未成熟卵母细胞的体外成熟技术研究进展

随着我国人口出生率显著下降,辅助生殖技术在缓解生育力低下方面的作用日益显著。未成熟卵母细胞体外成熟技术作为辅助生殖技术的一部分,临床应用逐渐增多。本文介绍了未成熟卵母细胞体外成熟技术的发展历史,总结了双相培养体系、培养体系添加剂、3D培养体系等未成熟卵母细胞体外成熟现有培养体系技术,并对未成熟卵母细胞体外成熟培养在多囊卵巢综合征、卵巢抵抗综合征、女性生育力保存、常规取卵过多的补救等方面的临床应用进行概述,以期为未成熟卵母细胞体外成熟培养的相关研究和临床应用提供理论依据。

维生素E对邻苯二甲酸二异辛酯致雄性大鼠生殖毒性的拮抗作用

目的:探索维生素E(VE)对青春期邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)暴露致雄性大鼠生殖毒性的干预作用以及其机制。方法:将30只35日龄雄性SD大鼠(体重96~122 g)随机分为对照组(玉米油),低[10 mg/(kg·d)]、中[100 mg/(kg·d)]、高[500 mg/(kg·d)]DEHP组,以及VE干预组[(500 mg/(kg·d)DEHP+100 mg/(kg·d)VE],各组给予相应食物30 d。在染毒干预结束后,分别检测大鼠睾丸组织氧化应激指标、附睾尾部精子参数、血清生殖激素水平、凋亡相关靶基因及蛋白的表达。结果:与对照组比较,中、高DEHP组血清中FSH、LH和T水平明显降低,精子运动参数VAP、VCL明显降低,SOD和GSH-Px活力显著降低,Bak、Bax基因表达和Bax/Bcl-2基因表达比值显著升高,细胞色素C mRNA表达及细胞色素C和Caspase-3蛋白表达均显著上调(P均<0.05);高DEHP组MDA含量[(3.32±0.87)nmol/mg pro vs(2.13±0.49)nmol/mg pro]明显升高,精子运动参数VAP、VCL、VSL、STR、LIN、WOR均明显降低(P<0.05)。与高DEHP组比较,VE干预组的LH和T水平明显升高;VAP、VSL、VCL、STR和WOB明显升高;SOD和GSH-Px活力显著升高;MDA含量明显降低;Bak、Bax基因表达和Bax/Bcl-2基因表达比值显著降低;细胞色素C、Caspase-3 mRNA表达及蛋白表达均显著下调(P均<0.05)。结论:青春期DEHP暴露可抑制生殖激素分泌或释放,导致雄性大鼠睾丸组织氧化损伤,激活细胞线粒体凋亡通路,也可导致附睾精子质量下降;而VE对DEHP所诱导的雄性生殖毒性具有一定的拮抗作用。

小鼠雌性生殖干细胞体内分化鉴定方法

目的建立一种小鼠卵巢雌性生殖干细胞(FGSCs)体内分化鉴定方法。方法从6周龄C57BL/6小鼠卵巢利用Fragilis抗体基于免疫磁珠分选(MACS)分离FGSCs细胞,并置于STO饲养层细胞上扩增培养,采用RT-PCR法检测生殖干性基因包括Fragilis、MVH、Prdm1和Tert,细胞免疫荧光法检测Fragilis和MVH蛋白表达,利用绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体荧光标记FGSCs后将其植入受体鼠卵巢,在体内环境下促其分化发育为卵母细胞,至少12d后取卵巢置于载玻片上并压上盖玻片,直接置于荧光显微镜下观察。结果 RT-PCR结果显示FGSCs生殖干性基因包括Fragilis、MVH、Prdm1和Tert为阳性表达,而卵母细胞特异表达基因中Nobox为阴性,GDF9和ZP3为弱阳性;细胞免疫荧光结果显示FGSCs的MVH和Fragilis蛋白表达阳性,而且呈明显的膜表达。GFP-FGSCs植入6周龄雌性C57BL/6的卵巢中,至少12d以后将卵巢取出,压片后置于荧光显微镜下观测,结果显示有荧光阳性的卵母细胞。结论该鉴定方法简单直观,可作为FGSCs体内分化鉴定的可选方法。

高龄妇女分裂期胚胎质量分析及妊娠结局评估

目的:分析体外受精-胚胎移植阶段高龄妇女分裂期胚胎质量并探讨不同胚胎质量对妊娠结局的影响。方法:回顾性分析2018年10月至2020年10月235例高龄妇女的364个体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)周期。将胚胎分为早期卵裂(early cleavage,EC)胚胎组、2原核(2 pronucleus,2PN)合子组、2原核消失(2 pronucleus breakdown,2PNBD)组;依据移植胚胎卵裂数目分为2EC组、2Non-EC组、混合组;依据胚胎移植的具体情况可分为移植胚胎分裂模式正常(all split normal,ASN)组、移植胚胎中1个分裂模式正常和1个分裂模式异常(one split normal,OSN)组、移植胚胎分裂模式异常(all split abnormal,ASA)组,分别分析不同组别的胚胎质量、囊胚质量、发育过程中的异常状况。结果:早期卵裂组胚胎卵裂的发育速度和优胚率均高于2PN合子组和2PNBD组(P<0.05)。ASN组的优质胚胎率、囊胚形成率、优质囊胚率、可冻囊胚率均高于ASA组(P<0.05)。ASN组的种植率和临床妊娠率均高于OSN组和ASA组(P<0.05),三组的多胎妊娠率和早期流产率均无统计学差异(P>0.05)。结论:高龄妇女早期卵裂与优胚率和胚胎发育速度相关,胚胎分裂模式与妊娠结局的好坏密切相关,而卵裂观察与妊娠结局的好坏无关。

卵泡期长效长方案与拮抗剂方案在卵巢正常反应人群中临床效果比较

目的:比较卵泡期长效长方案与拮抗剂方案在卵巢正常反应人群中促排卵结局。方法:回顾性分析2018年1月至2020年12月在十堰市太和医院生殖医学中心行体外受精(in vitro fertilization,IVF)/卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)的卵巢正常反应患者的病例资料。按促排卵方案分为卵泡期长效长方案组与拮抗剂组,对患者的一般情况、超促排卵临床及实验室指标、体外受精胚胎发育情况及妊娠结局进行对比分析。结果:⑴长方案组的促性腺激素(gonadotrophin,Gn)使用剂量、Gn天数、HCG日A型子宫内膜占比均大于拮抗剂组(P<0.05)。⑵长方案组HCG日血黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平低于拮抗剂组,HCG日直径大于14 mm卵泡数、获卵数、成熟卵数、囊胚形成率、优质囊胚形成率大于拮抗剂组(P<0.05),两组的D3可利用胚胎数、D3优胚率无差异(P>0.05)。⑶长方案组的新鲜周期取消移植率低于拮抗剂组,胚胎种植率、临床妊娠率高于拮抗剂组(P<0.05),两组流产率、早产率无差异(P>0.05)。结论:对于正常反应人群患者而言,选择卵泡期长效长方案获益更高。

70例慢性活动性肝炎患者血象及骨髓象观察

慢性活动性肝炎(chronic active hepatitis,CAH)是肝炎病毒感染引起肝实质损害和免疫功能紊乱所致的一种全身性疾病。临床上除表现为肝实质损害和消化系统功能障碍外,常合并许多肝外表现。本文对70例CAH患者的血象及骨髓象进行了观察和分析,以了解CAH所致的血液系统损害,并探讨其血液学变化在CAH诊断及疗效观察的价值。

微信个性化护理模式在临床护理带教中的应用及对IVF-ET治疗者妊娠结局的影响

目的研究护生实习过程中实施微信个性化护理(PWCS)对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗者负性情绪和妊娠结局的影响以及对提高临床护理教学质量的效果。方法以236例IVF-ET治疗者和132名护生为研究对象,将236例中合并焦虑和抑郁的IVF-ET治疗者按1∶1匹配为实验组(n=40)和对照组(n=40),护生以“一对一”模式给予实验组常规护理和PWCS,对照组给予常规护理,比较两组心理状态与妊娠结局。护生按是否参与PWCS分为PWCS组(n=40)和非PWCS组(n=92),实习过程中比较两组带教效果与满意度。结果伴有焦虑和情绪的IVF-ET治疗者占44.49%。与对照组比较,实验组PWCS实施后焦虑评分明显降低(P<0.05),实验组临床妊娠率(52.50%vs 42.50%)、自然流产率(14.29%vs 35.29%)和活产率(45.00%vs 27.50%)方面均略优于对照组,但组间差异无统计学意义(P均>0.05)。与非PWCS组比较,PWCS组护生个案成绩和对带教的非常满意率明显提高(P均<0.05)。结论在临床护理带教中应用PWCS,可改善IVF-ET治疗者的焦虑状况,呈现有利于提高其妊娠结局的趋势;且可促进护生个案成绩和带教满意率的提高。