超微粉碎技术对中草药制剂的增效作用研究

实验选取国标中草药三黄粉和肝胆利康散两种药物,采用普通粉碎和超微粉碎两种工艺方法加工成不同粉碎细度的中草药粉剂。在三黄粉实验中设阴性对照组、氟苯尼考阳性对照组和普通粉碎、超微粉碎三黄粉四个实验组,每组设3个重复,每个重复12尾鱼,喂两个疗程的实验料,7 d为一个疗程,在两个疗程之间喂7 d对照料,投喂实验结束后使用致病性维氏气单胞菌进行锦鲤攻毒实验,观察两周统计发病率和死亡率,对比超微粉三黄粉与普通粉三黄粉的保护显著性;在肝胆利康散实验中设阴性对照组、普通粉碎和超微粉碎3个组,每组均设3个重复,每个重复10尾鱼,连续投喂3周后,尾静脉采血测试NBT、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶(AKP)、血清总蛋白(TP)和血清白蛋白(ALB)。三黄粉实验结果显示,投喂超微粉三黄粉的实验锦鲤发病率、死亡率都显著低于其它各组(P<0.05)。肝胆利康散实验结果显示,两个实验组间NBT水平无显著差异,但均显著低于对照组(P<0.05);超微粉实验组谷草转氨酶(GOT)水平与对照组无显著差异,但普通粉实验组的显著高于超微粉实验组和对照组(P<0.05);两个实验组的超氧化物歧化酶(SOD)水平显著高于对照组(P<0.05);两个实验组的血清球蛋白(GLOB)之间无显著差异(P>0.05),但普通粉碎组的显著高于对照组(P<0.05),各组的血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血清白球比(A/G)之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,超微粉碎技术对目标中草药有一定的选择性,对三黄粉的增效作用优于肝胆利康散。

常用消毒剂对水产动物的毒性(连载三)

（接5期）六、二溴海因二溴海因水解速度相对较快,在水中能够不断地释放出HBrO（活性溴）,并穿透微生物的细胞壁破坏菌体蛋白质,对其细胞内部结构产生不可逆的氧化和分解作用,最终起到杀菌效果。生产上常规施药剂量为0.3g/m3～0.4g/m3。秀丽白虾、草鱼鱼种、鱤幼鱼、匙吻鲟幼鱼、海蜇幼体、鲤鱼、白云山鱼、斑点叉尾鮰等水产动物安全浓度均高于常规用量（表6）,安全系数较高,是很好的消毒剂。

常用消毒剂对水产动物的毒性(连载三)

（接上期） 九、高锰酸钾 高锰酸钾是一种强氧化剂,其水溶液与有机物接触,能释放出新生态氧,迅速使有机物氧化,使酶蛋白和原浆蛋白中的活性基团和巯基（-SH）氧化变为二硫链（-S-S）而失活,从而起杀菌作用。

常用消毒剂对水产动物的毒性(连载一)

消毒剂是水产养殖中最常用的药物,用于消除或杀灭外环境中的病原微生物及其他有害微生物。按化学性质可分为醛类消毒剂、碱类消毒剂、酸类消毒剂、盐类消毒剂、卤素类消毒剂、染料类消毒剂、氧化剂类消毒剂、重金属类消毒剂等八大类。我国水产养殖动物品种繁多,不同类消毒剂对水产动物的毒性差异较大,用药不当容易造成鱼虾中毒死亡。然而我国目前还缺乏消毒剂毒性方面的标准数据,为此,作者整理了我国30年来的相关研究,阐述了生产上常用的消毒剂的安全浓度,并给出了一些使用方面的建议,以供广大养殖户和技术人员参考。

常用杀虫剂对水产动物的毒性

为了指导养殖户和技术人员科学用药,笔者总结了常用杀虫剂对已有研究水产动物的毒性,并给出一些使用禁忌方面的建议。

不同比例复合益生菌对凡纳滨对虾生长、免疫及抗氨氮能力的影响

对从凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肠道中分离出的鲍鱼希瓦氏菌(Shewanella haliotis)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)和双壳气单胞菌(Aeromonas bivalvium)3株有益菌株,利用正交设计得到9种复合比例,通过饲料中添加上述9种比例混合的菌体(菌数总量为109 cfu/g)饲喂凡纳滨对虾,经过28 d养殖实验,评价其对凡纳滨对虾生长、免疫指标的影响。随后,利用氯化铵调节水体氨氮浓度至26.67 mg/L,经过16 d的氨氮毒性实验,研究不同比例复合益生菌对凡纳滨对虾抗氨氮能力的影响。研究结果表明,9个复合益生菌实验组的增重率和特定生长率均显著高于对照组(P<0.05),并且以3株菌菌数6︰1︰3比例效果较好;不同配比的复合益生菌能够显著提高酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力(P<0.05),并表现出了不同的影响效果,其中,3株菌菌数(菌数总量为109 cfu/g,下同)2︰3︰3、4︰2︰3及6︰1︰3比例对ACP活力具有显著促进作用(P<0.05),3株菌菌数4:2︰3和6︰1︰3比例对ALP活力具有显著促进作用(P<0.05);3株菌菌数2︰1︰1比例对T-SOD活力具有显著促进作用(P<0.05);各比例的复合菌对溶菌酶活力的影响不显著(P>0.05);氨氮浓度26.67 mg/L条件下,不同比例复合菌组对虾累计存活率显著高于对照组(P<0.05),其中以3株菌菌数4︰3︰1和6︰3︰2比例组累计存活率较高,即抗氨氮效果较好。

7种五味子木脂素对草鱼原代肝细胞的毒理研究

为研究五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲和五味子酯乙这7种木脂素对草鱼肝细胞的毒性作用和安全浓度,采用草鱼原代肝细胞作为实验模型。实验组加入1~1 000μmol/L不等的待测木脂素,溶剂对照组加入等体积的二甲基亚砜,阳性对照组加入8 mmol/L的四氯化碳。培养22 h后,采用CCK-8细胞毒性实验评价木脂素的细胞毒作用,并检测培养上清GPT和GOT评价肝细胞膜通透性的改变。结果显示,醇乙在≥700μmol/L、乙素在≥100μmol/L时有细胞毒性,但均未见GPT和GOT的升高;醇甲在最高1 000μmol/L、甲素丙素在最高100μmol/L、酯甲酯乙在最高50μmol/L时均未见明显的细胞毒性。结果表明,醇乙和乙素具有一定的肝细胞毒性,主要表现为细胞代谢水平的下降,但不足以引起细胞膜通透性的显著改变;其余5种木脂素无明显肝细胞毒作用。

西伯利亚鲟脂肪肝模型的建立

选择规格相近[体重(8.41±0.82)g,体长(10.12±0.44)cm]的西伯利亚鲟鱼225尾,分为3组,每组3个平行,分别用8%(对照组)、12%(中脂组)、16%(高脂组)油脂含量的饲料投喂。养殖42 d后,测定体长、体重,尾静脉取血,解剖。通过生长指标、生理生化指标及肝脏组织切片观察等评价建模是否成功。结果表明,高脂组生长最快,终末体长、体重显著高于对照组和中脂组(P<0.05),肝指数显著高于对照组和中脂组(P<0.05),存活率与另两组差异不显著(P>0.05);高脂组血清AST、ALT及TC、TG显著高于对照组(P<0.05),肝脏TG显著高于中脂组和对照组;对照组肝脏呈暗红色,中脂组肝脏呈浅红色,高脂组呈暗白色,病理切片观察表明,高脂组部分肝细胞坏死,细胞破裂,脂肪颗粒融成一个大的脂肪滴,细胞呈现透明空泡化,细胞核破裂或溶解。通过肝指数、血清生化指标、肝脏TG、肝脏外观颜色及病理组织切片分析,高脂饲料组成功地建立了鲟鱼脂肪肝模型。

微生态制剂在对虾养殖中的研究与应用综述

综述了国内外微生态制剂对对虾外部水环境及内部环境的调节作用,包括提高水体溶氧量,降低水体铵态氮、硝酸盐、亚硝酸盐含量及抑制水体中有害微生物的繁殖,生物夺氧、分泌、竞争作用及刺激免疫系统的调节作用与应用现状,提出了今后微生态制剂在对虾养殖中的发展方向。

虾源蜡样芽孢杆菌D7的生态安全性评价

为了评价蜡样芽孢杆菌菌株D7的生态安全性,分别测定了蜡样芽孢杆菌D7对氨氮、亚硝酸盐、磷酸盐浓度的影响,以及对小球藻、大型蚤、斑马鱼、凡纳滨对虾和草鱼等水生动植物的安全性。研究结果表明,蜡样芽孢杆菌菌株D7浓度≥1×107cfu·m L-1时,水中氨氮及亚硝酸盐含量显著降低(P<0.05)。蜡样芽孢杆菌菌株D7浓度≤1×106cfu·m L-1时,对氨氮及亚硝酸盐含量无显著影响。蜡样芽孢杆菌菌株D7浓度在104~108cfu·m L-1时,水中磷酸盐含量无显著变化。小球藻含量与菌体浓度呈正相关。处理96 h,对大型蚤、斑马鱼和凡纳滨对虾死亡率均无显著影响。以不同细菌剂量(108~1012cfu·m L-1)灌胃草鱼,处理96 h后,未出现草鱼死亡现象。表明虾源蜡样芽孢杆菌D7生态安全性较好,对水体及养殖动物无明显危害。

甘草和丹参对鲟生长及脂肪肝修复的研究

为了研究甘草和丹参对鲟生长及脂肪肝修复的效果,将鲟分为10个组,分别为普通对照组（饲料含8%脂肪,投喂7周）、高脂对照组（饲料含16%脂肪,投喂7周）、甘草4个组（饲料含0.5%～2%甘草,3周高脂＋4周甘草）和丹参4个组（饲料含0.5%～2%丹参,3周高脂＋4周丹参）,通过体长、体重、肝指数、生理生化指标及肝脏组织切片等,评价甘草和丹参对鲟生长及脂肪肝的影响。结果显示,甘草4个处理组终末体长和体重不同程度地高于普通对照组和高脂对照组。丹参处理组终末体长和体重与高脂对照组差异不显著（P〉0.05）；肝指数显著低于高脂对照组和甘草处理组（P〈0.05）；生理生化指标不同程度低于普通对照组和高脂对照组。肝脏颜色较高脂对照组暗,肝细胞轮廓较为完整,多数细胞内的空泡成小颗粒状分布。甘草处理组血清学指标、肝脏总胆固醇及甘油三酯未表现出规律性的变化,肝脏外观颜色较普通对照组浅,组织切片空泡化严重。研究表明,0.5%～2%甘草能够促进鲟生长,但对高脂导致的脂肪肝没有显著的修复效果；丹参对鲟生长未表现出显著的促进作用,但是对高脂饲料诱导的脂肪肝具有一定的防治效果,建议饲料中丹参添加量为0.5%。[中国渔业质量与标准,2014,4（3）：46-53]

地衣芽孢杆菌A1在斑点叉尾鮰肠道的定植

为研究地衣芽孢杆菌A1(Bacillus Licheniformis, Bli)在斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)肠道的定植规律,通过每周更换100%的循环水量以减少水体中的芽孢杆菌对实验的干扰,通过Co60 辐照灭菌杀灭饲料中的芽孢杆菌以消除其对实验的干扰。采用52℃高温选择性培养肠道Bli,研究外源Bli 在肠道内的消长规律。使用嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)的芽孢作为惰性对照,通过洗涤肠壁去除非黏附菌,研究Bli 对肠粘膜的黏附。使用灭菌处理的肠内容物体外培养Bli,研究其在肠道的增殖潜能。结果显示,每周100%换水量使水体Bli 含量<1 cfu/mL。辐照灭菌使饲料Bli 含量由1.4×10^4 cfu/g 降至检出限以下。停止外源Bli 摄入后,在持续投喂无菌饲料的情况下, Bli 在斑点叉尾鮰肠内容物中的含量可维持3.3×10^2 cfu/g 左右至少42 天;在禁食情况下, 14 天后肠内容物中便无Bli 检出。Bli 对肠粘膜的黏附能力弱于惰性对照,但Bli 可以在肠内容物中生长至2.0×10^7 cfu/g。以上结果提示:在持续喂食情况下,地衣芽孢杆菌可以在斑点叉尾鮰肠道内长期定植,而禁食情况不能定植。其原因是由于地衣芽孢杆菌不能有效黏附于肠粘膜,但可以在肠内容物中增殖。

一株虾源蜡样芽胞杆菌D7作为潜在益生菌的毒理学研究

为评价一株虾源潜在益生菌蜡样芽胞杆菌D7的毒理安全性,分别从溶血试验、抗菌药物敏感试验、斑点叉尾鮰急性毒性试验、凡纳滨对虾急性毒性试验、破损皮肤刺激性试验、急性眼刺激试验和急性腹腔注射试验等7个指标进行了测试。采用血琼脂平板法测定溶血性,纸片扩散法测试药物的敏感性。采用浸浴和注射两种方式在斑点叉尾鮰上进行急性毒性试验,采用注射方式在凡纳滨对虾进行急性毒性试验。破损皮肤刺激性试验、急性眼刺激试验用家兔,急性腹腔注射性试验用小鼠。结果表明,D7菌株具有明显溶血性,对13种抗菌药物中的9种敏感,104CFU/mL～108CFU/mL浓度下浸浴斑点叉尾鮰,96h内未出现不良症状及死亡,96hLC50>108 CFU/mL。以1×109CFU/mL注射斑点叉尾鮰,24h后出现感染死亡,14d内部分试验组出现感染症状,死亡9尾,肝脏是该菌株感染的靶器官。以1×106CFU/mL注射凡纳滨对虾,96h累积死亡率同对照组差异不显著(P>0.05)。对家兔急性眼刺激中,该菌株属于无刺激性级别,皮肤刺激试验中,该菌株属于轻刺激性级别,急性腹腔注射,发现该菌株属于强致病性级别。说明虾源蜡样芽胞杆菌D7对养殖鱼类具有一定的毒性,对凡纳滨对虾较为安全。

草鱼肝细胞原代培养的培养基选择与优化

为寻找适宜培养草鱼原代肝细胞的培养基,本研究运用倒置相差显微镜形态学观察和CCK-8细胞活力实验,比较研究了DMEM/F12、α-MEM、RPMI-1640、M199和L-15 5种培养基,1μmol/L胰岛素、2 mmol/L谷氨酰胺和10μmol/L氢化可的松3种添加剂以及热灭活血清对草鱼原代肝细胞形态和活力的影响。通过形态学和活力检测观察发现α-MEM、M199和L-15均可以较好地促进草鱼原代肝细胞贴壁以及维持较长活力,其中以L-15为最优;此外,胰岛素的添加有助于细胞活力的维持,而谷氨酰胺和氢化可的松的添加以及血清灭活与否对细胞贴壁和活力维持均无显著性差别。本研究可为草鱼原代肝细胞的培养基选择提供参考,同时为草鱼生理学、环境毒理学研究乃至药物筛选提供支持。

苯并咪唑类药物在鱼类上代谢规律及残留检测研究概况

综述了甲苯咪唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑等4种苯并咪唑类药物在鱼类上的代谢规律及残留检测技术,并对这类药物存在的问题进行了阐述。

新型高效络合碘对鲤(Cyprinus carpio Linnaeus)、南美白对虾(Litopenaeus vannamei Boon)的急性毒性和抑菌效果试验

采用常温静水试验,探讨了高效络合碘对鲤鱼、南美白对虾的急性毒性效应;同时进行了高效络合碘对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的抑菌试验。结果表明:高效络合碘对鲤鱼、南美白对虾的24h、48h、96h半致死浓度(LC50)分别为52.99mg/L、47.07mg/L、38.87mg/L和88.20mg/L、62.48mg/L、47.04mg/L,安全浓度分别为3.89mg/L和4.70mg/L。22℃,1%高效络合碘对嗜水气单胞菌的最低杀菌体积分数为2.5×10-6,杀菌率达100%。实验表明,新研制的高效络合碘与其它碘制剂相比具有高效、低毒、杀菌抑菌的效果,值得大规模的推广。

复合乳酸菌对草鱼的安全性及肠炎病防治的试验效果

在实验室条件下,探讨了一种复合乳酸菌拌饲口服后对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)的安全性评价,同时进行了复合乳酸菌对草鱼肠炎病的预防试验和治疗试验。复合乳酸菌按2‰、10‰、20‰、30‰、40‰的添加量拌饲投喂草鱼进行肠炎病的预防试验。结果显示:与阳性对照组比,试验组攻毒后的平均死亡率分别为36.7%、41.7%、41.7%、40.0%、38.3%,预防保护率分别为63.3%、58.3%、58.3%、60.0%、61.7%。草鱼攻毒后投喂添加量分别为2‰、4‰、6‰、8‰、10‰的复合乳酸菌饲料进行肠炎病的治疗试验。结果显示:与阳性对照组相比,试验组平均死亡率分别为93.3%、91.7%、96.7%、95%、95%,治疗保护率分别为6.7%、8.3%、3.3%、5.0%、5.0%。由试验结果可知:(1)试验期内复合乳酸菌对试验草鱼无不良影响,具有安全性。(2)复合乳酸菌对草鱼肠炎有一定的预防效果,治疗效果不明显,但能推迟肠炎的发病时间和减少试验鱼的死亡数。(3)在草鱼养殖的临床试验中,试验组使用复合乳酸菌后,水体中的氨氮、亚硝酸盐、硫化氢等物质含量下降,溶氧量和水体透明度增加。

鱼虫清对欧洲鳗的急性毒性及杀虫效果试验

在常温静水条件下,探讨了鱼虫清对欧洲鳗(Anguilla angulla)的急性毒性效应,同时进行了鱼虫清对寄生虫的杀灭试验。结果表明:鱼虫清对欧洲鳗的24h、48h、96h的半致死浓度(LC50)分别为1.87mg/L、1.67mg/L和1.35mg/L,安全浓度为0.4mg/L。鱼虫清对指环虫(Dactylogyrus)和车轮虫(Trichodinella)的杀灭效果分别为:浓度在0.30mg/L、0.20mg/L以上作用24h,杀虫率可达100%。试验证明,鱼虫清对杀灭指环虫和车轮虫有很好的效果,值得推广。

天津宝坻、广东博罗两地车轮虫病流行性调查

车轮虫是一种自由运动的寄生性纤毛虫类原生动物，是鱼类最常见的寄生虫病，近年来呈现发病时间长、寄主范围广、耐药性强、复发率高，危害程度大等特点，成为养殖过程的一大顽疾。

正交实验优化鱼类保肝中药复方的提取工艺

研究影响鱼类保肝中药复方提取效果的各种因素,确定最佳提取工艺。运用单因素试验考察溶剂倍量(A)、浸泡时间(B)、煎煮时间(C)和煎煮次数(D)4个因素对中药复方中君药丹酚酸B含量的影响。采用正交实验法,对水煎煮工艺条件进行优选。在所考察的4个因素中,对中药复方提取效果的影响程度依次为:C>A>D>B,即煎煮时间>溶剂倍量>煎煮次数>浸泡时间,确定最佳水煎煮工艺为A_2B_1C_1D_2,即10倍水量,浸泡0.5 h,煎煮时间为0.5 h,煎煮2次。本研究优选工艺设计合理,稳定可行,可为鱼类保肝药物的开发提供参考。