circBACH1靶向miR-4500调控口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

目的:探讨circBACH1对口腔鳞状细胞癌HSC3细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:体外培养HSC3细胞,分为si-NC组、si-circBACH1组、miR-NC组、miR-4500组、si-circBACH1+anti-miR-NC组、si-circBACH1+anti-miR-4500组,分别转染si-NC、si-circBACH1、miR-NC、miR-4500 mimics、si-circBACH1与anti-miR-NC、si-circBACH1与anti-miR-4500。qRT-PCR检测口腔鳞状细胞癌组织、癌旁组织及各组HSC3细胞中circBACH1、miR-4500的表达量;CCK-8、平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力;划痕实验与Transwell小室实验分别检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circBACH1对miR-4500的靶向调控作用;Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达量。结果:与癌旁组织比较,口腔鳞状细胞癌组织中circBACH1的表达量明显升高(P<0.01),miR-4500的表达量明显降低(P<0.01)。与si-NC组比较,si-circBACH1组HSC3细胞活力明显降低(P<0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显减少(P<0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-4500组HSC3细胞活力明显降低(P<0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显减少(P<0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P<0.01)。WT-circBACH1与miR-4500 mimics共转染组HSC3细胞的荧光素酶活性明显低于WT-circBACH1与miR-NC共转染组(P<0.01)。qRT-PCR实验结果显示,与pcDNA组比较,pcDNA-circBACH1组miR-4500的表达量降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-circBACH1组miR-4500的表达量升高(P<0.05)。与si-circBACH1+anti-miR-NC组比较,si-circBACH1+anti-miR-4500组HSC3细胞活力明显升高(P<0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显增多(P<0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显升高(P<0.01),E-cadherin蛋白水平明显降低(P<0.01)。结论:干扰circBACH1表达可通过负向调控miR-4500的表达从而抑制口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

淫羊藿苷对脂多糖诱导成骨细胞凋亡及GRP78/PERK/CHOP通路的影响

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对脂多糖(LPS)诱导成骨细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78/蛋白激酶R样内质网激酶/C/EBP同源蛋白(GRP78/PERK/CHOP)通路的影响。方法:采用大鼠骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞的方法,将成骨细胞随机分成5组:对照组(只含成骨细胞)、LPS组(成骨细胞中加入终浓度为500 ng·ml^-1LPS)、ICA低、中、高剂量组(分别在LPS组基础上加入终浓度为1,10,100μmol·L^-1ICA)。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用对硝基苯棕榈酸酯(PNPP)法检测成骨细胞碱性磷酸酶(AKP)活性的变化情况,采用ELISA法检测成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白表达情况,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测凋亡及GRP78/PERK/CHOP通路相关蛋白表达情况。结果:骨髓基质干细胞经定向诱导后,符合成骨细胞形态学表现,AKP染色呈阳性反应,Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色结果显示:细胞质染色呈棕黄色;与对照组相比,LPS组细胞48 h时的吸光度(A)值、AKP活性、Ⅰ型胶原蛋白和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)、Bax、GRP78、磷酸化的PERK(p-PERK)、磷酸化α亚基的真核起始因子2(p-eIF2α)、CHOP蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,ICA各剂量组细胞48 h时的A值、AKP活性、Ⅰ型胶原蛋白和Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、cleaved-caspase-3、Bax、GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:淫羊藿苷可能通过抑制GRP78/PERK/CHOP信号通路活化,抑制LPS诱导的成骨细胞凋亡。

白藜芦醇通过沉默信息调节因子/叉头转录因子通路对高糖诱导成骨细胞增殖、分化的影响

目的:探究白藜芦醇(resveratrol,Res)对高糖诱导成骨细胞增殖、分化的影响及其对沉默信息调节因子(silence information regulator 1,sirt1)/叉头转录因子(forkhead transcription factor 1,FOXO1)通路的影响。方法:分离培养大鼠下颌骨细胞,分为control组、高糖组、高糖+低剂量Res组、高糖+中剂量Res组、高糖+高剂量Res组,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色测定ALP活性,Alizarin red S染色检测钙化结节形成,Western blot法检测Ⅰ型胶原(Collagen typeⅠ,CoI)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)蛋白及sirt1/FOXO1通路蛋白表达情况。结果:与control组比较,高糖组成骨细胞增殖抑制率增加,高糖组ALP活性、钙结节沉积、CoI、RUNX2、OPN、OCN蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与高糖组比较,白藜芦醇添加组成骨细胞的A值、ALP活性、钙结节沉积、CoI、RUNX2、OPN、OCN蛋白表达水平显著增加(P<0.05),且随着浓度的增加而增加;与control组比较,高糖组成骨细胞sirt1、p27蛋白表达水平显著降低,FOXO1、Bim蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与高糖组比较,加入白藜芦醇后sirt1、p27蛋白表达水平明显升高,FOXO1、Bim蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇可能通过调节sirt1/FOXO1通路,改善高糖对成骨细胞增殖、分化的抑制作用。

全口义齿修复中预成全口牙列模板的应用效果

目的探究预成全口牙列模板应用于全口义齿修复中的临床效果。方法 72例全口义齿修复患者,根据治疗方法不同分为观察组及对照组,各36例。观察组患者采取预成全口牙列模板技术治疗,对照组患者采取二次印模技术治疗。比较两组患者治疗满意度。结果对照组患者不满意12例(33.33%),满意14例(38.89%),非常满意10例(27.78%),总满意度为66.67%;观察组患者不满意1例(2.78%),满意13例(36.11%),非常满意22例(61.11%),总满意度为97.22%。观察组患者总满意度明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论全口义齿修复患者采用预成全口牙列模板技术治疗满意度极高,制作简单,且模板能够重复使用,具有临床应用价值。

观察夹板粘接固定法用于治疗儿童前牙外伤的疗效

目的观察在儿童前牙外伤治疗过程中应用夹板粘接固定法的治疗效果。方法 34例儿童前牙外伤患儿均采用夹板粘接固定法进行治疗,评价其治疗效果。结果本组34例儿童外伤前牙(恒牙)患儿共有79颗外伤牙。经夹板粘接固定法治疗结束后复查,结果显示患牙无松动现象,经过X光根尖片检查显示患牙牙根根折面愈合良好。结论夹板粘接固定法具有固位效果稳定可靠、操作简单、不易脱落等优点,运用到儿童前牙外伤的治疗中能够有效促进混合牙列时期的患儿尽快恢复,具有重要的临床推广应用价值。