布洛芬注射液的制备及其稳定性考察

目的:通过影响因素试验和配伍稳定性试验考察自制布洛芬注射液的稳定性。方法:以精氨酸作为助溶剂,与布洛芬按1︰1摩尔比配制布洛芬注射液;通过影响因素试验(强光、高温和冻融试验),考察注射液稳定性;与0.9%氯化钠注射液和5%葡萄糖注射液配伍,考察24 h内的配伍稳定性。结果:制得的布洛芬注射液无色澄明,pH值在7.8左右;经影响因素试验考察,各指标无明显变化;配伍稳定性实验结果显示,与两种输液配伍后24 h内,配伍液外观和pH值均无明显变化,布洛芬含量基本没有变化,有关物质检查合格。结论:制备的布洛芬注射液经影响因素考察稳定性良好,与两种输液在25℃、24 h内配伍稳定。

镉处理前后成纤维细胞变异差异分析

目的在环境中存在着很多化合物可以引起变异,对于环境的变异原活性的高感度的方法研究是必要的。例如,应用镉对于人体成纤维细胞的致死毒性和变异活性的详细研究报告很少。因此本研究应用紫外线可以检测出的人体细胞变异,用镉处理的重金属镉的变异活性高感度方法能够检测出来,并且活性的特异点进行解明。方法使用培养的人体细胞RSa和派生株。变异原活性的检测应用OuaR(ouabain resistancn)变异原的检出法和癌遗传因子K-ras的盐基置换的变异的differential dot-blot hybridization检测方法。为了变异诱导的频度的检测,进行了MTT(methyl thiazolyl tetrazoliun)法和生存形成率的测定。变异原活性的机制的解明还应用了Western blot法和siRNA方法对热休克蛋白质进行了解析。结果应用镉的变异原活性的盐基置换变异的检出和紫外线程度相同。DNA伤害对应着热休克蛋白(HSP)27蛋白质的细胞内的变化,同样变异频度也出现了高的数值。结论HSP27蛋白高表达的UVr-1细胞比RSa细胞OuaR变异频率要低。用K-ras dot blot方法证明了RSa细胞具有比UVr-1细胞的变异要高。siHSP27细胞观察到OuaR变异的高表达变化以及镉对DNA损伤表现出UVr-1成纤维细胞小于RSa成纤维细胞。

TIA重组cDNA表达克隆血清抗原基因的识别

目的:应用重组cDNA表达克隆血清学鉴定技术(SEREX)筛选与识别短暂性脑缺血发作(TIA)血清相关性抗原基因.方法:采集19例TIA患者血清,免疫筛选人主动脉内皮细胞cDNA表达文库;对阳性靶抗原行单克隆扩增,经单克隆内切除后转换载体pBluescript SK(+)提取质粒;对包含cDNA插入目的基因片段的质粒进行DNA序列检测,通过NCBI-BLAST同源性检索,鉴定具有免疫原性的独立的TIA重组cDNA表达克隆血清抗原基因.结果:(1)SEREX筛选出172个重组cDNA阳性单克隆;(2)单克隆内切除后获得167个pBluescript质粒,酶切鉴定质粒中均包含有目的基因插入片段;(3)生物信息学分析:识别11个独立的重组cDNA表达克隆抗原基因.(4)基因功能解析:发现matrix metalloproteinase 1(MMP1)、chromobox homolog 1(CBX1)和chromobox homolog 5(CBX5)与TIA和脑梗死(CI)的发生、发展关系密切.结论:应用SEREX技术成功筛选及鉴定出TIA相关靶抗原基因,发现MMP1、CBX1和CBX5可能与短暂性脑缺血发作(TIA)和脑梗死(CI)发生发展有关.

温阳活血解毒复方对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究温阳活血解毒复方(WHJF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移及细胞管形成功能的影响,从细胞层面探讨该治疗动脉粥样硬化机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、温阳活血解毒复方低、中、高剂量组(剂量分别为10.35,31.05,93.15 g·kg^(-1)),于第4天首次灌胃2 h后采血制备含药血清,采用CCK8法、Transwell迁移实验、b FGF诱导细胞管形成实验分别观察含药血清对HUVECs增殖、迁移及细胞管形成功能的影响。结果温阳活血解毒复方含药血清对HUVECs的增殖有抑制作用,与空白对照组比较,低、中、高剂量组的含药血清对HUVECs的抑制率均明显升高(P<0.05),且两两比较差异有统计学意义(P<0.05),呈浓度依赖型。在迁移方面,温阳活血解毒复方组迁移细胞数减少,与空白对照组比较,高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。在细胞管形成方面,与模型组比较,温阳活血解毒复方组细胞管数明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,低、高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。结论温阳活血解毒复方含药血清可抑制HUVECs的增殖、迁移及细胞管形成,起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用;此外,其可能与b FGF产生协同作用,共同促进新生血管成熟,发挥稳定斑块的作用。

温阳活血解毒复方对人脐静脉内皮细胞VEGFs/VEGFRs通路的影响

目的研究温阳活血解毒复方(WHJF)对血管内皮生长因子(VEGFs/VEGFRs)信号通路的影响,从分子层面探讨其治疗动脉粥样硬化(AS)的机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组(C组)、温阳活血解毒复方低、中、高剂量组(L、M、H组,剂量分别为10.35、31.05、93.15 g·kg^(-1)),于第4天首次灌胃2 h后采血制备含药血清,采用免疫印迹法(Western Blot)及逆转录-聚合酶链式反应(q RT-PCR)法分别观察含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的VEGFs/VEGFRs信号通路中各信号分子及其基因表达的影响。结果温阳活血解毒复方含药血清对VEGFs/VEGFRs信号通路有抑制作用。在蛋白表达方面,与空白对照组比较,高剂量组中血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)和磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(pERK)的表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组中pERK的表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);通路中其他信号分子的表达量无明显减少,差异无统计学意义(P>0.05)。在基因表达方面,与空白对照组比较,温阳活血解毒复方组血管内皮生长因子亚型A、B(VEGFA、VEGFB)及血管内皮生长因子受体1、2(VEGFR-1、VEGFR-2)的mRNA表达量无明显减少,差异无统计学意义(P>0.05)。结论温阳活血解毒复方含药血清可能通过下调VEGFR-2及下游分子pERK的表达,对VEGFs/VEGFRs信号通路发挥抑制作用,从而直接影响细胞DNA合成功能,减少血管新生,起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。

不同条件温阳活血解毒复方血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

【目的】探讨不同条件温阳活血解毒复方含药血清(YBTR)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖影响的差异。【方法】体外培养HUVECs细胞。含药血清制备:将32只SD大鼠(雌雄各半)随机分成生理盐水组及低、中、高剂量组(灌胃剂量分别为10.35、31.05、93.15 g·kg-1,每日2次)4组,分别在4个时间点(大鼠喂养第4天首次灌胃1 h、2 h后,第6天首次灌胃1 h、2 h后,以下分别用D3H1、D3H2、D5H1、D5H2表示)每组各取1只雌性大鼠和雄性大鼠采血制成含药血清。采用CCK8法观察各组含药血清对HUVECs增殖能力的影响。【结果】自不同性别大鼠和不同时间点采集的药物血清作用HUVECs后的细胞增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P性别=0.000<0.01,P时间=0.000<0.01),时间和性别的交互作用有统计学意义(P时间×性别=0.001<0.01),其中D3H2、D5H1随性别的不同而不同(PD3H2×性别=0.000<0.01、PD5H1×性别=0.002<0.01)。随着D3H2雌性含药血清剂量的增加,其对HUVECs的增殖抑制作用也逐渐增加,其组间比较差异有统计学意义(P<0.05),整体趋势呈浓度依赖性。在雌性大鼠中,不同浓度组的含药血清对HUVECs的增殖抑制作用,在D3H2达到峰值后均出现下降;而在雄性大鼠中,低、中剂量组含药血清在D5H1达到峰值,高剂量组则在D3H1达到峰值。【结论】选择雌性的大鼠在D3H2采血制备的温阳活血解毒复方含药血清对HUVECs的增殖抑制作用最佳。