转化医学理念下开放式动物实验学习效果探讨

转化医学是连接基础学科与实验室、临床学科间的桥梁,是目前国际和国内培养复合型医学人才的主要理念。本文就参加我校生物化学与分子生物学开放式动物实验课程学习的过程和学习效果进行了阐述和探讨,表明在生物化学与分子生物学开放式动物实验中引入转化医学的理念,将理论知识与实验实践紧密联系,既提高了理论知识学习的兴趣,又培养和锻炼了科研思维和动手能力。

IL-2联合银耳多糖激活的同种脾细胞对肝癌实验性治疗的研究

目的 :研究淋巴因子IL 2联合银耳多糖 (TremellaPolysaccharideTP)共同激活的小鼠腺细胞对体外肿瘤细胞的杀伤作用及小鼠移植性肝癌的治疗作用。方法 :将IL 2激活的小鼠脾细胞 (即LAK细胞 )和IL 2与银耳多糖协同激活的小鼠脾细胞 (即TP LAK细胞 )分别作用于体外培养的3H TdR标记的肿瘤细胞P815、H2 2和B16 ,2小时后用γ 闪烁计数仪进行检测 ,并记算杀伤程度。将上述激活的小鼠脾细胞在小鼠荷肝癌局部皮下注射 ,隔日 1次 ,共 5次。检测肿瘤重量、体积、组织学改变和主要脏器的形态学改变。结果 :IL 2与银耳多糖激活的小鼠脾细胞对体外培养的肿瘤细胞有明显的杀伤作用 ,两种效应细胞对B16杀伤作用最强 ,H2 2次之 ,P815最弱 ,TP LAK细胞的作用较之LAK细胞更强 (P <0 0 5 )。治疗组肝肿瘤重量、体积均低于对照组。组织学上肿瘤坏死程度重且范围广 ,淋巴细胞、单核细胞浸润明显 ,纤维组织增生明显。银耳多糖协同IL 2实验组织较单纯的IL 2实验组表现的更为明显。除脾脏外 ,其它主要脏器无明显形态学变化。结论 :IL 2激活脾LAK细胞是有效的抗肝癌细胞 ,IL 2与银耳多糖在活化脾细胞提高抗肿瘤方面具有协同作用 。

银耳多糖对小鼠移植性肝癌治疗作用及机制的实验研究

目的研究银耳多糖(Trem ella Polysaccharide,TP)对荷HAC小鼠T细胞表面分化抗原、细胞因子、体外肿瘤细胞的杀伤作用及小鼠移植性肝癌的影响。方法用环磷酰胺和TP分别作用于荷HAC肝癌小鼠,采用免疫荧光法、流式细胞仪及酶标仪观察各组免疫功能的变化及细胞因子的表达,并分离其脾细胞,将诱导的细胞毒性T细胞(CTL细胞)分别作用于体外培养的3H-TdR标记的肿瘤细胞P815、HAC和B16,4 h后用γ-闪烁记数仪进行检测,并记算杀伤程度。检测各组肿瘤重量、体积、组织学改变和主要脏器的形态学改变。结果TP实验组总T细胞、T杀伤细胞及肿瘤坏死因子(TNF)分别为(62.3±1.06)、(25.6±0.87)及(87.5±0.5),高于对照组,其中对总T细胞及TNF上调明显。在对HAC、P815、B16肿瘤细胞的杀伤作用中,TP实验组的杀伤活性明显高于对照组,分别为23.85%、20.81%、25.43%(P<0.01),其中对B16杀伤作用最强,HAC次之,P815最弱。环磷酰胺+TP实验组上述指标与TP实验组相比有所下降,但与对照组相比则明显增高(P<0.05)。治疗组肝肿瘤重量、体积均低于模型组。组织学上肿瘤坏死程度重且范围广,淋巴细胞、巨噬细胞浸润明显,纤维组织增生显著。环磷酰胺组较实验组表现的更为明显。TP实验组除脾脏外,其他主要脏器无明显形态学变化。结论TP具有激活和提高特异性和非特异性杀伤细胞的抗肿瘤作用。

内质网应激PERK-eIF2α-ATF4信号通路在延缓APP/PS1小鼠移植瘤生长中的作用

目的:探讨内质网应激(ERS)及内质网自噬对移植黑色素瘤模型淀粉样蛋白前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)小鼠移植瘤生长的抑制作用,并阐明蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核翻译起始因子2α(eIF2α)-活化转录因子4(ATF4)通路在其抑制作用中的可能机制。方法:体外培养B16细胞,通过皮下注射分别植入C57和APP/PS1小鼠背部皮下,建立C57BL/6J和APP/PS1雄性小鼠移植黑色素瘤模型,作为C57移植瘤组(n=7)和APP/PS1移植瘤组(n=7)。观察2组小鼠出瘤时间并计算肿瘤体积,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组小鼠移植瘤组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、PERK和溶酶体组织蛋白酶L(cathepsin L)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组小鼠移植瘤组织中GRP78、PERK、磷酸化PERK(p-PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、活化转录因子4(ATF4)和内质网自噬标志蛋白FAM134B蛋白表达水平,免疫组织化学法检测移植瘤组织中蛋白质二硫异构酶(PDI)蛋白表达情况,免疫荧光法测定2组小鼠移植瘤组织中腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)水平。结果:与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠出瘤时间晚,肿瘤体积小(P<0.05),移植瘤组织中ERS相关基因GRP78和PERK mRNA表达水平升高(P<0.05),移植瘤组织中GRP78、p-eIF2α/eIF2α和ATF4蛋白表达水平及p-PERK/PERK比值均升高(P<0.05)。C57移植瘤组肿瘤细胞胞质内多见黑色素颗粒,为移植瘤组织的形态特征,可见少量棕黄色颗粒,为PDI阳性颗粒;APP/PS1移植瘤组肿瘤细胞胞质内可见少量黑色素颗粒和广泛表达的棕黄色颗粒。与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠移植瘤组织中内质网自噬标志蛋白FAM 134B蛋白表达水平升高(P<0.05),cathepsin L mRNA表达水平升高(P<0.05),ATP水平降低(P<0.05)。结论:APP/PS1移植瘤模型小鼠肿瘤生长缓慢,其机制可能与ERS的PERK-eIF2α-ATF4信号通路被激活有关。

PARP抑制剂3-AB改善糖尿病大鼠心功能

糖尿病性心肌病（diabetic cardiomyopathy，DCM）是导致糖尿病患者晚期死亡的主要原因之一。近年的研究表明，线粒体电子传递链过氧化物的产生增多是导致DM并发症发生4条途径的共同机制。PARP是DNA链氧化损伤的传感器^[1]，与DCM的发生密切相关。然而，PARP的抑制剂3-AB对DCM的防治作用及机制少有报道。本研究旨在探讨3．AB对糖尿病心肌的保护作用，为临床DCM的防治提供可靠依据。

线粒体动力学改变对APP/PS1小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用

目的:探讨线粒体动力学的变化对APP/PS1转基因小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用及其机制。方法:将C57BL/6J(C57)和APP/PS1雄性小鼠分为C57移植瘤组(n=7)和APP/PS1移植瘤组(n=7)。观察2组小鼠肿瘤出现时间并计算肿瘤体积,绘制移植瘤生长曲线。光学显微镜观察2组小鼠肿瘤组织形态表现,Western blotting法检测2组小鼠肿瘤组织中线粒体融合蛋白2(Mfn2)、动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、泛素化及多泛素化蛋白、LC3、PINK1及Parkin蛋白表达水平。结果:C57移植瘤组和APP/PS1移植瘤组小鼠皮肤下均见肿瘤组织,肿瘤细胞内呈现黑色素颗粒。与C57移植瘤组比较,APP/PS1移植瘤组小鼠出瘤时间晚,肿瘤组织体积小(P<0.05)。小鼠肿瘤组织中Mfn2表达水平降低(P<0.05),Fis1和Drp1表达水平升高(P<0.05),泛素化及多聚泛素化蛋白、LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:APP/PS1小鼠移植瘤模型肿瘤生长缓慢,其机制可能与PINK1/Parkin通路参与线粒体自噬有关。