非洲爪蟾孵化酶的cDNA结构及其部分生物化学特性的研究

以ＵＶＳ．２为探针从第２５期非洲爪蟾胚胎头背部的ｃＤＮＡ文库中筛选出了一个１８ｋｂ的孵化酶基因（ｘｈｅ），其转录产物最早出现于第１７期胚胎的头背部，在第３０期转录量达到高峰，随后便逐渐减少。该基因含有编码５１４个氨基酸的一个开框阅读框架，含有信号肽和原酶序列。所推测出的成熟蛋白有４２５个氨基酸，包括位于Ｎ端的含有２００个氨基酸的金属蛋白酶序列和位于Ｃ端的两个各１１０个氨基酸的ＣＵＢ重复区。而ＵＶＳ．２只代表该基因Ｃ端大约３／４的部分。同时还发现该酶分子量为６０ｋＤａ，是一种胰蛋白酶类型的金属蛋白酶。它很不稳定，在纯化过程中极易降解为４０ｋＤａ分子。６０ｋＤａ分子具有很强的卵黄膜溶解活性和蛋白酶活性。其中ＣＵＢ重复区很可能在介导卵黄膜和４０ｋＤａ分子中起着重要作用，而４０ｋＤａ分子很可能是在纯化操作过程中，由６０ｋＤａ分子发生降解或自身降解丢失了两个ＣＵＢ重复区而形成的，它只是６０ｋＤａ分子中的一个金属蛋白酶主功能区，所以它没有卵黄膜溶解活性，尽管仍具有很强的蛋白酶活性。

滑膜肉瘤动物模型的分子细胞遗传学研究

用１例日本滑膜肉瘤（ＳＳ）患者的瘤组织标本接种裸鼠，获得了肿瘤生长。亲本肿瘤与裸鼠肿瘤在病理组织形态上存在一定差异，＿但两者的免疫组织化学特征相同。染色体分析表明，ＳＳ细胞株存在染色体数目和结构异常，＿患者外周血淋巴细胞染色体核型为正常女性，４６，ＸＸ。ＳＳ细胞株巴氏小体检出率低于对照，其正常Ｘ染色体比易位Ｘ染色体晚复制１７小时。ＤＮＡ印迹实验表明，ＳＳＤＮＡ存在Ｄ２Ｓ３座位等位片段丢失，Ｄ１Ｓ５７，Ｄ１７Ｓ５和Ｄ１３Ｓ３０座位基因的部分缺失，但无ＤＸＳ７，ＤＸＳ１４和Ｄ２Ｓ４４座位基因改变。

His/GST-HDAC1在大肠杆菌中表达的研究

目的:对His/GST-HDAC1在大肠杆菌BL-21中的表达进行研究。方法:HDAC1的完整基因片断被克隆到pColdⅠ载体和pGEX载体上,并在其N末端分别联有His和GST;采用大肠杆菌BL21对HDAC1进行表达;采用亲和色谱对HDAC1进行纯化;用SDS-PAGE和蛋白质印迹来验证表达和纯化效果;对HDAC1活性进行测定。结果:多数HDAC1存在于大肠杆菌BL-21细胞裂解液的沉淀组分和纯化过程中的未结合组分中,小部分HDAC1可从细胞裂解液的上清液中得以纯化,但未显现出酶活性。用FPLC对HDAC1进行进一步分离,结果表明,HDAC1发生了分子聚集,使得它们的分子量大于正常分子量。结论:活性His/GST-HDAC1不能用大肠杆菌BL21成功表达。

非洲爪蟾孵化酶分子对卵黄膜作用方式的研究

非洲爪蟾（Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ）的孵化液对卵黄膜和二甲基酪蛋白具有降解活性。用非洲爪蟾孵化酶的特异性抗ＧＳＴ－ＵＶＳ２抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交的结果表明，孵化液中出现一种分子量为６０ｋＤ的大组分，有时也会出现一种分子量为４０ｋＤ的小组分。含有大组分的酶样品具有很强的卵黄膜溶解活性，而只含有小组分的酶样品没有卵黄膜溶解活性，尽管二者具有几乎完全相同的蛋白酶活性。一系列卵黄膜溶解活性分析的结果表明，小组分孵化酶也参与了对ＶＥ的降解，但它对卵黄膜的成功溶解需要大组分孵化酶的协助。大组分孵化酶中的ＣＵＢ重复区对卵黄膜的分子结构具有识别或修饰作用，正是这种识别或修饰作用才使小组分孵化酶溶解卵黄膜成为可能。

蟾蜍细胞溶素的纯化及其生化特性研究

利用阴离子交换和凝胶过滤柱层析等方法对蟾蜍卵黄外被细胞溶素进行了分离纯化，获得了高纯度的样品．该酶的质量为３２ｋＤ，其特异性ＭＣＡ－人工合成底物为Ｂｏｃ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－ＭＣＡ，能被ＤＦＰ、ＳＢＴＩ、ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ和ｐ－ＡＭＰＳＦ等蛋白酶抑制剂所强烈抑制，但不受ｃｈｙｍｏｓｔａｔｉｎ、ｂｅｓｔａｔｉｎ、Ｅ－６４和ＥＤＴＡ等的影响。

拟南芥突变体arf8和nph4/arf7的长下胚轴表型的初步研究

通过对拟南芥(Arabidopsis thaliana)ARF8和NPH4/ARF7基因的突变体以及有关双突变体的下胚轴长度的表型和遗传分析,探讨了arf8-1、nph4-102和nph4-107长下胚轴表型的起源.结果表明,ARF8基因的其他突变体arf8-2、arf8-3和arf8-4都没有表现出类似于arf8-1的长下胚轴表型;在与ARF8同源性较高的NPH4/ARF7的突变体中,突变位点与arf8-1相似的nph4-102和nph4-107表现出与arf8-1相似的长下胚轴表型和不完全显性的遗传方式;双突变体arf8-1 nph4-102的下胚轴长度比两个单突变体的长,说明arf8-1与nph4-102在长下胚轴表型上存在加性效应.因此,arf8-1、nph4-102和nph4-107的长下胚轴表型极可能源于相应突变体蛋白的产生,而非相关基因功能的缺失.

Ewing氏肉瘤的分子细胞遗传学研究

用1例Ewing氏肉瘤(ES)患者(例3)的瘤组织mRNA构建了cDNA文库,从中筛选出含有与人γ-烯醇化酶(γ-cnolase,γENO)基因同源的cDNA克隆,根据其中同源性>70％的第1216和1534号核背酸序列,设计合成了1对人γENO基因特异性引物,用PCR从例3瘤组织DNA中分离出1个181bp片段。用其作DNA探针与EcoRI、BamHI及HindⅢ酶切的例1和例2患者配对的正常组织(N)和瘤组织(T)以及例3的TDNA杂交,在患者的NDNA中识别出2-6个等位片段,在例3TDNA中识别出1-4个等位片段,在例2 TDNA中识别出多个等位片段的丢失,在EcoRI酶切的例1 TDNA中识别出1个17.5kb新片段,在BamHI酶切的例1 TDNA中识别出丢失1个2.8kb片段。此外,用DIS57、D2S44、D2S3、D13S30、D17S5 5个DNA标识探针与例1和例2配对的N和TDNA杂交表明,两例患者的TDNA丢失1个D2S44等位片段,例1 TDNA有D13S30基因的部分扩增,例2 TDNA有D2S3,D13S30及D17S5基因的部分缺失,3例ES瘤细胞均存在染色体数目及结构异常,其中例2和例3有t(11;22)(q24;q12)异常。

一个上皮样肉瘤细胞株的分子细胞遗传学研究

对建成的一个上皮样肉瘤(ES)细胞株进行了染色体分析和DNA印迹实验研究。结果表明,该瘤株染色体众数45,丢失1个22号染色体;结构异常为del(3)(q21.1)以及5、6、9和12号衍生染色体。用定位于人染色体3q13.1-q22的pPCC41A2克隆作为DNA标识探针,在该瘤株DNA中检出PCCB基因的部分缺失。本研究结果提示del(3)(q21.1)及PCCB基因的改变可能与ES癌变有关。

恶性纤维组织细胞瘤的染色体分析和DNA印迹实验研究(摘要)

为探讨恶性纤维组织细胞瘤(MFH)的病因及癌变机理,对8例日本该病患者进行本实验研究。 材料与方法 8例中席纹状-多形型7例,粘液样型1例,男女各半,年龄29～61岁。以患者外周血建成5个淋巴母细胞样细胞株,提供正常组织DNA。

马奶溶菌酶的分离和提纯

蒙古马奶经过硫酸铵沉淀，乳清蛋白脱盐，DEAE－SephadexA－25、SephadexG－100、CM－SephadexC－25柱色层分离得到马奶溶菌晦。以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检验其纯度，产率38mg干粉／L奶。

利用长周期脉动推定深层地基构造

一、前言通常,我们对無论何处的能够观测到的长周期脉动(包括稍长周期的脉动)进行观测,来开发推定地下1000米深处地下构造的方法。脉动是由人为振动和气象、海象等自然现象所产生的体波、面波的复杂结合。我们注目于脉动中所含的面波,首先在野外进行观测。

马奶溶菌酶的分离和提纯

蒙古马奶经过硫酸铵沉淀，乳清蛋白脱盐，DEAE—SephadexA—25，SephadexG—100，CM—Sephadex—25柱色层分离得到马奶溶菌酶。以SDS─聚丙烯酰胺凝胶电泳法检验其纯度。

蟾蜍(Bufo japonicus)细胞溶素基因筛选用探针的制备

利用阴离子交换、凝胶过滤和高压液相柱层析对细胞溶素基因进行了纯化，获得了纯度极高的酶样品．经ｌｙｓｉｌ 内肽酶进行定点酶切后，利用高压液相柱层析纯化出了该酶的多个短肽片段．其中，经测序获得了３ 个短肽片段的氨基酸序列．根据两栖动物中密码子的使用频率，可推测出其相应ｃ Ｄ Ｎ Ａ 的核苷酸序列，进而制备出了３ 个ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针．利用这些合成的探针，便可从精子ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库中筛选细胞溶素基因．