Gasdermin D蛋白对内毒素导致肺泡巨噬细胞焦亡的影响

目的探讨Gasdermin D(GSDMD)蛋白在内毒素导致肺泡巨噬细胞焦亡中的作用。方法使用小干扰RNA技术建立GSDMD蛋白低表达的MH-S细胞株。将细胞分为野生型MH-S细胞组(WT)、转染空病毒载体的空白对照细胞组(NC)和GSDMD敲低MH-S细胞组(KD),分别接受PBS、LPS+尼日利亚菌素和LPS+霍乱毒素B亚单位进行处理。通过测定其乳酸脱氢酶(LDH)和IL-1β,荧光显微镜下观察细胞PI染色情况,RT-qPCR和蛋白免疫印迹检测焦亡相关蛋白表达等指标,来判定MH-S细胞有无焦亡发生和炎症因子水平的差异。结果在接受LPS+nigericin和LPS+CTB的处理后,三组细胞均出现了焦亡现象。其中KD组接受LPS+nigericin刺激后,细胞培养上清LDH水平和IL-1β浓度明显低于WT和NC组(P<0.05);PI染色阳性百分比明显少于WT和NC组(P<0.05);而GSDMD mRNA相对表达量和GSDMD-NT蛋白相对表达量也是三组中最低的(P<0.05)。而在经LPS+CTB处理后,WT和NC组细胞死亡发生率明显高于KD组(P<0.01);细胞上清中IL-1β水平和PI染色阳性百分比增加幅度也是WT和NC组更大(P<0.05)。此外,KD组中GSDMD mRNA相对表达量和GSDMD-NT蛋白相对表达量相较于另两组也是更低的(P<0.05)。结论下调MH-S细胞GSDMD蛋白表达可以起到抑制LPS导致的MH-S细胞焦亡和IL-1β分泌释放的作用。