结核病实验室诊断新技术研究应用中值得重视的问题

在结核病传统实验室诊断方法中，抗酸染色镜检阳性率仅３０％左右；结核菌素皮肤试验阳性率约为７５％，但有假阳性问题；培养结果虽可靠，但需时３～８周。因此，多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。在应用新的实验技术过程中，也发现存...

聚合酶链反应－单链构象多态性用于耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变的研究

目的研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析了４０株结核分支杆菌临床分离株。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法由ＰＣＲ扩增和扩增产物ＤＮＡ单链多态性分析组成。结果两对引物ＰＣＲ扩增产物分别为４１１和２５８ｂｐ，其敏感性分别为５ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ和１ｐｇ／μｌ、５００个菌／ｍｌ；均为属特异性。４０株结核分支杆菌临床分离株２５８ｂｐ扩增片段ＳＳＣＰ图谱的特点：以参考菌株结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ为对照，１０株敏感株均无区别；单耐ＲＦＰ或包括ＲＦＰ多种抗结核药３０株，除３株外，其余２７株ＳＳＣＰ图谱有明显的区别；检测阳性率为９０％，特异性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可检测出耐ＲＦＰ结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变；该基因是ＲＦＰ的药物靶编码基因，它的突变与ＲＦＰ耐药性有密切关系。

聚合酶链反应分子灯塔法检测结核分枝杆菌

目的 评价聚合酶链反应 (PCR )分子灯塔法检测临床标本中结核分枝杆菌 (结核菌 )的应用价值。方法 应用涂片镜检法、培养法及PCR分子灯塔法检测 142份结核病患者痰标本 ,42份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 涂片镜检法检测结核病患者临床标本中结核菌阳性率为 35 .2 % (5 0 / 142 ) ,培养法阳性率为 35 .9% (5 1/ 142 ) ,PCR分子灯塔法阳性率为 44 .4% (6 3/ 142 )。用PCR分子灯塔法检测临床标本特异性为 10 0 %。结论 PCR分子灯塔法是一种全新的PCR分子杂交模式 ,PCR扩增、荧光探针杂交、检测一体化 ,在单一管内完成 ,其简便、快速、防污染 ,敏感性较高、特异性强 。

结核分支杆菌链霉素耐药基因的检测

目的了解结核分支杆菌链霉素（Ｓｍ）耐药基因突变情况，建立快速检测耐药突变株的方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析了２２株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因，并应用ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）进一步分析其突变的部位和性质。结果以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，５株敏感株的ｒｐｓＬ基因未见ＳＳＣＰ泳动异常、有ＭｂｏⅡ酶切位点；１３株耐Ｓｍ株中，１１株（８６％）有ｒｐｓＬ基因泳动异常、无ＭｂｏⅡ酶切位点；４株耐其它抗结核药物株中，也有１株ＳＳＣＰ泳动异常、并无ＭｂｏⅡ酶切位点。结论大多数结核分支杆菌Ｓｍ耐药分离株有ｒｐｓＬ突变，而突变位点大多位于第４３位密码子。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ可能成为快速检测结核分支杆菌耐药突变株的新方法。