鉴定角膜缘干细胞缺乏方法的研究进展

角膜缘干细胞缺乏引起的角膜疾病是眼科门诊较为常见的疾病,角膜缘干细胞移植已成为治疗该疾病的研究热点。根据角膜缘干细胞是否缺乏以及角膜缘干细胞的缺乏程度,选择的干细胞治疗方式不同。因此鉴定角膜缘干细胞缺乏是选择移植手术的重要依据,能够为后续移植实验奠定坚实的基础。本文主要总结了近年来鉴定角膜缘干细胞缺乏方法的研究进展。

阿霉素诱导大鼠心衰模型不同方案的比较

目的通过阿霉素(Adriamycin,ADR)不同方案腹腔注射给药(Adriamycin,ADR)试图造成大鼠心衰,探讨建立大鼠阿霉素心衰动物模型的给药方案,为研究心衰的发病机制和有效治疗措施提供理想的动物模型。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分成3组,模型A组(n=15),模型B组(n=15),对照组(n=10)。模型A组:腹腔注射ADR(4 mg/kg体重,用注射用水配制成2 mg/mL溶液,即2 mL/kg体重),每周1次,共6周,累积总量24 mg/kg体重;模型B组:腹腔注射ADR(2.5 mg/kg体重,用注射用水配制成2 mg/mL溶液,即1.25 mL/kg体重),每周3次,共2周,累积总量15 mg/kg体重;对照组:注射相同体积的注射用水。于末次注射停药后2周,测量体重(BW)、心室质量(VW)、动脉收缩压(SAP)、动脉舒张压(DAP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)及左室最大压力上升及下降速度(±dp/dtmax),并作病理切片观察其组织学变化。结果与对照组相比,模型A组SAP、LVSP、±dp/dtmax均明显降低,LVEDP明显升高;病理学结果证实符合心肌病样改变。模型B组则改变不明显,但心外损害严重,死亡率高。结论多次间断腹腔注射一定剂量的阿霉素可明显损害心脏的功能,是建立大鼠慢性充血性心力衰竭模型的一种简便可靠的方法。

Gax基因对血管平滑肌细胞生物学行为的调控作用

血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡异常是血管再狭窄发生的重要机制。血管平滑肌细胞多年来一直是再狭窄防治针对的靶点。Gax基因是一种同源异形盒基因 ,其编码产物是一种核转录因子 ,可以激活或抑制其下游基因的表达。Gax基因对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡有调控作用 。

t-PA基因新型真核表达载体的构建及鉴定

目的构建人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)基因的新型真核表达载体,为血栓性疾病的基因治疗奠定基础。方法将tPA基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1MycHisB()中,进行酶切鉴定及DNA测序分析,并将携带有tPA基因的该真核表达载体,通过脂质体介导,转染鼠血管平滑肌细胞,底物发色法测定转基因血管平滑肌细胞tPA活性。结果经双酶切鉴定和测序证实已将tPA基因DNA片段正确插入到真核表达载体中,并能在真核细胞中表达、分泌有活性的tPA。结论成功构建pcDNA3.1MycHisB()/tPA基因新型真核表达载体。

右美托咪定对小鼠成肌细胞C2C12增殖、分化的影响

目的观察右美托咪定对小鼠成肌细胞C2C12增殖、分化的影响,探究心力衰竭患者骨骼肌病的发病机制。方法用免疫组化分析C2C12细胞肾上腺素能受体的表达特征。将C2C12细胞分为6组:对照组和右美托咪定5个浓度梯度组(5、10、20、40、80 mmol/L)。CCK-8法检测右美托咪定对C2C12细胞增殖的影响。用分化培养基诱导C2C12分化,按单次和连续单次的给药方式给C2C12细胞加药,分化6 d后,用免疫荧光检测不同分组肌球蛋白重链(MYH)、肌细胞增强因子2C(MEF2C)、肌细胞生成蛋白(MyoG)的表达水平,并定量分析C2C12细胞分化、融合为含不同细胞核数的肌管数。将C2C12细胞分为2组:对照组和右美托咪定(20 mmol/L)组,按连续单次的给药方式加药,用免疫荧光检测C2C12细胞分化第2、4、6天的MYH、MEF2C、MyoG表达水平。结果C2C12细胞呈现出α2-肾上腺素能受体表达的特征。CCK-8法显示右美托咪定抑制C2C12细胞的增殖(P<0.05),并呈浓度依赖性。单次给药没有连续单次给药抑制C2C12细胞分化的效应明显,且连续单次给药随着浓度的增加,MYH、MEF2C、MyoG的表达水平逐渐降低,C2C12细胞分化为含多细胞核数的肌管逐渐减少(P<0.05)。C2C12细胞分化第2、4、6天,右美托咪定(20 mmol/L组)的MYH、MEF2C、MyoG的表达水平均比对照组低。结论小鼠成肌细胞C2C12上存在α2肾上腺素能受体,右美托咪定可能通过与α2肾上腺素能受体结合抑制C2C12细胞的增殖、分化,且与MEF2C、MyoG表达水平降低密切相关。

兔骨髓间充质干细胞在兔角膜缘干细胞完全缺乏模型眼表的分化

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(BMSC)移植到兔角膜缘干细胞完全缺乏模型后是否能分化成角膜上皮细胞。方法 3~5月龄清洁级日本大耳白兔24只,采用全周角膜缘板层切除术加中央角膜上皮刮除术建立兔右眼角膜缘干细胞完全缺乏模型,4周后观察眼表形态,行苏木素-伊红(HE)染色、过碘酸-雪夫(PAS)染色及DAPI染色鉴定模型成功与否,选取成功模型18只(36只眼),应用随机数字表法分为对照组(18只兔左眼)、模型组、羊膜组、羊膜加BMSC组,后3组每组6只(兔右眼)。取第三代(P3)兔BMSC,以去上皮羊膜为载体培养观察,待细胞铺满羊膜达90%以上时进行移植手术,于移植术后12周观察兔右眼表形态,行HE染色观察角膜结构,免疫荧光检测兔BMSC分化方向。结果建模后4周有21只兔右眼眼表形态评分达到7分及7分以上,行HE染色、PAS染色、DAPI染色,结果显示角膜缘及角膜上皮细胞层被清除,浅基质层大量炎症细胞浸润及新生血管形成,可见杯状细胞形成,说明模型构建成功。移植术后12周照相观察眼表形态,与自身兔左眼角膜相比,模型组兔右眼角膜混浊,有大量新生血管,羊膜组右眼角膜轻度混浊,有少量新生血管,羊膜加BMSC组兔右眼角膜透明,未见新生血管;HE染色显示羊膜加BMSC组角膜结构修复完整,免疫荧光检测到羊膜加BMSC组有角膜分化的特异性标记因子CK3+12表达,而羊膜组未见表达。结论兔BMSC移植到兔角膜缘干细胞完全缺乏模型后,在体内能够分化成角膜上皮细胞或角膜样上皮细胞,恢复眼表结构及功能。