表皮生长因子和甲硫氨酸脑啡肽诱导人白细胞c-fos基因表达的研究

由健康人外周血分离淋巴细胞及溶血处理后的全白细胞,以外源性表皮生长因子和甲硫氨酸脑啡肽培育后取细胞悬液制成滴片和滴膜,用生物素标记的c-fos cDNA探针进行原位杂交和斑点印迹杂交.结果显示表皮生长因子和甲硫氨酸脑啡肽两组c-fos原癌基因的表达均较对照组增强(P<0.05).

8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞生长相关基因表达的影响

目的探讨８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人Ｅｃａ－１０９细胞与生长相关基因表达的影响。方法体外培育的人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞受８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后，用原位杂交、免疫组织化学及ＲＮＡ、蛋白质斑点印迹技术研究了与细胞生长相关的几种基因的表达变化。结果８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可减弱ＥＧＦＲ、Ｈ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、突变型ｐ５３等基因的表达，增强野生型ｐ５３基因表达和ｐ２１ＷＡＦ１蛋白的表达。结论８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可通过影响有关信号传递和细胞周期进程基因表达而抑制细胞生长。

针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白、诱导性一氧化氮合酶及其基因表达的效应

目的研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白（ＨＳＰ）、诱导性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）及其ｍＲ－ＮＡ表达的效应。方法将２４只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后，随机分为３组：电针（ＥＡ）组、对照１（Ｃ１）组和对照２（Ｃ２）组。将３组收集的腹腔巨噬细胞制备成玻片和硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）两种标本，应用原位杂交、免疫细胞化学、细胞化学及斑点印迹技术检测ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲＮＡ。结果ＨＳＰ７０定位于巨噬细胞的胞质和胞核；ｉＮＯＳｍＲＮＡ及ｉＮＯＳ均定位于巨噬细胞的胞质；３组的ｉＮＯＳｍＲＮＡ、ｉＮＯＳ、ＨＳＰ７０的斑点印迹的扫描数值均为ＥＡ组＞Ｃ２组＞Ｃ１组（Ｐ＜０．０１）。结论电针可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲ－ＮＡ表达。

人胃癌细胞系BGC-823的遗传不稳定性

目的 :研究人胃癌BGC 82 3细胞系的遗传不稳定性。方法 :应用染色体G 分带、核型分析和PCR及银染技术。结果 :BGC 82 3细胞系染色体众数为亚三倍体。规律性出现 3个标记染色体 ,1号染色体短臂部分缺失。部分核型出现双微小体。微卫星位点D9s171为纯合性缺失 ,D9s16 0 4为杂合性缺失。结论 :BGC 82

免疫组织化学与完整细胞原位蛋白质斑点印迹联合应用的探讨

免疫组织化学与完整细胞原位蛋白质斑点印迹联合应用的探讨郑乃刚１）吴景兰２）陈奎生２）丁一２）王一菱２）１）河南省临床检验中心郑州４５００５２２）河南医科大学分子细胞生物学研究中心郑州４５００５２关键词斑点印迹；免疫组织化学；技术与方法玻片上细胞标本的...

表皮生长因子对大鼠血淋巴细胞c-fos基因表达的效应

本研究的目的是探讨表皮生长因子（ＥＧＦ）对大鼠血淋巴细胞转化率和ｃ－ｆｏｓ基因表达的效应。结果表明：大鼠血淋巴细胞呈免疫反应性（ＥＧＦＲ－ＩＲ），胞质内可见到ＥＧＦｍＲＮＡ信号；ＥＧＦ孵育可显著提高大鼠血淋巴细胞的转化率和ｃ－ｆｏｓ基因表达水平，与对照组相比较，Ｐ＜０．００１，而与植物血凝素（ＰＨＡ）孵育组无显著性差异，Ｐ＞０．０５。结果提示：大鼠血淋巴细胞的ＥＧＦ有自分泌效应；ＥＧＦ对大鼠血淋细胞具有丝裂原的作用；ＥＧＦ的促有丝分裂信息可能是通过“第三信使”——Ｆｏｓ途径影响淋巴细胞的表型。

非放射性Western印迹技术改进的研究

应用不同蛋白质复性剂、封闭剂和标记物的对比方法以探讨Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术的改进。结果表明：①经 （ＴｒｉｔｏｎＸ－１００）＝０．３％，５ｍｉｎ和ＳＢＢ２０ｍｉｎ的蛋白质复性处理后，可使第一免疫血清稀释度１：１００改为１：１０００使用；②应用 （Ｔｗｅｅｎ２０）＝０．０５％作为封闭液效果最好；③金标法及酶标法都可用于Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术，酶标法主带清晰，而金标法灵敏度高。

8-Br-cAMP对人肺癌H_(69)细胞N-myc,c-fos表达的影响

为探索肺癌治疗的新途径，用１０－５ｍｏｌ／Ｌ的８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ体外培育人肺癌Ｈ６９细胞，应用ＲＮＡ斑点印迹进行研究。结果显示：用８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理的实验组Ｎ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ的表达较未加８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ的对照组表达水平下降。提示８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可下调Ｈ６９细胞Ｎ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ基因表达。

细胞凋亡过程中c-fos、p53和c-myc基因的表达

本文主要研究细胞凋亡过程中c－fos、p53和c－myc等基因的表达。方法：经8－Br－cAMP诱导人食管癌Eca－109细胞调亡，应用原位来交技术对c－fos、p53和c－myc基因的表达进行检测。结果：经过诱导的试验组和不经诱导的对照组c－fos、p53和c－myc基因的表达差异有显著性（P＜0．001）。结论：提示这些基因在细胞凋亡的发生发展过程中起着重要的作用。

针刺对小鼠巨噬细胞基因表达的效应(英文)

目的 为了探讨针刺镇痛效应与细胞免疫的关系 ,研究了针刺对小鼠巨噬细胞中 c- fos m RNA,pp ENKm RNA,i NOSm RNA及 i NOS活性的效应。 方法 2 0只 BAL B/ c小鼠被随机分成 2组 :a.用 5 Hz电针处理的针刺组 ;b.未用电针处理的对照组。针刺或牵拉前后用钾离子渗透法检测痛阈。实验采用原位杂交 ,NADPH-NBT组织化学 ,RNA斑点印迹及蛋白质斑点印迹技术。应用 TL C扫描仪扫描斑点印迹信号并作统计学处理。 结果 杂交信号和 i NOS活性呈现蓝紫色 ,信号均定位于巨噬细胞的胞质。与对照组相比 ,针刺组的所有印迹信号均增强 ,P<0 .0 1。针刺组中 c- fos m RNA,pp ENKm RNA,i NOSm RNA的表达及 i NOS的活性与提高的痛阈呈正相关。此外 ,c- fos m RNA与 pp ENKm RNA之间的变动呈正相关。 结论 针刺可上调小鼠巨噬细胞中 c- fos,pp ENK,i NOS的基因表达 ,且提示 c- fos可能参与 pp ENK基因表达 ,c- fosm RNA与 pp ENKm RNA可能同时表达。

针刺对大鼠淋巴细胞及肾上腺髓质细胞ppENK和c－fos基因表达的影响

将４０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为４组：①针刺“足三里”穴２０ｍｉｎ；②不施针刺，上架２０ｍｉｎ；③针刺２０ｍｉｎ后８ｈ；④不针，上架２０ｍｉｎ后８ｈ。以钾离子透入法于针刺、上架前后测大鼠痛阈。制备分离的周血淋巴细胞滴片，膜片以及肾上腺石蜡切片标本。以生物素标记的ｃ－ｆｏｓｃＤＮＡ探针及ｐｐＥＮＫ寡核苷酸探针分别显示ｃ－ｆｏｓ基因及ｐｐＥＮＫ基因的表达。除去对两种标本进行原位杂交以外，对淋巴细胞尚进行斑点印迹检测。结果表明：①针后痛阈提高（Ｐ＜０．００１）；②淋巴细胞及肾上腺髓质细胞的ｐｐＥＮＫ及ｃ－ｆｏｓ的基因表达在４组比较中，第１组的信号均强于其它３组（Ｐ＜０．００１）；③淋巴细胞及肾上腺髓质细胞的ｐｐＥＮＫ基因表达与镇痛效应呈显著正相关（Ｐ＜０．００１）。结果表明针刺可立即且同时诱导ｃ－ｆｏｓ和ｐｐＥＮＫ的表达，这两种基因的表达均参于针刺效应。

8-Br-cAMP对人白血病HL-60细胞生长、分化及有关基因表达的影响

目的 观察 8 Br cAMP对HL 6 0细胞生长、分化及其相关基因的调节。方法 组织化学、原位杂交和完整细胞RNA斑点印迹。结果 8 Br cAMP作用 2 4h ,HL 6 0细胞c fos癌基因和p2 1waf1抑癌基因表达明显升高 ,c myc癌基因表达明显降低 ;8 Br cAMP作用 48h ,HL 6 0细胞生长、增殖明显受抑制 ,并向中性粒细胞方向分化。结论 8 Br cAMP可调整HL 6 0细胞生长、分化及相关癌基因和抑癌基因的表达 ,抑制HL 6 0细胞的生长 ,促进HL 6

聚丙烯酰胺凝胶银染技术改良

目的 :对变性及非变性聚丙烯酰胺凝胶银染方法最适条件进行探讨和改良。方法 :采用PCR 聚丙烯酰胺电泳、硝酸银染色检测 15 9～ 196bp及 336bpDNA片段 ,并对不同显影液浓度与显色温度下的结果进行比较。结果 :DNA分子经改良银染法检测均清晰可见 ,对比良好。结论 :聚丙烯酰胺凝胶电泳后采用银染技术分析 ,方便快捷 ,易长期保存 。

电针对疼痛患者血浆及小鼠脊髓甲硫氨酸脑啡肽、强啡肽及痛阈的影响

目的 :探讨 4～5Hz电针下 ,患者血浆及小鼠脊髓的甲硫氨酸脑啡肽 (MEK)及强啡肽 (Dyn)的变化与疼痛的关系。方法 :将针灸门诊患者电针前后的血浆和随机分为电针、对照两组的雄性BALB/C小鼠的脊髓匀浆 ,分别定量点于硝酸纤维素膜上 ,应用免疫反应性蛋白质斑点印迹技术 ,用Shimadu薄层层析扫描仪进行检测。患者在电针前后、小鼠在电针 /牵拉前后均用测痛仪检测痛阈。结果 :电针后患者血浆D(MEK)及D(Dyn)均升高 (P <0 .0 1) ,而小鼠脊髓两者均降低(P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,患者血浆及小鼠脊髓的D(MEK)比D(Dyn)变动显著。血浆或脊髓的D(MEK)与D(Dyn)变动呈正相关。血浆及脊髓D(MEK)分别与痛阈呈正相关 (r=0 846 ,P <0 0 1)或呈负相关 (r=- 0 6 2 5 ,P <0 0 5 )。但血浆及脊髓的D(Dyn)与痛阈不相关。结论

胃癌组织中错配修复基因hMSH2 mRNA的表达

目的 :研究hMSH2mRNA在胃癌、癌旁及正常胃粘膜组织中的表达。方法 :应用原位杂交技术 ,检测了2 7例胃癌、10例癌旁组织和 19例正常胃粘膜组织中hMSH2mRNA的表达。计数阳性细胞数。结果 :胃癌、癌旁组织与正常胃粘膜组织hMSH2mRNA原位杂交阳性率分别为 74 1% ,6 0 0 % ,6 8 4%。胃癌杂交阳性细胞数 (42 1±2 5 9) ,较癌旁 (99 7± 16 8)与正常组织 (175 8± 2 6 4)显著减少 (P <0 0 1) ;不同临床分期胃癌组织间阳性细胞数差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论

ICAM-1、IGF-1在银屑病皮损中的表达

目的 了解银屑病患者皮损中ICAM 1、IGF 1表达水平及分布 ,并讨论其临床意义和相互关系。方法 用免疫组化的方法对 16例实验组标本和 16例对照组标本进行检则。结果 实验组ICAM 1为 72 .9375± 2 1.14 0 8,对照组为 5 1.375 0± 17.0 876 ,两组间存在显著性差异 (P <0 .0 1) ;IGF 1实验组为 5 0 .1875± 13.5 2 88,对照组为 33.312 5±17.82 81,两组间存在显著性差异 (P <0 .0 2 ) ;患者组ICAM 1、IGF 1增高呈明显的正相关 (P <0 .0 5 )。结论 银屑病皮损中ICAM 1、IGF 1表达增高且密切相关 ,在银屑病病程中起着重要作用。

胃癌患者P^(16)和P^(53)蛋白的表达及其相互关系

目的 探讨P16、P53 基因产物在胃癌中表达的生物学意义及其相互关系。方法 用辣根酶标记链霉卵白素免疫组化法对 33例胃癌的临床病理特征进行分析 ,同时与 17例癌旁和 13例正常胃粘膜中P16和P53 蛋白的表达进行了比较。结果 胃癌患者P16蛋白阳性表达率明显高于正常胃粘膜 (P <0 .0 5 ) ,伴淋巴结转移的胃癌阳性细胞密度高于未转移者 (P <0 .0 5 )。P53 蛋白在正常胃粘膜未见表达 ,胃癌中P53蛋白阳性表达显著高于癌旁组织 (P <0 .0 5 )。P53 与P16在胃癌中共同表达 10例 (30 .30 % ) ,P53 和P16蛋白表达与胃癌的病理学分期、分化程度无关。结论 P16基因异常有促进胃癌转移的效应 ,这对判定胃癌患者的预后有一定的指导意义。P53 与P16在胃癌中有协同作用 ,二者异常表达参与胃癌的发生与发展。

胃癌组织中p16基因甲基化分析

目的 :探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系。方法 :对 2 0例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用甲基敏感酶 (HpaII)和甲基非敏感酶 (MspI)酶切 ,结合PCR扩增技术 ,对p16基因外显子 1、外显子 2的二核苷酸胞嘧啶特定序列 5’ CCGG 3’位点甲基化进行检测。结果 :2 0例胃癌组织中 ,p16基因外显子 1、2异常甲基化分别为 5例 (2 5 % )和 9例 (45 % ) ,正常组织未发现甲基化异常 ;14例高甲基化标本中 ,中分化胃癌 4例 ,低分化 7例 ,高分化 1例 ;有 2例存在外显子 1、2同时甲基化异常 ,二者均为低分化胃癌 ,进展期胃癌 (Ⅲa、Ⅳ期各 1例 )中 1例呈现泳动易位 ;外显子 2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者 (P <0 .0 5 )。结论 :p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失 ,从而失去对细胞增殖的负性调控作用 ,导致胃癌发生与进展 ;外显子 2高甲基化与临床进展有关 。