实时荧光聚合酶链反应技术检测乙型肝炎病毒YMDD变异的研究

目的采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术检测慢性乙型肝炎(CHB)患者在使用拉米夫定过程中,乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的发生情况,并研究影响变异发生的相关因素,为临床预测和判断HBV YMDD变异提供一定的依据。方法选择50例CHB患者作为拉米夫定治疗组,30例CHB患者作为对照组。采用实时荧光PCR方法分别检测两组在用药期间HBV YMDD变异的发生情况,同时采用荧光定量PCR方法检测治疗组在用药前后HBV DNA水平。结果治疗组在用药52周时的变异率24.0%,明显高于对照组52周时的变异率3.3%(P<0.05);治疗组在用药52周时的变异率24.0%,明显高于用药26周时的变异率4.0%(P<0.05);治疗前HBV DNA水平较高组(28例)患者在用药52周时的变异率(35.7%)明显高于HBV DNA水平较低组(22例)患者的变异率(9.1%)(P<0.05);治疗组中未变异的38例患者在用药52周时的HBV DNA阴转率(65.8%)明显高于变异的12例患者的HBV DNA阴转率(16.7%)(P<0.05)。结论拉米夫定可导致HBV YMDD变异的产生,并且该变异的发生率随着拉米夫定的用药时间的延长而增加;HBV YMDD变异的发生同血清HBV DNA水平相关。

重组溶瘤腺病毒rAd-E1A-CDglyTK的构建和体内、外抑杀瘤作用的实验研究

目的构建重组溶瘤腺病毒r Ad-E 1A-CDgly TK,并研究其在体内、体外杀瘤作用的应用。方法选取2011年2月~2013年12月北华大学附属医院收治的卵巢癌患者100例,随机均分为治疗组与对照组（n=50）,治疗组采取患者的癌症细胞SKOV 3细胞,将病毒质粒经介质传染给癌症细胞并进行PCR体外扩增,经紫外线分光光度法检测病毒颗粒浓度,以TCID 50法检测感染性滴度,并计算病毒比活性,保证植入的病毒含有E 1A基因片段;对照组患者进行体内植入重组溶瘤腺病毒r Ad-E 1A-CDgly TK,观察抑制杀瘤疗效。结果经PCR体外扩增,得到DNA片段,进行凝胶电泳,可知植入的重组溶瘤腺病毒含有E 1A基因片段。通过紫外线分光光度法测得治疗组病毒颗粒浓度比上测得的感染性滴度得到病毒比活性为3.56%,显著高于对照组2.01%（P〈0.05）。进行体外抑瘤实验中,治疗组注入病毒成分为r Ad-E 1A-CDgly TK,其对SKOV 3细胞的生长抑制率为（16.59±1.57）,显著高于含有r AdCDgly TK的对照组生长抑制率（10.80±1.47）（P〈0.05）。体内抑瘤实验中,治疗组生长抑制率为（26.12±8.11）,显著高于对照组（1.69±4.12）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论重组溶瘤腺病毒r Ad-E 1A-CDgly TK具有较好的抑制杀瘤作用,其中体内杀瘤强于体外杀瘤,疗效显著,值得推广使用。

乙型肝炎病毒感染者CD8^+T淋巴细胞T细胞抗原受体Vβ基因互补决定区3克隆化特征的研究

目的研究乙型肝炎病毒感染者CD8+T淋巴细胞T细胞抗原受体(TCR)Vβ基因互补决定区3(CDR3)克隆化特征。方法选用20例乙型肝炎感染者及20例同期健康体检者,应用多引物聚合酶链反应(PCR)方法同时扩增TCR Vβ基因CDR3区多个片段,高分辨率琼脂糖凝胶电泳检测克隆化特征。结果乙型肝炎病毒感染者CD8+T细胞TCR Vβ9和Vβ14克隆化明显高于正常对照组,分别为70.0%vs 25.0%、85.0%vs 30.0%(P<0.01)。结论乙型肝炎病毒感染者存在CD8+T细胞TCR Vβ9和Vβ14克隆性变化。

流式细胞术检测淋巴细胞Fc受体及其对HBV感染者疾病诊断价值的研究

目的建立FcR标记检测方法,探讨FcR的表达在乙型肝炎慢性化过程中的作用。方法制备FITC标记的聚合IgG,标记淋巴细胞表面的FcR,应用流式细胞术分析急性和慢性乙型肝炎患者各病程时期FcR表达的阳性淋巴细胞百分率。结果慢性乙型肝炎患者FcR的表达较对照组和急性乙型肝炎康复患者显著低下(P<0.01);急性乙型肝炎患者急性发作期FcR阳性细胞百分率明显高于对照组(P<0.01);急性乙型肝炎应用干扰素(IFN)治疗1个月后及完全康复后FcR阳性细胞百分率与正常对照组相一致。结论流式细胞仪检测淋巴细胞FcR表达,有助于判断乙型肝炎患者的病情、估测预后和指导治疗。

吉林人群强直性脊柱炎6号染色体短臂上的HLA区域遗传易感基因定位研究

为了寻找中国人群中与强直性脊柱炎相关的新的易感基因及其所在位置,在与强直性脊柱炎强连锁的6号染色体短臂上的HLA基因区域内选取11个SNPs多态位点,通过对中国吉林地区79名AS患者和132名正常对照者进行case-control分析,发现TNF-α-850处TT突变基因型在AS组中的分布高于正常对照组(P=0.027),突变型T等位基因在AS组和正常对照组中的分布差异更为显著(P=0.002)。通过多位点之间的连锁不平衡分析发现,LTA基因、TNF-α基因、LST1基因和NCR3基因中的5个SNPs多态位点之间存在连锁不平衡,范围是15kb,在这5个SNPs多态位点组成的单体型中,TCTTC单体型在AS组和正常对照组中的分布有显著差异(χ2=7.406,P=0.0065),并且该单体型中含有具有统计学意义的TNF-α–850的突变型等位基因T。提示在LTA、TNF-α、NCR3和LST1这4个基因构成的15kb范围内可能存在增加AS患病易感性的位点,可能是TNF-α–850C→T突变,也可能是在TNF-α–850附近的其他位点。

乳腺癌患者荷瘤状态T淋巴细胞亚群检测及其临床意义

目的检测乳腺癌患者外周血T淋巴细胞总数及T淋巴细胞亚群中的CD4+T细胞、CD8^+T细胞、CD45RA^+T细胞、CD45RO^+T细胞的百分率以评价患者的免疫状态。方法试验组选择女性原发性乳腺肿瘤患者40例,其中Ⅰ期乳腺癌23例,Ⅱ+Ⅲ期乳腺癌17例;以女性健康体检者30例为对照组。应用流式细胞仪,采用三色荧光免疫标记技术分别检测各组外周血T淋巴细胞亚群的数量,统计分析各组检测结果的差异性。结果试验组CD3^+T细胞、CD4^+T细胞百分率明显低于对照组(P<0.05),Ⅱ+Ⅲ期患者明显低于Ⅰ期患者(P<0.05)。与对照组比较,试验组CD45RA^+T细胞明显减少,而CD45RO^+T细胞明显增多(P<0.05);与Ⅰ期乳腺癌患者比较,Ⅱ+Ⅲ期乳腺癌患者CD45RA^+T细胞明显减少,而CD45RO^+T细胞明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 T细胞亚群检测是评价肿瘤患者细胞免疫功能的重要指标,具有重要的临床应用价值。乳腺癌患者免疫功能与肿瘤恶变的发生、发展及临床分期有一定相关性,随着病情的进展,机体免疫功能呈现下降趋势。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对大鼠急性心肌损伤血管新生的作用

目的 观察粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）预处理对异丙肾上腺素（Iso）所致大鼠急性心肌损伤后新生血管密度的影响.方法 雄性、成年Wistar大鼠60只,体质量约190 g.按体质量将大鼠随机分成3组：对照组,GM-CSF预处理组（GM-CSF组）,Iso损伤组,每组20只.GM-CSF组提前给予注射用人重组（rh）GM-CSF 5.0μg/kg,1次/d,尾静脉注射,连续3 d.在注射后的第3天,GM-CSF组和Iso损伤组同时给予Iso,按15.0 mg/kg腹腔注射,1次/d,连续3 d;对照组给予等量次生理盐水.注射后第10天.观察各组大鼠心肌损伤的病理改变和坏死灶面积;免疫组化方法测量、等大鼠心肌组织中新生血管密度指数：RT-PCR法检测大鼠心肌组织中多肽抗原（CD34）、血管内皮生长因子（VEGF）及VEGF受体（KDR/flk-1）的表达.结果 大鼠心肌坏死面积组问比较差异有统计学意义（F=10.07,P〈0.01）,其中GM-CSF组[（37.37 ±12.98）%]明显少于Iso损伤组[（45.51±14.96）%,P〈0.05].大鼠心肌组织中新生血管密度指数组间比较差异有统计学意义（F=25.54,P〈0.05）,其中GM-CSF组[（3980.05±477.22）个/mm2]显著高于Iso损伤组[（2605.93 ±361.49）个/mm2,P〈0.01].大鼠心肌CD34、VEGF、KDR/flk-1 mRNA表达组间比较差异有统计学意义（F值分别为17.83、4.29、4.10,P均〈0.01）;GM-CSF组[CD34（44.04±10.13）.VEGF（49.40±11.59）,KDR/flk-1（46.49 ±7.90）]均高于Iso损伤组[CD34（23.85±6.06）,VEGF（31.80±8.05）,KDR/flk-1（30.16±8.01）.P均〈0.01].大鼠心肌VEGF mRNA表达与其受体KDR/flk-1 mRNA表达呈正相关（r=0.725,R2=0.526,P〈0.01）.结论 GM-CSF预处理可增加大鼠心肌中新生血管密度.减轻Iso所致的大鼠心肌损伤.