不同途径移植羊膜上皮细胞在肝脏的定居

背景:细胞移植对肝脏疾病具有一定的疗效,与肝脏移植相比有其自身的优点,但有诸多问题尚待解决。目的:探讨不同途径移植的人羊膜上皮细胞在肝脏内定居情况。方法:从剖腹产后的人胎盘羊膜中分离人羊膜上皮细胞,PKH26荧光标记后计数1×107细胞通过大鼠腹腔、门静脉、尾静脉及肝脏内直接注入方式移植入大鼠体内。结果与结论:门静脉、尾静脉及肝脏直接注入途径移植的细胞均在肝脏内定居,但移植细胞数过量时造成局部肝组织的缺血坏死等不良反应。腹腔途径移植入体内的细胞未转移肝脏内。通过门静脉移植入体内的人羊膜上皮细胞在大鼠肝脏内维持存活至少16d。移植细胞过量时,导致肝脏血管堵塞及坏死。证明人羊膜上皮细胞至少在大鼠肝脏中存活2周,提示低免疫原性的羊膜来源细胞可成为肝脏病治疗的候选细胞之一。

羊膜干细胞分离方法及其细胞学特性鉴定

目的按照Kobayashi方法从羊膜间充质细胞(AMCs)的侧群细胞(SP)中分离羊膜干细胞并予以细胞学特性鉴定。方法按文献法取剖腹产手术胎盘,用色素染色法和流式细胞分选技术从AMCs中分离羊膜干细胞进行原代培养,用PI染色DNA分析细胞周期,软琼脂培养法观察细胞体外集落,并与人肝癌细胞系HepG2比较。结果1.从AMCs中成功分离的(羊膜干细胞侧群细胞)AMCs-SP约占总AMCs的0.2%;2.细胞周期结果为AMC-SP细胞增殖缓慢或处于静止期;3.体外培养时细胞群体培增数达40以上,在软琼脂中AMC-SP不形成集落,与人肝癌细胞系HepG2可形成较大集落形成反差。结论AMC-SP具有细胞来源充足、稳定性好、安全性高、无伦理学争议,异体移植无急性免疫排外反应,无致瘤性的优点,可做为再生医学及急性损伤期疾病治疗的重要的人细胞来源应用于临床。

可溶化羊膜制备方法的建立及其应用

目的探讨建立可溶化羊膜的制备方法及其对细胞增殖的影响。方法从胎盘分离完整的羊膜,用物理化学方法去除细胞成分,形成多种形式的可溶化羊膜,制备包被培养皿,进行细胞培养并分析其增殖活性。结果羊膜可加工成液体、膜状及颗粒状的可溶化羊膜。用液体状的羊膜细胞外基质液制备不同浓度的包被培养皿,可进行间充质干细胞的培养。羊膜液包被培养皿比传统的生物材料包被培养皿细胞增殖活性明显增强,且增殖活性与包被浓度明显相关(P均<0.05)。结论去除细胞的可溶化羊膜可作为医学研究领域中重要的生物材料。

可溶化人羊膜液、绒毛膜液和全羊膜液对间充质干细胞增殖的影响

目的探讨可溶化人羊膜液（solubilized-amnion product,SAP）、绒毛膜液（solubilized-chorial product,SCP）、全羊膜液（amniotic fluid,AF）对羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSC）的增殖影响。方法用物理化学方法提取可溶化羊膜液、绒毛膜液、全羊膜液,用CCK-8试剂盒检测不同浓度的羊膜液、绒毛膜液、全羊膜液对h AMSC的增殖作用。剥去38~40周孕妇剖腹产术后羊膜,用消化酶消化后制备h AMSC。结果 h AMSC在可溶化羊膜液、绒毛膜液中生长良好,细胞增殖明显大于对照组,且培养液中的浓度具有显著依存性。全羊膜液培养前期增殖效果不明显,但培养4 d后出现浓度依存性的细胞增殖效果。这些生物材料对Hep G2无明显效果。结论可溶化人羊膜液、绒毛膜液、全羊膜液对干细胞具有促进增殖生长作用,有望成为干细胞研究与再生医疗领域中的新型生物材料。

整流片治疗尿频作用的临床观察

目的 临床观察整流片对尿频症状的治疗作用。方法 采用整流片治疗多种原因引起的尿频36例 ,观察患者治疗前后尿频等级程度、等级积分的变化 ,以及治疗效果。结果 治疗后的尿频积分均值与治疗前相比 ,有显著性差异 (P<0 .0 1) ;整流片对尿频的总有效率为 94 .4 4%。

痛消片(NM21S)止痛作用的临床观察

目的 临床观察痛消片 (NM2 1S)对疼痛症状的止痛作用。方法 采用痛消片 (NM2 1S)治疗多种原因引起的疼痛 36例 ,观察患者治疗前后疼痛等级程度、等级积分的变化以及止痛效果。结果 治疗后的疼痛积分均值与治疗前相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 1) ;痛消片 (NM2 1S)对疼痛的总有效率为 91.6 7%。 结论 痛消片 (NM 2 1S)

控制光线波长,打造舒适视野——NeoContrast^TM技术探究

日常生活中,光是我们观察物体时不可或缺的元素,但观察物体时所需光亮并非越多越清晰。因为人眼具有捕捉光并将信号传入视觉皮层的功能,无论在室内还是室外,均可持续接受来自不同波长的光的刺激。因此,要想使人眼更好地捕捉光线,并获得舒适视野,需从“折射矫正:捕捉光线并在视网膜上清晰成像的功能”和“光线波长的控制:阻断特定波长的光线,并改善视觉效果和保护眼睛的功能”这两方面同时入手。其中,第一种功能是捕捉通过眼镜片的光线将清晰图像传送至视网膜的功能(折射矫正),这早已为大众所知;第二种功能则是基于保护眼睛免遭有害光线刺激的观点,但我认为,目前控制光线波长对于改善视觉效果(quality of vision:QOV)的作用还未完全表现出来。

人羊膜间充质干细胞的生物学特性鉴定

目的分离提纯的人羊膜间充质干细胞的生物学特性鉴定。方法剥去38～40周孕妇剖腹产术后羊膜，用消化酶消化后制备人羊膜间充质细胞（hAMCs）悬浮液。利用流式细胞分选技术从hAMCs中分离提纯干细胞（hAMC-SP细胞），并对于细胞抗原进行鉴定。结果从hAMCs中分离的hAMC-SP细胞，约占AMCs总数的0．3％。传代培养4～10代后的hAMC-SP细胞表达Nestin、Vimentin、整合素家属成员（CD49b、CD49c、CD49d、CD49e）、CD9、CD13、CD19、CD29、CD44、CD46、CD51、CD59、CD166及干细胞相关的Oct-3／4抗原。HLA-ABC、TRA-1-81及SSEA-4为弱表达；相反CD34、CD45、CD117、CD56、CD90、CD105、CD106、CD133、Fit-1、Musashi 1及HLA-DR无阳性结果，同样TRA-1-60及SSEA-3也表达阴性。体外转化实验表示hAMC-SP细胞在琼脂糖培养基上不形成细胞集落，但阳性对照组的HepG2形成多数细胞集落。结论hAMC-SP细胞表面标记符合骨髓及脂肪间充质等来源的干细胞特点；hAMC-SP细胞迅速而稳定扩增，无致瘤性。由于来源充足，hAMC-SP细胞在消除HLA-ABC阳性细胞亚群下，同种异体移植在内的广泛的再生医学领域中能成为理想的细胞来源。

人羊膜上皮细胞对急性肝衰竭动物模型的治疗效果

目的探讨人羊膜上皮细胞（hAECs）对急性肝衰竭（ALF）大鼠模型的治疗效果。方法从剖腹产人胎盘中分离羊膜，经过0．1％Trypsin-0．02％EDTA处理分离hAECs。hAECs用PKH26荧光生物素标记后经腹腔、门静脉、尾静脉三种不同途径注射到大鼠体内，观察细胞在肝脏分布情况，筛选出合适移植途径。选择240—260g雄性大鼠，采用D一氨基半乳糖（D—gal）2g/kg体重腹腔注射法建立ALF大鼠模型。模型制备1d后随机分为对照组和细胞治疗组。治疗组经腹腔直接注射hAECs，对照组注射等量的生理盐水。观察21d内大鼠存活率、肝功能和组织病理变化。结果免疫组化检测显示hAECs表达白蛋白、糖原等肝细胞标记。经门静脉、尾静脉途径移植细胞后可见肝脏内移植细胞定居，经腹腔途径移植的细胞在肝脏内未见分布，但可将多量细胞植入体内且操作简便。由于尾静脉途径移植细胞数量有限，门静脉途径具有创伤且注射后产生微循环栓塞等情况，本课题组选择腹腔直接注射途径实施细胞治疗。细胞移植后大鼠存活率提高，肝功能及细胞因子指标有明显改善，肝脏组织病理逐渐恢复正常。结论通过腹腔途径移植的hAECs对ALF大鼠模型有明显治疗作用。