金属离子对红霉素生物合成的影响

本文采用优化设计方法研究金属离子在红霉素生物合成中的交互作用,应用两水平因子设计和响应面设计,以最终发酵液的生物效价为目标函数建立模型,通过软件分析得出优化结果：钼酸钠0．046lg/100ml；硫酸锌0．004g/100ml；氯化锰0．0133g/100ml；硫酸镁0．0866g/100ml；氯化钙0．0293g/100ml。按优化方案向发酵液中添加所选定的金属盐,可使最终发酵液的生物效价由对照样品的6115u/ml,提高到条件样品的7985u/ml,在一定程度上实现了红霉素生产的优化。

钼对红霉素生物合成的影响

在利用糖多孢红色链霉菌HB发酵生产红霉素的过程中,于48 h向发酵液中加入钼酸钠,通过对代谢途径关键调控酶活力的测定以及运用高效液相色谱法对发酵液中相关有机酸含量的测定,结论显示:当发酵液中钼酸钠的加入量为0.056 g/100 mL时,部分代谢流向有利于红霉素生物合成的方向迁移,在一定程度上提高了红霉素的生产速率和产量.

四个青蒿素生物转化产物抗体外培养恶性疟原虫活性研究

目的 检测四个青蒿素微生物转化产物 10 β -羟基青蒿素[1] 、去氧青蒿素[2 ] 、9β -羟基青蒿素[3] 及 3β -羟基青蒿素[4 ] ,对体外培养恶性疟原虫的作用。方法 以青蒿素和氯喹为对照 ,用体外微量法测定。结果 四个转化产物的抗疟活性比青蒿素均有不同程度的降低 ,其中 10 β -羟基青蒿素活性较好。结论 30位、9位、10位的羟基化引起的结构改变均使青蒿素体外抗疟原虫活性有一定的减弱 ,过氧桥的断裂同样使活性降低。

生物过程尾气质谱仪在乳酸发酵工艺控制中的应用

将生物过程尾气分析质谱仪及相应的Biostar处理软件成功应用于乳酸发酵过程中,通过实时监测发酵过程中不同阶段和不同发酵条件下菌体生理代谢参数的动态变化,并对其进行多参数相关分析,阐明了发酵过程中杂质组成的合成代谢过程;利用尾气分析质谱仪进行微耗氧发酵过程供氧水平的精确控制,当菌体的摄氧率控制在0.70mmol/(L.h)时,凝结芽孢杆菌乳酸的最佳合成速率能达到2.78g/(L.h);同时在以玉米淀粉水解糖液为基质的乳酸发酵过程中,通过对菌体生理代谢参数变化与残糖的消耗和副产物生成过程进行相关分析,建立了根据生理参数的变化进行发酵过程终点快速判定方法,实现了L-乳酸发酵产量和质量的在线控制策略。

大肠杆菌caiAB基因的克隆与表达

从E.coli MC4100菌株的染色体DNA中利用鸟枪法克隆含编码巴豆甜菜碱还原酶和L-肉碱脱水酶的caiAB基因片段,并经序列分析验证。由重组质粒pZJD-1480亚克隆得到pT7-A以及pT7-B重组表达质粒,后者转入E.coliBL21（DE3）菌株中,经异丙基硫代半乳糖苷（IPT）诱导,在聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）上分子质量为40ku附近可见明显的表达蛋白带。

大肠杆菌可诱导启动子表达系统的构建

大肠杆菌作为现代基因工程最为常用的原核表达系统,其核心为基因启动元件的高效性和可控性．为了获得不依赖IPTG和温度诱导的新型启动子,克隆得到大肠杆菌中通过低pH诱导的启动子Padi,并采用点突变获得几个活性各异的启动子单元,启动子的转录效率最多提高18．8倍．结果表明：该受低pH条件诱导的启动子经点位突变后,提高转录活性的同时诱导的严谨性有一定下降；在调控蛋白和启动子的协同表达后,诱导的严谨性得到提高．

大肠杆菌cai DE的基因克隆与表达

从E .coliMC41 0 0菌体的染色体DNA中利用鸟枪法克隆含编码肉碱消旋酶及相关因子的caiDE基因片段 ,并经序列分析验证。由重组质粒 pJX393亚克隆得到 pDSW 2重组表达质粒 ,后者转入E .coliBL2 1 (DE3)菌株中 ,经异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,在聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)上分子量为 30kD和 2 4kD附近可见明显的表达蛋白带。

金属螯合层析法纯化紫草籽中铜锌超氧化物歧化酶(英文)

本文报道了用金属螯合层析从紫草籽中分离Cu/Zn超氧化物歧化酶的一种新方法。在金属螯合层析过程中 ,运用了pH梯度和组氨酸梯度两种洗脱技术 ,取得良好效果。Cu/Zn超氧化物歧化酶最终比活为 5 36 8.75U/mg ,纯化倍数 36 6 .75 ,得率 18.7% ,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳法证明了其均一性。

基于活细胞量测量的利福霉素发酵过程氮源优化策略

在发酵生产利福霉素SV的过程中,其菌丝体的生长代谢情况及产物发酵合成都与有活力的菌丝量密切相关。介绍了在线活细胞传感仪测定活细胞量的方法,它利用细胞的介电特性,能够排除发酵液中固含物的干扰,测得的电容值与活细胞浓度呈线性相关,可以作为工艺优化过程中的关键参数。通过电容变化反映的前期生长出现的二次生长现象,进行了通过使用迟效氮源豆饼粉代替了原培养基中价格昂贵的速效氮源蛋白胨,成功消除了发酵前期由于氮源利用转换造成的生长停滞期,利用豆饼粉情况下培养前期的OUR和CER达到了14.8和15.3 mmol/L/h,明显高于利用速效氮源蛋白胨A组的8.6和11.3 mmol/L/h,保证了持续较高的比生长速率,对于促进菌体的氧消耗速率的增加和维持有着重要的作用,明显有利于利福霉素的合成与速率的维持,氮源替代组的发酵效价达到了5969±19 U/ml,与对照组(5030±17U/ml)相比显著提升发酵单位18.7%以上。

等离子体作用结合氧限制模型选育利福霉素SV高产菌株

利福霉素SV毒性低、疗效高、抗菌谱广,主要由地中海拟无枝酸菌发酵生产,其发酵过程属于耗氧发酵,供氧直接影响产物形成。为减少发酵过程氧限制影响,进一步提高利福霉素发酵产量,通过构建定向氧限制模型,将常温常压等离子体诱变和无水亚硫酸钠氧限制筛选模型相结合,建立了利福霉素生产菌株24孔板快速培养的高通量筛选方法,高效选育出能够耐受低氧环境的利福霉素SV高产菌株NSMXG-M126,发酵代谢状态参数变化显示,该高产菌株具有更好的氧亲和力。同样的供氧条件下,与对照相比表现出较快的菌体生长速率和利福霉素SV的快速合成能力。在低供氧情况下发酵单位达到7839mg/L,较出发菌株提高48%,表明耐受低氧的突变菌株具有更高的利福霉素SV生产效率。