“互联网+”创新创业教育教学提升成人高等教育实效性研究——以北华大学为例

互联网时代推动了高等教育的改革和发展,开展创新创业教育是培养我国成人高等教育培养创新创业人才的必然选择。北华大学成人高等教育也紧随时代潮流开展创新创业教育教学研究,从学校成人高等教育整体和专业层面入手,在互联网时代背景下,针对创新创业教育发展的现状及存在的问题,分析总结创新创业教育理论体系中各环节,构建创新创业教育教学体系,对其他高职院校创新创业教育建设提供一定的参考作用。

基于Cell-SELEX技术对人B细胞淋巴瘤SU-DHL细胞适配体的筛选与构建

目的筛选与淋巴瘤SU-DHL-8细胞特异性结合的适配体,用于淋巴瘤的早期诊断.方法利用76 bp的随机单链DNA文库,以SU-DHL-8细胞为靶细胞、Ramos细胞为消减细胞,采用以细胞为靶标的指数富集配体系统进化(cell based systematic evolution of ligands exponential enrichment,Cell-SELEX)技术筛选富集与靶细胞结合的适配体;利用PCR及生物素-链霉亲和素层析技术制备次级文库,经多轮筛选,最终筛选出与SU-DHL-8细胞特异性结合的适配体.结果经过11轮正向筛选及2轮反向筛选,次级ssDNA文库与SU-DHL-8细胞的亲和力逐渐增高,第12轮和第13轮的荧光曲线基本重合,说明SU-DHL-8细胞的特异适配体构建成功.结论应用Cell-SELEX技术可成功筛选出淋巴瘤SU-DHL-8细胞的特异适配体,为淋巴瘤的精确诊断和早期诊断提供依据.

基于混合式教学的临床微生物学检验技术教学改革与实践

随着互联网技术的不断发展,临床微生物学检验技术在传统教学中暴露出多种问题。文章旨在通过线上线下混合式教学解决这些不足,进行以学生发展为中心、混合式教学为举措,思政教育为动力,课程考核为依托的教学改革,使得课堂上不再只是书本知识的传授,而是促进学生思想品德、能力培养、个性发展等综合素质的养成。

临床免疫学检验技术课堂教学与课程思政相结合的教学展示——以胶体金免疫层析技术为例

本文以“胶体金免疫层析技术”的课堂教学为例,介绍了在新型冠状病毒感染疫情防控背景下,教师如何把专业知识与课程思政有效融合,在完成教学目标的同时,实现对学生的思想道德素质的提升,落实立德树人综合教育理念的探索和实践。

基于锦灯笼对白血病作用机制的网络药理学和分子对接技术的生物信息学分析

目的:基于网络药理学探讨锦灯笼(PCF)在白血病发生发展过程的作用,阐明其生物活性成分主要作用靶点和信号通路相关机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库以“锦灯笼”为关键词检索其生物活性成分及对应的潜在靶点,并采用蛋白质数据库(PDB)和小分子药物靶点预测在线平台(Swiss Target Prediction)网站对其潜在靶点进行评估预测。采用GeneCards、OMIM和DrugBank数据库以“Leukemia”为关键词对相关靶点进行检索。利用Draw Veen Diagram在线软件将PCF生物活性成分靶点与白血病靶点交集,得到的交集靶点即为PCF作用于白血病的靶点;利用基因/蛋白相互作用检索搜查工具(STRING)数据库获取交集靶点蛋白的蛋白-蛋白互作(PPI)网络信息并进行可视化处理;采用注释可视化和集成发现数据库(DAVID)对交集基因进行基因本体(GO)生物功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,并利用Cytoscape 3.7.2软件对PPI网络进行拓扑分析筛选核心靶点和核心活性成分,采用AutoDock和PyMol软件进行分子对接验证。结果:对TCMSP数据库检索结果进行筛选后得到6个PCF活性成分,收集PCF与白血病的共同靶点29个。GO富集分析主要涉及造血或淋巴器官的发育、蛋白代谢调控和细胞凋亡等生物进程;KEGG信号通路富集分析主要包括癌症通路、肿瘤坏死因子(TNF)和T细胞受体(TCR)等信号通路。拓扑网络分析得到蛋白激酶B1(AKT1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)等10个核心靶点,结合KEGG信号通路筛选出核心活性成分谷甾醇和禾本甾醇。分子对接,PCF活性成分谷甾醇与原癌基因JUN及禾本甾醇与AKT1和Caspase-3对接能均<-6.0 kcal·mol-1,表明对接较好。结论:PCF的主要活性成分谷甾醇和禾本甾醇可能通过调控JUN、AKT1和Caspase-3等基因参与癌症通路和TCR等信号通路,进而影响白血病的发生发展。

基于量子点标记的核酸适配体技术在血液系统肿瘤检测中的研究进展

血液系统肿瘤临床常用的确诊方法为基于形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学分型的综合诊断,但仍有一定的误诊率,且需要临床医师具有丰富的经验。近年来,随着分子纳米技术及分子靶标技术的发展,基于核酸适配体对靶标的高度特异性和亲和性,以及量子点作为新型纳米材料具有良好的光稳定性和持续荧光强度的优势,量子点修饰的适配体生物传感器在肿瘤检测中展现巨大潜能。其不仅在细胞检测水平上为传统的血液系统肿瘤形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学综合诊断方法提供了有效的补充,并有望成为下一代主流的荧光标志物被广泛应用于生物医药领域。

研究生分子生物学检验技术“金课”建设的实践

2018年在新时代全国高等学校本科教育工作会议上第一次提出要打造大学“金课”,淘汰“水课”。金课可以归结为“两性一度”:高阶性、创新性和挑战度^([1])。虽然金课的研究对象是本科教育,但是作为本科教育的延续,研究生教育承担着为国家培养高素质创新型人才的重任,是衡量一个国家科技发展水平和教育发达程度的重要标志,属于高阶教育,但是目前研究生教育存在着很多问题。

利伐沙班所致PLT计数和功能变化研究进展

血栓性疾病严重威胁着人类的生命健康。目前,临床治疗血栓性疾病以抑制凝血机制启动、阻断凝血酶活化为主要策略。利伐沙班作为一种新型口服抗凝药物,可以高效、准确地阻断血栓瀑布形成,具有靶向、低副作用、低出血风险的优势。随着利伐沙班的临床广泛使用,其对血小板(PLT)数量和功能的影响开始显现。文章就利伐沙班临床应用中引起的PLT计数和功能变化及其机制的相关研究进行综述,以期对用药期间患者凝血功能的合理评价提供参考。

镁在糖尿病肾病中的作用及机制

糖尿病肾病(DN)可导致严重的肾衰竭和终末期肾病,也是糖尿病患者高病死率的最主要原因。DN的发病机制主要涉及胰岛素抵抗、氧化应激以及炎症反应等。低镁可通过影响胰岛素受体导致胰岛素抵抗的发生,而元素镁缺乏可影响DN的发生发展,但具体机制目前尚未完全阐明。镁可通过间接影响胰岛素受体底物的敏感性改变胰岛素抵抗;镁还可通过改变线粒体功能、钙离子水平、自由基的积累促进炎症的发生;镁也可通过影响活性氧水平促进氧化应激的发生,这些因素最终导致DN的发生发展。因此,深入研究镁在DN中的作用及机制,可以为疾病的治疗提供新思路。

多菌灵人工抗原的合成及其鼠源性多克隆抗体的制备

目的合成多菌灵人工抗原,制备多菌灵多克隆抗体并鉴定其特性。方法利用混合酸酐法引入羧基制备多菌灵半抗原。将小分子半抗原与大分子载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成多菌灵人工抗原和包被抗原,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行鉴定。用制备的人工抗原免疫小鼠获得抗多菌灵多克隆抗体,利用间接ELISA对抗体效价以及特异性进行测定。结果成功制备多菌灵人工抗原。免疫小鼠后获得的抗体效价可达1:12800。抗体对多菌灵的半数抑制剂量(IC_(50))为0.107μg/mL,且与苯菌灵、噻菌灵的交叉反应率均<1%。结论成功获得高敏感性、高特异性的多克隆抗体,为多菌灵残留快速检测方法的建立奠定了基础。

天麻PCR‑层析试纸条快速可视化检测方法的建立与评价

目的通过聚合酶链式反应(PCR)与层析试纸条结合的方法,实现天麻快速可视化真伪鉴别,并对其检测效果进行评价。方法采用一步法提取天麻及其伪品基因组DNA,应用NCBI数据库设计天麻特异性引物。采用DNA分子克隆技术制备天麻阳性质粒,作为天麻阳性对照品。建立PCR-层析试纸条法鉴定天麻真伪,摸索最优实验条件,并进行方法学评价。结果①样品DNA提取的纯度符合要求,最优的PCR反应引物浓度为1μmol/L,循环为29次。②分子克隆的天麻阳性质粒序列与天麻DNA分子标记特异性指纹区片段序列同源性为98%,可作为天麻PCR-层析试纸条法的阳性对照品。③PCR-层析试纸条法的方法学评价结果显示:天麻对照药材在试纸条上出现两个条带,伪品和阴性对照品出现1个条带,与琼脂糖凝胶电泳法结果一致,特异性良好;PCR-层析试纸条法较琼脂糖凝胶电泳法的灵敏度高100倍,天麻DNA浓度为10-1 mg/L时,试纸条仍有模糊条带;在第3、6、9、12个月采用PCR-层析试纸条法进行检测,检测结果与预期一致,稳定性良好;混合样品验证显示,PCR-层析试纸条法的最低检测限为10%,而琼脂糖凝胶电泳法的最低检测限为50%。④采用PCR-层析试纸条法对15份市售天麻样品进行检测,鉴别出3个伪品,与琼脂糖凝胶电泳法结果一致。结论所构建的PCR-层析试纸条检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便快速,可在短时间内实现鉴定结果的可视化,检测结果准确、稳定,为道地药材天麻的真伪鉴别提供了新方法。

Anoctamin家族中钙激活氯离子通道调节剂筛选及应用研究进展

钙激活氯离子通道(CaCC)是一类能通过胞内钙离子激活转运氯离子的通道蛋白,其主要在神经元和肌细胞中参与调节膜电位、细胞内钙平衡和细胞兴奋性等重要的生理作用。Anoctamin(Ano)家族中Ano1是最经典的CaCC,Ano1的靶向调节剂对癌症、囊性纤维化、高血压、腹泻和哮喘等疾病具有潜在治疗作用。自2008年Ano1首次被发现后,先后出现了多种CaCC特异性调节剂的筛选方法,主要包括基于荧光蛋白的高通量初级筛选、电生理膜片钳技术和虚拟筛选,进而发现了多种药理学作用不同的小分子调节剂。本文综述了目前较为主流的筛选方法的原理和优缺点,并对迄今发现的Ano1特异性调节剂的化学结构和潜在的应用进展进行综述。

强直性脊柱炎易感基因的研究进展

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是由遗传、感染、免疫和环境等多因素共同作用的自身免疫性疾病,其中遗传因素与强直性脊柱炎的发病有着强烈的关联。目前所发现的易感基因与AS的发病机制尚不十分清楚,本文对与之相关的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因包括HLA-B27基因、TNF-α基因和IFN-γ基因以及非MHC基因包括ERAP1基因和IL-23/IL-17免疫通路相关基因在AS发病的中的作用进行综述,对于进一步了解易感基因与强直性脊柱炎之间的相关性具有重要意义。

基于Cyt b基因的PCR技术对牛鞭药材的鉴定方法研究

目的:建立对牛鞭药材的聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法,从分子水平上对牛鞭药材的真伪进行鉴定。方法:提取牛鞭及其伪品(驴鞭、猪鞭、羊鞭)的基因组DNA,并对其完整性、纯度和浓度进行检测。利用GenBank相关信息,以牛鞭的线粒体细胞色素b基因(Cyt b)为靶基因,应用Primer-BLAST在线软件设计特异性引物,并对不同物种鞭类样品进行PCR扩增,对产物进行电泳分析;对获得的牛鞭样本PCR产物进行克隆和DNA测序验证。对所建立的PCR鉴定方法进行特异性和重复性考察验证。结果:提取所得的牛鞭及其伪品DNA的纯度较高,无蛋白质或RNA污染;1.5%琼脂糖凝胶电泳结果显示,牛鞭样本在200~300 bp之间均出现明显的目的基因条带,而其他伪品未见相应条带出现。DNA测序结果证实,所获牛鞭样本基因片段的核苷酸序列与GeneBank中牛鞭物种相似性均为100%。方法学验证结果显示所建方法特异性、重复性均良好。结论:本研究所建基于Cyt b基因的PCR鉴定方法简单、快速,准确性、特异性、重复性均良好,可满足牛鞭及其伪品的分析鉴定需求。

基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价

目的:基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。方法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物,优化反应体系。建立三重PCR检测体系,并检测其特异性、灵敏度和稳定性。结果:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,浓度为227 mg·L^(-1),纯度为1.50~1.60。采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因,于退火温度56℃时,蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp,基因引物cytK191的扩增片段为191 bp,基因引物entFM363的扩增片段为363 bp。PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮,且无非特异性条带,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增,表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强;3种引物在同一反应体系中互不干扰。灵敏度检测,多重PCR体系最低检测限可同时达到10^(-1)mg·L^(-1);稳定性检测,多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致。结论:建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM363 3种毒素基因灵敏度高、特异性强,检测结果准确稳定,检测体系具有良好稳定性,适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因。

临床分子生物学检验技术翻转课堂的微课设计与制作

近年来,翻转课堂已经成为国内外教学模式的主要研究热点,其中微课是促进知识传播、学生自主学习的重要资源.翻转课堂上,微课设计与制作的质量直接关系到学生的学习效果.通过对临床分子生物学检验技术的理解与定义,从选题和制作两方面来探索其适宜使用的微课,并阐明了微视频在制作和应用时需要注意的事项,以确保新型教学模式在临床分子生物学检验技术这个学科中的有效实施.

中药材DNA鉴定技术研究进展

中药材作为中医文化的瑰宝,不仅关乎到人民群众的身体健康,更是弘扬和繁荣中华医药文化的基础。由于部分中药材较为名贵并存在市场缺口,不法分子为了牟取暴利采用了各种各样的造假手段,导致市售中材中的伪品、混淆品及掺假品层出不穷。因此,加强市售中药材及其制品的检测和质控成为了当前急需解决的问题。相较于传统中药材真伪鉴定采用性状、显微鉴定和理化鉴定方法,将DNA鉴定技术应用于中药材真伪鉴定将会大大提高中药材鉴定的水平和效率,从而更好地保证中药材的品质和疗效,推动传统医学的繁荣发展。

北五味子在胸主动脉瘤发生发展中作用机制的网络药理学和分子对接技术分析

目的:探讨北五味子(SCF)在胸主动脉瘤(TAA)发生发展过程中的作用,并阐明其可能的机制。方法:整合中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、Uniprot、Swiss TargetPrediction、CTD、GeneCards、OpenTargets和OMIM多个数据库获取SCF作用于TAA的潜在靶点;利用String数据库和Cytoscape软件构建靶点蛋白-蛋白互作(PPI)网络,并进行拓扑网络分析得到SCF作用于TAA的核心靶点;借助Omicshare在线分析平台对潜在作用靶点进行潜在靶点的基因本体(GO)和京都基因组与基因百科全书(KEGG)富集分析;通过GEO数据库提取SCF有效成分—五味子酯乙(SchB)刺激大鼠主动脉平滑肌细胞基因表达谱,验证核心靶点表达水平;应用Autodock软件将核心靶点进行分子对接验证。结果:获得SCF影响TAA的潜在靶点46个,GO富集分析主要涉及细胞增殖、催化活性和蛋白质代谢等生物学过程,KEGG富集分析主要涉及血管内皮生长因子(VEGF)、受体酪氨酸蛋白激酶(ErbB)和缺氧诱导因子1(HIF-1)3条信号通路,拓扑网络分析得到信号转导与转录激活因子3(STAT3)和基质金属蛋白酶9(MMP9)等10个核心靶点。基因表达谱分析,与转化生长因子β1(TGF-β1)组比较,SchB-TGF-β1组核心靶基因STAT3和MMP9表达水平明显下调(P<0.05)。结论:SCF的主要活性成分SchB等可能通过靶向STAT3等信号通路,抑制血管平滑肌中MMP9表达水平,进而减轻主动脉中细胞外基质降解,发挥抑制TAA发生发展的作用。

改良SELEX技术筛选福氏志贺菌2a特异性适配体

目的:构建与福氏志贺菌2a高亲和性、特异性结合的DNA寡核苷酸适配体库。方法:体外合成76 nt高通量随机序列的单链DNA寡核苷酸文库(ssDNA),运用全细菌指数富集的配体系统进化技术(whole-bacteria SELEX),福氏志贺菌2a作为靶标与文库ssDNA反应;通过优化PCR反应,将Lambda酶外切及葡聚糖凝胶层析纯化技术用于次轮反应文库的制备,荧光分光光度计跟踪筛选过程,流式细胞仪克隆测序特异性单链核酸适配体,生物信息学技术分析其一、二级结构。结果:经过PCR技术10轮正向筛选和6轮消减菌筛选,通过Lambda酶外切及葡聚糖凝胶层析纯化,ssDNA平均回收率高达72.33%。依据一级结构的同源序列建立了36个寡核苷酸探针组群。流式细胞仪分析获得1条与福氏志贺菌2a特异性结合的适配体(命名ZH-21)。结论:基于全菌消减SELEX技术,结合Lambda酶外切及凝胶层析纯化技术,建立一种快速、稳定、高效、特异性高和成本低的筛选福氏志贺菌2a特异性单链核酸适配体的方法。

呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价

目的:采用聚合酶链式反应(PCR)技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。方法:根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区(ITS)基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行分析,并分别在真菌通用引物5'端用生物素(Biotin)和异硫氰酸荧光素(FITC)进行修饰标记;建立PCR体系,进行体系的最佳条件优化;确定胶体金免疫层析试纸条标记链霉亲和素的最佳标记量和质控线及检测线最佳包被物浓度,组装核酸胶体金试纸条,对试纸条的特异度、灵敏度、重复性和稳定性进行验证。结果:水煮法提取白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌DNA,浓度为180μg·L^(-1)以上,纯度为1.60~2.10;在pH 7.0条件下,每100μL胶体金溶液中制备胶体金标记链霉亲和素最佳标记量为3.3μg,质控线包被Biotin化牛血清白蛋白(BSA-Biotin)浓度为2.00 g·L^(-1),检测线包被抗FITC抗体浓度为1.00 g·L^(-1)。核酸试纸条的特异度与电泳结果一致,仅白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌出现阳性结果,与金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌等常见呼吸道感染细菌无交叉反应。灵敏度检测,白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌的DNA浓度分别为10-4、10-2和10-3 mg·L^(-1)时核酸试纸条仍可准确检出,而普通PCR电泳结果显示白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌最低检测浓度分别为0.01、1.00和0.10 mg·L^(-1);重复性检测,在不同实验室不同操作人员对核酸试纸条进行验证,结果一致,重复性良好;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测,结果符合预期,稳定性良好。结论:本研究建立的呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条可以检测白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌等真菌,特异度和灵敏度均较高,操作简便且快速。