沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的树突状细胞疫苗治疗前列腺癌的实验研究

目的研究沉默细胞因子信号抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)基因联合rAAV/PSA基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)对前列腺癌LNCaP细胞的体外杀伤效应。方法应用重组腺相关病毒(rAAV)介导的RNA干扰技术沉默人DC的SOCS1基因的表达,行Western blot检测基因沉默效果。rAAV-shRNA-SOCS1和rAAV/PSA感染DC,将DC细胞分为Control-DC组、rAAV/PSA-DC组、SOCS1(-)+rAAV/PSA-DC组。采用系列细胞因子诱导DC成熟,诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。流式细胞术检测分析各组DC细胞表型及CTL细胞的免疫表型;ELISA法检测各组DC细胞培养上清中细胞因子白介素-10(IL-10)及IL-12 p70的分泌水平,各组CTL细胞释放γ-干扰素(IFN-γ)的水平;LDH法检测各组CTL细胞对前列腺癌LNCaP靶细胞的杀伤效率。结果rAAV-shRNA-SOCS1感染DC后,可有效下调DC的SOCS1表达水平。与对照组比较,沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的DC细胞培养上清中细胞因子IL-12 p70的分泌水平显著增高,IL-10的分泌水平明显下降(P<0.05);该组DC表面分子CD80、CD83和CD86的表达明显上调(P<0.05)。该组DC诱导的CTL中CD8^(+)、CD8^(+)CD69^(+)T细胞的比例明显增高,而CD4^(+)T细胞、CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg细胞的比例显著降低(P<0.05),IFN-γ的释放水平明显增高(P<0.05),对PSA阳性的前列腺癌靶细胞LNCaP具有更强的杀伤活性(P<0.05),且具有抗原特异性。结论沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的DC疫苗可以产生高效而特异性的抗前列腺癌免疫效应。

微血管内皮细胞来源的外泌体对血管性痴呆模型小鼠脑血管形成及神经损伤的作用研究

目的:探究微血管内皮细胞来源的外泌体对血管性痴呆(VD)模型小鼠脑血管形及神经损伤修复的影响。方法:采用超高速离心法提取小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3的外泌体,透射电子显微镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒追踪分析(NTA)测定外泌体径粒分布情况,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定外泌体标志蛋白CD 63、TSG101、Alix表达;将40只小鼠按照随机数字表法分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、外泌体(b-Exo)组、阳性对照(DP)组,每组10只,除假手术组,其余3组小鼠均采用双侧颈总动脉缩窄法构建VD模型,b-Exo组腹腔注射100μL的b-Exo(100μg/mL),DP组腹腔注射盐酸多奈哌齐(1 mg/kg),假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水,每日1次,持续28 d;Morris水迷宫行为学实验分析小鼠学习记忆能力,苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠海马组织病理学变化,免疫荧光染色检测小鼠脑组织血管形成情况,Western Blot检测小鼠海马组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平,免疫荧光染色检测小鼠海马组织中神经元特异核蛋白(NeuN)表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清脑损伤相关因子星形胶质源性蛋白(S-100β)与神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平。结果:从bEnd.3细胞分离的颗粒物呈圆形囊泡状,CD 63、TSG101及Alix蛋白均高表达,说明该颗粒物为外泌体,记为b-Exo;与假手术组比较,模型组小鼠逃避潜伏期延长,通过目标象限次数和在目标象限停留时间百分比减少,海马CA1区神经元细胞数量减少,出现明显病理学损伤,血管形成减少,VEGF蛋白相对表达量下调,NeuN表达减少,血清S-100β与NSE水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,b-Exo组和DP组小鼠逃避潜伏期缩短,通过目标象限次数和在目标象限停留时间百分比增加,海马CA1区损伤明显减轻,神经元细胞数量有所增加,血管形成增加,VEGF蛋白相对表达量上调(P<0.05),NeuN表达增加,同时,血清中S-100β与NSE水平降低(P<0.05)。结论:微血管内皮细胞来源的外泌体能明显促进VD小鼠的血管形成,并修复神经损伤,对VD小鼠起到治疗作用。

军校学员忠诚评价的内隐效应及外显测量研究

目的 探索军校学员内隐忠诚与外显忠诚的相关关系及其特异性,为更加全面、客观地评估个体忠诚提供理论依据和客观指标。方法 使用E-Prime2.0参照经典内隐联想范式编制内隐联想-忠诚测验对64名军校学员进行内隐忠诚测验,同时使用《中国军人忠诚量表》进行外显忠诚测量。结果 (1)军校学员忠诚评价的内隐效应显著,即均倾向于认为自我的忠诚高,非自我的忠诚低。(2)外显忠诚测评发现:军校学员被试对党、国家和人民的忠诚得分最高(4.79±0.34),对职业的忠诚次之(4.38±0.53),对单位及领导的忠诚相对较低(4.03±0.83)。在忠诚的3个维度上,规范忠诚水平最高,继续忠诚得分较低。(3)军人内隐忠诚与外显测量结果显示:对党、国家和人民的忠诚(r=-0.030,P=0.823)、对职业的忠诚(r=-0.047,P=0.728)、对单位的忠诚(r=0.050,P=0.710)、对领导的忠诚(r=0.043,P=0.749)相关均不显著。结论 军校学员忠诚评价的内隐效应显著,且外显测量的忠诚与内隐忠诚之间无显著相关,不能够通过单一的外显测量去判断他们的忠诚态度。

糖尿病患者发生带状疱疹的相关研究进展

带状疱疹(herpes zoster,HZ)是患者特定免疫受损时,潜伏的水痘-带状疱疹病毒重新激活引起的一种感染性疾病。糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者容易受到各种感染,且感染通常较重。近年来,越来越多的证据表明DM是HZ的重要危险因素,而DM患者发生HZ的风险是否受其他因素的影响无统一结论。本文探讨DM患者发生HZ的其他危险因素,包括年龄、性别、DM类型、血糖控制、并发症等,并阐述DM患者发生HZ的可能机制,为DM患者接种HZ疫苗的政策更新提供更多证据。

四氧化二氮吸入中毒致小鼠急性肺水肿药物干预实验研究

目的制作四氧化二氮（N2O4）吸入中毒致小鼠肺水肿动物模型,应用复合氨基酸加维生素B6予以救治,研究药物干预效果。方法实验动物为ICR小鼠,体重23～25 g,随机分为对照组、中毒组和治疗组三组（n=8）。将动物置于120 L染毒柜制作N2O4吸入中毒致肺损伤动物模型,于48 h采用眼球摘除法取血,分离血清-70℃保存,酶联免疫分析（ELISA）法测定心钠素（ANP）和肺表面活性物质相关蛋白D（SP-D）、转化生长因子β1（TGF-β1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。结果中毒组与对照组之间ANP、SP-D、TGF-β1和TNF-α水平差异明显（P〈0.05）;治疗组与中毒组之间ANP、SP-D和TNF-α水平差异明显（P〈0.05）,TGF-β1水平则无显著差异。结论 N2O4吸入中毒可导致肺水肿,监测血清ANP、SP-D、TGF-β1和TNF-α的变化对研究N2O4吸入中毒机制具有临床意义。采用复合氨基酸联用维生素B6能明显改善N2O4吸入中毒动物血清ANP、SP-D和TNF-α代谢水平,促进病情转归,对于救治此类中毒患者具有一定参考价值。

公共实验研究平台的管理探讨

公共实验研究平台是高校、医院进行科研的重要场所,不少高校或医科大学附属医院虽然都设有公共实验平台——中心实验室,但多数实验室在管理和运行中,存在较多难题。文中以南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心的成功运行经验为例,探讨公共实验研究平台的管理。

bFGF对瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的探讨bFGF对瘢痕成纤维细胞生物学行为和病理学的影响及其对瘢痕的作用机制[1],为临床整形美容外科预防和治疗瘢痕提供分子及病理学水平的理论依据。方法对瘢痕及正常皮肤成纤维细胞进行体外培养采用倒置显微镜、MTT测定、流式细胞术进行观察、分析,以研究细胞因子bFGF对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响[2]。结果体外培养瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞倒置显微镜、流式细胞术以及MTT测定结果显示,与相应的对照组相比,加入细胞因子bFGF后,显示均对细胞起明显的促增殖作用。结论细胞因子bFGF对成纤维细胞的生长趋势与增殖活性有明显的促进作用,刺激了胶原纤维的合成、增生和沉积[3],这在创伤愈合的早期起到积极的作用,但过量的应用bFGF可导致病理性瘢痕的形成[4]。

雷公藤多苷对小鼠腹腔激活巨噬细胞杀伤活性和NO分泌影响的实验研究

雷公藤多苷可以作为免疫抑制剂用于自身免疫性疾病的治疗,如子宫内膜异位症、哮喘、肝炎等,既可以抑制细胞免疫又可以抑制体液免疫。目的:探讨雷公藤多苷(TWP)对小鼠腹腔活化巨噬细胞杀伤活性和NO分泌的影响。方法:分离小鼠腹腔巨噬细胞,用脂多糖(LPS)激活,给予雷公藤多甙(TWP)进行共同孵育;分别以间接MTT法和Griess试剂检测巨噬细胞的杀伤活性和上清NO的含量变化。结果:雷公藤多苷能有效抑制小鼠腹腔激活巨噬细胞的杀伤活性以及NO的生成。

EGF对瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的通过探讨细胞因子EGF对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响,研究EGF在瘢痕形成中的作用机制,为临床预防和治疗瘢痕提供分子学水平及病理学水平的理论依据。方法采用倒置显微镜、MTT测定、流式细胞术,对瘢痕成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞进行体外培养,观察、分析细胞因子EGF对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响。结果倒置显微镜、流式细胞术以及MTT对体外培养瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞的测定结果显示,与相应的对照组相比,加入细胞因子EGF后,体外培养的瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞均明显增殖,且凋亡水平降低,显示EGF对成纤维细胞起着明显的促增殖作用。结论细胞因子EGF对成纤维细胞的生长趋势与增殖活性有明显的促进作用,刺激了胶原纤维的合成、增生和沉积。因此,EGF可促进创伤的早期修复,但EGF的过量应用有可能导致增生性瘢痕的形成。

单抗N-35相关肿瘤抗原血清学分布的实验研究

目的了解单抗N-35识别的肿瘤相关抗原在不同人群血清中分布的差异和意义.方法分别采用免疫印迹法和免疫沉淀法用单抗N-35对60例恶性肿瘤患者,30例良性病变者和30例健康体检者的血清进行肿瘤相关抗原的检测.结果免疫印迹法和免疫沉淀法检测的阳性率在下列组中分别为:早期恶性肿瘤63.33%、66.67%,中晚期恶性肿瘤均为56.67%,良性病变13.33%、16.67%,健康人0%;免疫印迹和免疫沉淀检测结果无明显差别;单抗N-35对应抗原在健康人、良性病变与肿瘤患者血清间的分布差异有显著性(P<0.01),在健康人和良性病变患者血清中的分布差异无显著性(P>0.05),在恶性肿瘤早期和中晚期患者血清中的分布差异无显著性(P>0.05).结论单抗N-35识别的肿瘤相关抗原主要存在恶性肿瘤患者的血清中,很少存在于良性病变患者血清中,不存在于健康人血清中.提示单抗N-35可作为筛查恶性肿瘤的候选抗体而进行临床应用开发.使用免疫印迹法可减少操作步骤,达到检测目的.

综合医院实验中心新冠肺炎疫情防控实践探索与思考

新冠肺炎疫情期间,苏北人民医院实验中心根据自身特点,结合疫情防控要求,提出苏北人民医院实验中心的疫情防控管理策略。通过建立完善疫情防控制度、人员分类管理、强化人员感控培训及考核、加强实验场所及冷链试剂管理以及创新工作模式等措施,有效降低实验中心的感染风险,保障了实验中心的安全运行。

金属材料修复临界性骨缺损的实验研究进展

金属支架材料是近年来新兴的骨组织工程支架材料之一,包括可降解金属支架材料和不可降解金属支架材料。金属支架材料生物相容性良好,耐腐蚀性强,力学性能优,相比传统支架材料,其机械强度更高,可为新组织生长提供良好的支撑,适用于临界性骨缺损(CSD)的修复,虽处于实验研究阶段,临床应用较少且时间较短,还有待进一步研究,但不可否认其在修复CSD方面具有巨大的优势和潜力,未来可能成为骨科治疗CSD的植入材料。笔者对目前常用的金属支架材料的种类及特性进行简要综述。

姜黄素防治2型糖尿病临床应用及机制研究进展

2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)防治亟需有效的方案来优化管理,除健康生活方式干预及使用降糖药物,中医药干预在防治T2DM中发挥着越来越关键的作用。其中,姜黄素作为中药姜黄中提取的主要成分,在T2DM及其并发症的治疗中发挥着关键作用。此文从T2DM及其并发症的病理机制切入,结合姜黄素的特点,系统阐述国内外姜黄素的临床应用现状,希冀为临床防治提供思路。

达格列净促进高脂诱导肥胖小鼠肝脏脂肪酸氧化的初步机制研究

目的探讨达格列净对高脂诱导肥胖小鼠肝脏脂代谢的影响及初步作用机制。方法将16只高脂饮食12周的C57BL/6肥胖小鼠分为达格列净组和模型对照组(OC组),每组8只,另选取8只低脂饮食小鼠为正常对照组(NC组)。达格列净组按照10 mg/(kg·d)给予连续3周灌胃,OC组和NC组分别给予等量生理盐水。测量各组小鼠体重、血糖、葡萄糖耐量及胰岛素耐量;酶联免疫吸附试验检测小鼠血清胰岛素及脂质水平;实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting分别检测肝脏沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)及肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)mRNA和蛋白表达。结果实验后达格列净组小鼠体重和空腹血糖水平较实验前下降最明显(P<0.05)。实验后达格列净组小鼠血浆胰岛素水平、葡萄糖耐量曲线下面积、胰岛素耐量曲线下面积及HOMA胰岛素抵抗指数均低于OC组(P<0.05)。与OC组比较,达格列净组小鼠血清甘油三酯和胆固醇水平均降低(P<0.05)。与OC组比较,达格列净组小鼠肝脏甘油三酯、胆固醇及肝脏重量均降低(P<0.05)。肝脏PGC-1α、SIRT1、CPT1A mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05)。结论达格列净可能通过激活肝脏SIRT1/PGC-1α/CPT1A通路促进肥胖小鼠的肝脏脂肪酸氧化,减少肝脏脂肪蓄积,改善胰岛素抵抗。

胰高血糖素样肽受体激动剂对脑卒中影响研究进展

脑卒中是一种常见的急性脑血管病,其发病率、死亡率高,目前仍需有效的预防及治疗方法。胰高糖素样肽-1受体激动剂(glucagon-like peptide-1 receptor agonists,GLP-1RA)是一种新型降糖药,GLP-1RA在作用于胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体发挥降糖、减重作用的同时还可通过抑制炎症、氧化应激、细胞凋亡和改善血脑屏障通透性等病理生理途径减小脑卒中的梗死面积、促进神经恢复。本文总结了GLP-1在脑卒中发生过程中的变化情况,初步探讨GLP-1RA通过哪些病理机制影响脑卒中的发生发展,同时将GLP-1RA对于脑卒中治疗效果进行了简要综述。

激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌和正常鼻咽上皮细胞的比较蛋白质组学研究

为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western blot检测差异蛋白cytokeratin8(CK8)在LCM纯化的NPC细胞和NNEC以及具有不同分化程度或转移潜能的4株NPC细胞中的表达,免疫组织化学检测CK8在63例NPC、28例NNET及20例颈淋巴结转移NPC组织中的表达水平.建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了29个差异蛋白质,其中15个蛋白质只在NPC表达或表达明显增高,14个蛋白质在NPC中表达下调或缺失;Western blot结果显示,CK8的表达水平在NPC中较NNET明显下调,并与NPC细胞株的分化程度和转移潜能有关;免疫组织化学结果显示,CK8在NPC组织中的表达较NNET明显下调,在颈淋巴结转移NPC中的表达较原发NPC明显上调.研究结果提示,CK8与NPC分化及淋巴结转移相关,有望成为预测NPC转移和区别NPC分化程度的分子标志物.

枣属植物化学成分研究进展

枣属(Ziziphus)为鼠李科植物中具有较高经济价值的一个属,约有170余种。迄今为止,已报道从枣属植物中发现或分离得到的化合物达200余种,主要包括三萜类、生物碱类、黄酮类、核苷类及糖类等化学成分。其中三萜类成分主要包括游离型的五环三萜类和以达玛烷型四环三萜为主要苷元的三萜皂苷类;黄酮类成分除含有氧苷类成分外,尚含有碳苷类成分,糖多取代在C-6或C-8位;生物碱类成分可进一步分为环肽生物碱类和异喹啉生物碱类。本文对近年来枣属植物化学成分研究的新进展进行总结,以期为枣属植物资源的深入开发与综合利用提供参考。

逐瘀通脉胶囊联合长春西汀治疗慢性脑供血不足的临床研究

[目的]观察逐瘀通脉胶囊联合长春西汀注射液治疗慢性脑供血不足的临床疗效。[方法]将180例慢性脑供血不足患者随机分为4组,常规用药(抗血小板、营养神经,脑细胞活化剂)组41例,简称A组。口服逐瘀通脉胶囊加常规组43例,简称B组。静脉输入长春西汀注射液加常规组45例,简称C组。逐瘀通脉胶囊联合长春西汀注射液加常规组51例,简称D组,剂量同以上3组。观察比较各组临床疗效。[结果]D组总有效率为88.24%,高于A组(60.97%)、B组(72.09%)和C组(77.78%),差异有统计学意义(P<0.05),D组治疗后血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、血黏度、血液流速较治疗前明显改善(P<0.05),且优于B组和C组(P<0.05)。[结论]逐瘀通脉胶囊联合长春西汀注射治疗慢性脑供血不足,能更好地改善症状和脑血流速度,调节血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)疗效优于常规用药、单纯使用逐瘀通脉胶囊或长春西汀。

白细胞介素10在支气管哮喘发病机制中的作用研究

目的研究白细胞介素10在支气管哮喘发病机制中的作用。方法哮喘组用卵白蛋白OVA敏原复制C57小鼠哮喘模型;IL-10抗体干预组与哮喘组均在激发后24、48和96 h及第8天行支气管肺泡灌洗(BAL),酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中IL-10、IL-12、TNF-α及血清中IgE、一氧化氮(NO)浓度。结果哮喘模型组IL-10抗体干预组BALF中TNF-α和血清中IgE、NO含量显著高于对照组,BALF中IL-10、IL-12含量显著低于对照组。哮喘组和IL-10抗体干预组内IL-10与IL-12均呈正相关;哮喘组IL-10与TNF-α、IgE呈负相关;IL-10抗体干预组内IL-10浓度与相应时相TNF-α、IgE、NO浓度做直线回归分析,显示负相关关系。结论 IL-10可能参与支气管哮喘发病的整个过程,随着IL-10含量的减少,支气管哮喘进行性加重。因此在支气管哮喘不同时期检测IL-10水平具有重要的临床意义。