检验医学教育现状与改革

从检验医学教育发展的现状及面临的挑战，提出只有加快检验医学教育改革，才能为社会培养出多层次高质量检验医学人才，以适应社会发展和医学发展需要。

编写医学检验专业题库的几点策略

编写医学检验专业题库是教学任务的需要。题库具有安全性好,兼顾新旧考试模式,功能完善、易管理等特点,具有鲜明的专业特色,表现在选题、考试试卷形成。题库具备网络化自动管理及评分功能、具备试题分析及统计报表功能,使用该题库系统可直接提高教学质量、改善教学中存在的问题,使学生和教师,都能从题库中获益.北华大学医学院检验系,自主开发的医学检验专业题库系统,在2000年全国临床生物化学学科组会议上,受到全国多家重点医科大学检验专业专家一致好评。

检验专业寄生虫教学改革体会

为了适应现代医学飞速发展的需要,1999年国家教委制定了新的检验专业人才培养目标。这一目标趋于使医学院校毕业的检验专业学生应该是厚基础、宽知识、强能力、高素质、工作适应范围广。为此,我们采取了一系列措施,致力于这些目标的实现。1 理论——实践一体化教学模式传统的教学模式是老师先讲理论,学生机械地听、记、背,然后再到实验室进行与理论课相关的实验,这是目前普遍采用的教学方法。

柴胡皂甙d(SSd)对K562细胞凋亡及基因表达影响的研究

目的 :观察从柴胡中提取的单体成分柴胡皂甙d诱导白血病细胞株K562细胞凋亡及对其基因表达的影响。方法 :分别用 5μg/ml、7.5μg/ml、1 0 μg/ml浓度的SSd作用于K562细胞株 ,于药物作用后不同时间段 (1 2 ,2 4 ,36 ,48,60h) ,荧光染色法观察基凋亡状况、间接免疫荧光法测Bcl- 2表达情况。结果 :荧光染色结果显示 :K562在 1 0 μg/ml处理 2 4h后 ,开始出现凋亡小体 ,48h后出现大量死细胞。间接免疫荧光法测Bcl- 2表达 ;经SSd作用后K562细胞Bcl-

肿瘤标志物联合检测在原发性肝细胞癌早期诊断中的应用

用生物发光免疫分析法、比色法联合检测确诊的原发性肝细胞癌(53例)、乙型病毒性肝炎(80例)、慢性乙肝合并肝硬化(34例)患者同份血清的肿瘤标志物甲种胎儿蛋白(AFP)和肿瘤特异性生长因子(TSGF).结果显示,原发性肝细胞癌组血清TSGF和AFP与其他组比较均有显著差异(P<0.01);原发性肝癌组中TSGF与AFP联合阳性检出率为96.2%.

幽门螺杆菌临床菌株2148bp的cagA基因片段克隆、表达及免疫性鉴定

目的 克隆幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)临床菌株的cagA基因片段 ,构建原核表达系统 ,鉴定重组表达产物的免疫原性。方法 由于cagA基因核苷酸序列变异较大 ,选择序列相对稳定的 2 14 8bp为目的片段 (cagA1)。采用高保真PCR扩增幽门螺杆菌临床分离菌株Y0 6中的目的片段cagA1,T -A克隆后测序。构建 pET32a的cagA1片段表达载体 ,在E coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达。采用Ni-NTA亲和层析法收集表达的目的重组蛋白 (rCagA1)。采用Hp全菌抗体的Westernblot鉴定rCagA1免疫反应性 ,免疫双扩散试验鉴定rCagA1免疫家兔的抗血清效价。 结果 PCR获得预期大小的目的扩增条带。与文献报道比较 ,克隆的cagA1核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 94 83%和93 30 %。所构建的原核表达系统 pET32a -cagA1-E coliBL2 1DE3目的重组蛋白 (rCagA1)表达量为细菌总蛋白的 30 %左右。Westernblot证实rCagA1能与Hp全菌抗体发生特异性免疫结合反应。兔抗rCagA1血清的免疫双扩散效价为 1∶4。结论 本文成功地构建了HpcagA基因片段cagA1的高效原核表达系统 ,所表达的rCagA1具有良好的免疫原性和免疫反应性 ,为进一步研制cagA及其抗体检测试剂盒奠定了基础。

六亚甲基双乙酰胺与烟酰胺联合使用对MELDS19细胞有更强的促分化作用

目的研究六亚甲基双乙酰胺(HMBA)、烟酰胺(HMBPA)单独及两者联合使用对MELDS19细胞生长及分化的影响。方法绘制HMBA和HMBPA单独及两者联合使用后的MELDS19细胞生长曲线,成集落实验检测细胞增殖,联苯胺染色法检测其分化百分率。结果MELDS19细胞在HMBA与HMBPA联合作用下增殖能力下降,并且比单独作用强,联苯胺染色阳性率增高。结论HMBA与HMBPA联合作用能增强抑制MELDS19细胞的生长繁殖并促使其分化。

病毒与细胞凋亡

本文阐述病毒与细胞凋亡的关系。

亚硒酸钠溶液诱导胃上皮肿瘤SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的：探讨亚硒酸钠能否诱导胃上皮肿瘤SGC-7901细胞凋亡，以及凋亡诱导与细胞周期改变的关系。方法：亚硒酸钠溶液不同浓度、不同作用时间分别处理SGC-7901细胞，应用电子显微镜观察亚硒酸钠溶液作用后细胞形态变化，应用DNA末端原位标记染色法（TUNEL）及流式细胞仪技术分析细胞凋亡及细胞周期的改变。结果：亚硒酸钠作用于SGC-7901细胞后，可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化：细胞核固缩、染色质凝集、呈新月型紧贴于核膜周边，核碎裂，染色质片段化，凋亡小体形成等。流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”。TUNEL染色法细胞凋亡指数在8．4％～33．4％。结论：亚硒酸钠能够诱导SGC-7901细胞凋亡，亚硒酸钠诱导SGC-7901细胞凋亡与细胞周期阻滞密切相关。

人类疱疹病毒6型包膜胆固醇去除及糖蛋白表达

目的探讨人类疱疹病毒(HHV)-6型包膜胆固醇去除后,对其包膜糖蛋白表达水平的影响。方法用0,1,2,3,5,10 mmol/L不同浓度的甲基-β-环糊精作用于HHV-6A GS株,经20%蔗糖缓冲液梯度离心,去除甲基-β-环糊精,并纯化病毒,采用胆固醇含量检测试剂盒测定病毒胆固醇含量;纯化后的病毒感染HSB-2细胞后,用免疫蛋白杂交方法检测包膜糖蛋白的表达。结果不同浓度的甲基-β-环糊精作用HHV-6A后,其包膜胆固醇含量与甲基-β-环糊精的浓度呈负相关,从35μg/ml下降到10μg/ml以下;与未经处理的病毒比较,其包膜糖蛋白的表达水平未发生改变,糖蛋白gQ1和gL的表达均处在同一水平。结论甲基-β-环糊精可去除HHV-6A包膜胆固醇,且包膜胆固醇的缺失并未影响包膜糖蛋白的表达。

骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异(英文)

背景:近年来,发现一些基因的单核苷酸多态性可能与骨关节炎的易感性有关,以往研究主要集中于骨关节炎与类风湿性关节炎滑膜细胞基因表达差异,滑膜成纤维细胞与其他组织成纤维细胞基因表达差异与骨关节炎的关系有待研究。目的:观察骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异。设计:观察对比分析。单位:深圳市人民医院。材料:骨关节炎患者(均符合1995年美国风湿病学会的骨关节炎诊断标准)滑膜及正常志愿者皮肤由深圳市人民医院骨科提供,所有提供皮肤者均对实验项目知情同意。RPMI 1640培养基、胎牛血清、TRIZOL试剂(美国Invitrogen Life Technologies公司),pGEM-T质粒系统(美国Progema公司),Display PROFILE-BASIC及Display PROFILEProbe试剂盒(美国Qbiogen公司)。方法:实验于2005-01/06在深圳市人民医院完成。选取骨关节炎患者滑膜,经原代培养获得滑膜成纤维细胞,采用正常志愿者原代培养皮肤成纤维细胞作为对照。采用限制性酶切片段差异展示技术分离骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞差异表达的基因,使用blast比对将所得序列与Genbank中所有序列进行比对分析。主要观察指标:关节炎患者滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异。结果:骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与正常志愿者皮肤成纤维细胞相比,超氧化物歧化酶、TFPI2、CXCL2、CXCL6、转化生长因子基因表达水平较高。结论:超氧化物歧化酶、TFPI2、CXCL2、CXCL6、转化生长因子基因在骨关节炎滑膜成纤维细胞表达水平高于皮肤成纤维细胞中相应基因表达水平,表明这些基因在骨关节炎疾病的发生过程中可能起到一定作用。

人类疱疹病毒-6B包膜糖蛋白gO和gL在感染细胞中的表达与检测

目的了解HHV-6B包膜糖蛋白gO和gL在感染细胞中的表达时间,为今后研发抗病毒药物提供实验依据。方法采用免疫荧光染色法镜检不同时间段的HHV-6B感染细胞,并平行收集样本,用蛋白免疫印迹法对样本进行gO和gL的鉴定,以了解其表达状态。结果荧光显微镜观察显示gO和gL开始表达的时间均是感染后20h,分别在120h、96h达到高峰,蛋白免疫印迹检测的结果基本与前者相符。结论HHV-6B包膜糖蛋白gO和gL为病毒的晚期蛋白。

IgG糖链结构异常与类风湿性关节炎

近年研究发现类风湿性关节炎 (RA)患者血清中IgG糖链结构发生改变。这种改变先于RA患者的临床症状出现 ,并与RA病理和病情复发密切相关 ,对RA的早期诊断和治疗具有重要意义。现就IgG的糖链结构改变、致病机制、酶学基础、检测方法及临床意义作一综述。

血管内皮生长因子与白细胞介素12在急性白血病不同时期血清中的变化

目的:由于造血干/祖细胞发生基因突变,子代细胞增殖失控等导致的恶性血液病。血管内皮生长因子和白细胞介素12参与这一发生发展过程,检测不同时期其在急性白血病患者静脉血中的水平,有利于认知与血管新生及体液免疫的相关性。方法:随机选择2005-06/2006-04在吉林市中心医院住院的急性白血病患者25例,均经FAB分型或免疫学分型确诊,患者知情同意,并经医院伦理委员会批准。将患者分为:①初诊未治组10例。②复发组5例。③完全缓解组10例。并设9名健康查体者为正常对照。应用定量酶联免疫吸附实验测定受试者血清中血管内皮生长因子和白细胞介素12的水平,在评定白细胞介素12水平时,将初诊未治组与复发组合并为初诊复发组:①两组的发病机制相似。②两组病例数较少,单独观察没有统计学意义。结果:25例患者和9名健康对照者均进入结果分析。①初诊未治组血管内皮生长因子含量高于完全缓解组及正常对照组(P均<0.05)。②正常对照组白细胞介素12水平与初诊复发组、完全缓解组之间差异均具有显著性意义(P均<0.05)。③正常对照组血管内皮生长因子含量与白细胞介素12之间存在负相关(r=-0.9644P<0.05)。④初诊复发组、完全缓解组血管内皮生长因子和白细胞介素12含量之间均无相关性(r=-0.0883,-0.3593,P均>0.05)。结论:急性白血病患者血清中血管内皮生长因子和白细胞介素12含量与临床病情变化有关,可以作为诊断和预测急性白血病发生和复发的指标。

菲律宾菌素对人类疱疹病毒-6型感染性的影响

[目的]了解菲律宾菌素减少人类疱疹病毒-6型包膜胆固醇后,对病毒感染性的影响。[方法]用不同浓度的菲律宾菌素作用于HHV-6A GS株,经20%蔗糖缓冲液梯度离心,去除菲律宾菌素并纯化病毒,分别感染HSB-2和Jurkat细胞,然后采用IFA法、Hoechst 33258核染色及免疫蛋白杂交等方法检测病毒受菲律宾菌素作用后,其对靶细胞的融合、进入的影响。[结果]菲律宾菌素能减少HHV-6A包膜胆固醇,病毒的感染性及诱导细胞融合的能力显著减弱。[结论]HHV-6A包膜胆固醇在细胞融合过程中起着重要作用,同时也是病毒进入宿主细胞的关键因素。

人骨关节炎滑膜组织cDNA文库的构建及分析

目的:构建骨关节炎滑膜组织的cDNA文库,为筛选与骨关节炎的发生特异相关的基因及探讨骨关节炎发病机制奠定基础。方法:实验于2006-01/10在深圳市人民医院骨关节科完成,选取骨关节炎患者滑膜,以Trizol一步法从骨关节炎滑膜组织中提取总RNA,分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,以pBlueScriptII为载体,构建关节炎滑膜组织cDNA文库,对随机挑取的克隆进行鉴定。结果:①总RNA及mRNA的质量:总RNA经分光光度计测定,测得mRNA的A260nm吸光度值为0.245,平均得率为0.45g/L,A260nm/A280nm=1.84,无DNA、蛋白质及小分子污染。符合建库要求。②cDNA的合成及分析:10μg mRNA反转录合成cDNA,合成的cDNA大小为0.5￣9.0kb,且主要集中在1.0￣2.0kb之间。③文库的鉴定:将50ng的cDNA与质粒载体pBlueScriptII连接过夜,采用电转化法转化受体菌DH5A,经稀释铺板测定原始文库的滴度为1.45×109pfu/L,总克隆数为4.6×105,重组率为96.2%,扩增后文库总滴度为6.4×1012pfu/L,插入片段多分布在0.5～2.6kb之间。结论:构建关节炎滑膜组织cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段,为克隆关节炎相关功能基因的研究奠定了基础。

hTRT反义基因转染对人结肠癌细胞生长的抑制作用

利用基因重组技术,hTRT基因反向插入真核表达载体pcDNA3.0,获得重组体pcDRTRT,通过脂质体法导入人结肠癌细胞株SW-111C,获得稳定转染细胞系,即反义细胞,该细胞易脱落,出现明显生长抑制现象;失去叠落生长能力;流式细胞仪(FCM)证实导入反义hTRT后,G0/1期细胞增加,G,M和S期细胞减少,增殖指数(PI)降低;且不能在软琼脂中形成集落;并发现反义细胞中hTRT表达水平明显下降。说明反义hTRT基因体外导入结肠癌细胞株SW-111C可以明显降低端粒酶活性,抑制结肠癌细胞的生长、增殖且能使其恶性表型发生逆转。

人类疱疹病毒6B型纯化鉴定方法比较和优化

目的通过对人类疱疹病毒(HHV)-6B纯化后鉴定手段的比较,筛选或优化出简单、快速、准确特异的方法。方法采用蔗糖密度梯度离心法进行病毒纯化;通过PCR法、斑点杂交法、蛋白免疫印迹法对纯化样品中HHV-6B进行鉴定,以确定收集阳性样品的范围。结果3种方法都可鉴定出阳性病毒体,但是在样品的阳性收集范围、鉴定所需时间以及成本上表现差异。结论纯化HHV-6B后的初步鉴定,最好采用PCR法和斑点杂交法。

雌激素对抑郁症大鼠行为学及缰核内去甲肾上腺素含量的影响

目的:研究雌激素对抑郁症大鼠行为学及缰核内去甲肾上腺素含量的影响,探讨雌激素在抑郁症发病中的作用。方法:40只雌性Wistar大鼠经敞箱试验初筛后,将行为学评分相近的30只随机分为假手术抑郁症模型组(Sham)、去卵巢抑郁症模型组(OVX)和去卵巢抑郁症雌二醇干预组(OV/ER)。将大鼠卵巢摘除后,采用慢性应激刺激制作抑郁症模型,自刺激第3天起对OV/ER组进行雌激素干预。运用敞箱试验和强迫游泳试验观察大鼠行为学的改变,应用高效液相色谱法检测其缰核内去甲肾上腺素(NE)含量的变化。结果:慢性应激第21天时,敞箱试验显示,OV/ER组大鼠水平运动和垂直运动与OVX组比较行为活动明显增加(P<0.05),OV/ER组中央格停留不动时间与OVX组比较明显减少(P<0.05);强迫游泳试验显示,OV/ER组水中不动时间明显低于OVX组(P<0.05),OV/ER组上窜时间明显高于OVX组(P<0.05)。OV/ER组缰核内NE含量与OVX组比较明显升高(P<0.05)。结论:缰核可作为雌激素作用的靶点,参与其介导的抗抑郁作用。