙腈(含有0.01%七氟丁酸、0.1%甲酸)为流动相,采用梯度洗脱进行分离,选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行检测。同位素内标消除了系统误差,实现了氨基酸的定量分析,42种氨基酸及同分异构体均能基线分离。本方法快速、灵敏、专属性强、高通量,可用于临床氨基酸代谢疾病的诊疗和营养评估。

高效液相色谱-质谱串联法测定人血清中丙戊酸钠的浓度

目的：建立高效液相色谱-质谱串联法测定人血清中游离丙戊酸钠浓度的方法。方法用中空纤维离心超滤除去样品溶液中的大分子，用AB-C18色谱柱，以0.05％乙酸铵-甲醇（45∶55）为流动相，流速为1.0 mL＆#183; min-1，柱温为30℃，用多离子监测（Q1）扫描方式进行检测，解簇电压（DP）为35 V，碰撞能量（CE）为30 eV。结果丙戊酸钠血药浓度在0.1～100.0μg＆#183; mL-1内线性关系良好（ r＝0.995），标准曲线方程为A＝4.56＆#215;104 C＋5.45＆#215;105；高、中、低3个浓度的回收率分别为81.40％，81.38％，83.24％；日内、日间精密度（ RSD）均小于15％，稳定性均良好。结论本法简便、灵敏、回收率高，重现性好，可用于患者丙戊酸钠的血药浓度监测和药代动力学研究。

LC-MS/MS检测癫痫患者神经递质类氨基酸

目的:建立液相色谱串联质谱同位素内标法检测神经递质类氨基酸并用于癫痫患者临床评价。方法:选用AAA-C18柱色谱柱,以乙腈水(含有0.01%七氟丁酸、0.1%甲酸)为流动相,采用梯度洗脱进行分离,血浆样品用iTRAQ-115衍生化试剂处理后,加入iTRAQ-114衍生化的氨基酸内标并进样,选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行检测。疾病组与健康组的统计采用t检验和主成份分析。结果:疾病组和健康组氨基酸测定结果显示:Trp、GABA两组间没有显著性差异(P>0.05),Arg、Gly、Ser、Tau、Asp、Glu、EtN、两组间有显著性差异(P<0.05),通过PCA分析显示,疾病组与健康组之间差异明显,Asp、Glu、Ser等是引起差异的主要氨基酸。结论:试验方法灵敏、专属性强,并初步的用于癫痫患者体内氨基酸评价。