肝细胞癌的免疫细胞治疗研究进展

肝细胞癌是全球常见恶性肿瘤之一,在中国尤为高发。目前肝细胞癌的治疗手段主要有手术、放射治疗、局部消融治疗、肝动脉化疗栓塞、分子靶向治疗等。由于肝细胞癌起病隐匿,大多数患者发现时已失去手术时机,治疗效果十分有限,因此探索新的治疗方案具有重要意义。肿瘤免疫细胞疗法是目前最受关注的新兴治疗手段,尤其是基因修饰的T细胞疗法在肝细胞癌的治疗中显示出巨大的潜能。本文将综述免疫细胞治疗在肝细胞癌中的最新研究进展。

L-02-hNTCP稳定表达细胞系的建立与鉴定

目的:建立L-02-hNTCP稳定表达细胞系并筛选对HBV感染性颗粒敏感的克隆,为研究HBV入侵细胞的机制及药物筛选提供基础。方法:用Lipofectamine 3000转染hNTCP真核表达质粒至L-02细胞,加入含嘌呤霉素(0.5μg/ml)培养基筛选耐药克隆,进一步用免疫荧光筛选hNTCP高表达克隆,RT-PCR定量hNTCP转录水平;在L-02-hNTCP细胞培养基中加入HBV感染性病毒颗粒,ELISA检测培养上清HBV抗原水平,免疫荧光检测细胞内HBcAg,Real-time PCR检测复制中间体。结果:从92个耐药克隆中筛选获得1株hNTCP高表达克隆,命名为L-02-hNTCP。L-02-hNTCP胞内检测到高水平的hNTCP mRNA,免疫荧光检测到高水平Flag标签表达,且信号主要位于胞膜;经HBV病毒感染性培养基孵育24 h后,免疫荧光在细胞内检测到HBcAg,在培养上清中检测到HBsAg、HBeAg,Real-time PCR检测到细胞内HBV复制中间体(6.57±0.36)×10^(6)拷贝/孔。结论:成功建立稳定高表达hNTCP的L-02-NTCP细胞系,可以被HBV颗粒自然感染,为研究HBV入侵细胞的机制和抗病毒药物筛选提供新的模型。

基因编辑技术在乙型肝炎基因治疗中的作用研究进展

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是一种全球性公共卫生疾病,是导致肝功能衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的主要病因。乙型肝炎的治疗虽然取得了长足进展,抗病毒/免疫调节联合治疗方案的优化使得HBV感染的治愈成为可能,但是HBV的功能性治愈率仍然很低。肝细胞核内HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA, cccDNA)的稳态水平是HBV持续感染和久治不愈的根源。现有的治疗方案不能作用于cccDNA,而基因编辑技术可以直接对基因组DNA进行剪切和编辑,在HBV感染的治疗研究中已经显示出较好的作用。本文主要综述了基因编辑技术在抗HBV治疗中的研究进展,包括锌指核酸内切酶、转录激活因子效应物核酸酶和规律成簇的间隔短回文重复(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins, Cas)系统。