HCV核心蛋白调控SREBP-1c表达水平的机制研究

目的探讨HCV核心蛋白调控SREBP-1c的分子生物学机制。方法构建HCV核心蛋白真核表达载体pc DNA3.1/myc-His(-)-Core(1b,3a),转染Hep G2细胞系,48 h后提取细胞总RNA和总蛋白,采用real-time PCR、Western blot等方法检测脂代谢相关基因Sirt1和SREBP-1c的mRNA和蛋白表达水平;构建Sirt1启动子报告基因表达载体p GL4.10-Sirt1,与pc DNA3.1/myc-His(-)-Core(1b,3a)共转染Hep G2细胞系24 h后检测核心蛋白对Sirt1启动子活性的影响;构建pmir GLO-SREBP-1c-3'-UTR报告基因表达载体,与pc DNA3.1/myc-His(-)-Core(3a)共转染Hep G2细胞系48 h后检测SREBP-1c-3'-UTR相对luciferase活性。结果与对照组相比,1b型和3a型HCV核心蛋白表达组SREBP-1c的mRNA表达上调(分别上调1.358倍和1.337倍,P=0.043、0.008)SREBP-1c蛋白表达水平上调(分别上调1.608倍和1.926倍,P=0.042、0.008);与对照组相比,1b型和3a型HCV核心蛋白表达组Sirt1 mRNA表达上调(分别上调1.566倍和1.71倍,P=0.037、0.006),Sirt1蛋白表达水平上调(分别上调1.436倍和1.588倍,P=0.026、0.009);与对照组相比,HCV核心蛋白表达组Sirt1的启动子活性无显著变化;与对照组相比,HCV核心蛋白表达组SREBP-1c-3'-UTR相对luciferase活性下调(相对值为0.667,P=0.008)。结论 HCV核心蛋白上调SREBP-1c与Sirt1的表达,可能是HCV相关性肝脂肪变的发病机制之一。micro RNA参与HCV核心蛋白对SREBP-1c的表达调控,而是否有micro RNA对HCV调控Sirt1表达发挥作用尚待于进一步的研究证实。

TOLL样受体信号转导通路在内质网应激致炎症反应中的作用

目的探讨TOLL样受体信号转导通路在衣霉素(TM)致人肝癌细胞系HpeG2和人正常肝细胞系L02内质网应激及炎症反应过程中的作用。方法利用实时荧光定量PCR检测衣霉素作用后HepG2和L02细胞中细胞因子IRAK1、TAK1和NF-κB的基因表达水平,利用Western blot检测相应细胞因子的表达水平。结果两种细胞系经TM刺激后,内质网应激标志物GRP78蛋白表达增高;炎症反应标志因子NF-κB在基因水平和蛋白水平表达均呈现增高趋势;TOLL样受体信号转导通路中关键细胞因子IRAK1、TAK1在基因水平和蛋白水平表达呈现增高趋势,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论 TM刺激HepG2和L02细胞系之后,可诱导出现内质网应激状态并引起细胞内的炎症反应;在内质网应激致炎症反应过程中伴TOLL样受体信号转导通路的激活,TOLL样受体信号转导通路对其发生、发展可能具有一定的调节作用。