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酶及其生物催化技术的研究与应用 被引量:2
1
作者 杨林 陈志 +1 位作者 姜水琴 魏东芝 《生物产业技术》 2019年第3期25-35,共11页
与传统化学催化工艺相比,基于酶的生物催化工艺具有反应条件温和、环境友好、操作简便、立体选择性优良等优势。当前已有多个生物催化工艺应用于生产精细大宗化学品和高附加值医药中间体,此外在食品、化妆品等领域也有广泛的应用。主要... 与传统化学催化工艺相比,基于酶的生物催化工艺具有反应条件温和、环境友好、操作简便、立体选择性优良等优势。当前已有多个生物催化工艺应用于生产精细大宗化学品和高附加值医药中间体,此外在食品、化妆品等领域也有广泛的应用。主要综述了酶及其生物催化技术的研究进展,包括酶序的构建、酶的定向进化,以及酶与生物催化技术在大宗化学品、医药中间体、食品、化妆品、纺织以及纸浆造纸工业中的应用。 展开更多
关键词 生物催化 选择性 精细大宗化学品 高附加值医药中间体
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生物酶法制备光学纯β-苯丙氨酸的研究
2
作者 李登超 魏东芝 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期44-46,共3页
利用工业来源的固定化青霉素酰化酶在不同pH条件下具有的对映体选择性酰化和水解反应特性制备光学纯(S)-β-苯丙氨酸(BPA)和(R)-BPA。在酰化过程中(pH 10)只有(R)-BPA被酰化为苯乙酰-(R)-BPA,而(S)-BPA不被酰化留在水相,然后利用苯乙酰-... 利用工业来源的固定化青霉素酰化酶在不同pH条件下具有的对映体选择性酰化和水解反应特性制备光学纯(S)-β-苯丙氨酸(BPA)和(R)-BPA。在酰化过程中(pH 10)只有(R)-BPA被酰化为苯乙酰-(R)-BPA,而(S)-BPA不被酰化留在水相,然后利用苯乙酰-(R)-BPA和(S)-BPA的溶解性差异将二者分离可直接得到(S)-BPA,分离的苯乙酰-(R)-BPA再经PGA水解(pH 7.5)可得到(R)-BPA,从而制备了BPA的2种对映体。得到的N-苯乙酰-(R)-BPA的对映体过量值(e.e.%)为99%;(S)-BPA酸和(R)-BPA的e.e.%分别为98%和99%。 展开更多
关键词 青霉素酰化酶 酰化 β-苯丙氨酸 对映体过量值
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2,3-丁二醇发酵过程的菌体生物质回收利用初步研究 被引量:2
3
作者 孙金杰 郝英利 +3 位作者 周文瑜 魏东芝 朱家文 沈亚领 《化学与生物工程》 CAS 2010年第7期73-76,共4页
研究了在粘质沙雷氏菌利用蔗糖生产2,3-丁二醇过程中,回收利用菌体制备溶菌液替代发酵培养基中氮源。摇瓶发酵培养中,2,3-丁二醇浓度为39.3 g.L-1,与酵母粉作为氮源相比,产物浓度相近;以多次回收废菌体制成的溶菌液替代酵母粉作为氮源,2... 研究了在粘质沙雷氏菌利用蔗糖生产2,3-丁二醇过程中,回收利用菌体制备溶菌液替代发酵培养基中氮源。摇瓶发酵培养中,2,3-丁二醇浓度为39.3 g.L-1,与酵母粉作为氮源相比,产物浓度相近;以多次回收废菌体制成的溶菌液替代酵母粉作为氮源,2,3-丁二醇浓度略低。3.7 L发酵罐实验中,共有221.95 g.L-1蔗糖被利用,2,3-丁二醇最高浓度为109.2 g.L-1,2,3-丁二醇转化率达到0.492 g.g-1、产率达到2.6 g.L-1.h-1。 展开更多
关键词 循环利用 2 3-丁二醇 粘质沙雷氏菌 溶菌液
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日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶的生物信息学鉴定与分析 被引量:4
4
作者 杨忠 胡薇 +4 位作者 苏谨 马骊 李亦学 冯正 魏东芝 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期272-275,共4页
目的鉴定日本血吸虫中存在的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,分析其蛋白结构特征。方法采用双向同源比对、结构域搜索和系统发育分析等生物信息学手段,在已有转录组和蛋白质组数据基础上鉴定日本血吸虫的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,并采用同源建模方... 目的鉴定日本血吸虫中存在的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,分析其蛋白结构特征。方法采用双向同源比对、结构域搜索和系统发育分析等生物信息学手段,在已有转录组和蛋白质组数据基础上鉴定日本血吸虫的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,并采用同源建模方法获得日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶的结构特征。结果获得了2条腺嘌呤磷酸核糖转移酶的同源蛋白序列;分析了这2条序列的EST丰度、理化性质及蛋白三维结构等信息。结论日本血吸虫至少存在2个腺嘌呤磷酸核糖转移酶的异构体。 展开更多
关键词 日本血吸虫 腺嘌呤磷酸核糖转移酶 生物信息学
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葡萄糖流加策略对基因工程FR-008/杀念菌素衍生物CS103补料分批发酵过程的影响 被引量:1
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作者 毛相朝 杨亮 +3 位作者 陈实 沈亚领 魏东芝 邓子新 《工业微生物》 CAS CSCD 2009年第2期1-6,共6页
以组合生物合成技术得到的链霉菌FR-008突变株CS103为研究对象,研究了3.7L发酵罐上维持一定葡萄糖浓度对其次级代谢产物脱羧FR-008/candicidin衍生聚酮抗生素CS103生物合成的影响。当初始葡萄糖浓度20g/L,发酵过程还原糖浓度维持在10g/L... 以组合生物合成技术得到的链霉菌FR-008突变株CS103为研究对象,研究了3.7L发酵罐上维持一定葡萄糖浓度对其次级代谢产物脱羧FR-008/candicidin衍生聚酮抗生素CS103生物合成的影响。当初始葡萄糖浓度20g/L,发酵过程还原糖浓度维持在10g/L时,抗生素CS103最高产量较分批发酵最高产量相比提高30%。研究了3.7L罐上补料分批发酵生产CS103的工艺,主要考察了脉冲补料、间歇流加补料和连续流加补料三种补料分批发酵工艺,并与分批发酵进行了比较。连续流加补料维持糖浓度的效果明显,最高产量达到126.9μg/mL,与分批发酵相比提高了44%左右。 展开更多
关键词 葡萄糖 流加策略 补料分批发酵 基因工程FR-008/杀念菌素
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基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物发酵过程优化 被引量:2
6
作者 杨亮 毛相朝 +4 位作者 周文瑜 陈实 沈亚领 邓子新 魏东芝 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期333-337,共5页
以组合生物合成技术得到的基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103为研究对象,在摇瓶水平进行培养条件的初步优化。确定了接种量、接种时间、发酵过程pH、装液量等初步条件。对3.7L发酵罐水平的培养条件进行优化,确定了最适搅拌转... 以组合生物合成技术得到的基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103为研究对象,在摇瓶水平进行培养条件的初步优化。确定了接种量、接种时间、发酵过程pH、装液量等初步条件。对3.7L发酵罐水平的培养条件进行优化,确定了最适搅拌转速和通气量,并初步建立了补料分批发酵工艺。结果表明,接种时间30h、接种量为10%、控制pH6.5-7.0、搅拌转速450r/min、通气量200L/h,发酵过程维持发酵液残余葡萄糖浓度5g/L左右,在3.7L发酵罐基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103产量达到99.87μg/ml。本研究为基因工程FR-008/杀念菌素工业化生产工艺提供了依据。 展开更多
关键词 链霉菌FR-008 基因工程FR-008/杀念菌素 衍生物 发酵过程优化
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抗菌肽Adenoregulin基因工程菌培养条件的优化及分批发酵研究 被引量:14
7
作者 周宇荀 曹巍 +2 位作者 魏东芝 罗清平 王锦之 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期615-621,共7页
Adenoregulin(ADR)是来源于南美树蛙Phyllomedusabicolor皮肤的含有33个氨基酸的抗菌肽,在非极性环境中形成α_螺旋型结构,具有抗菌活性强、抗菌谱广的特点。将ADR基因克隆于pET32a载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),对这一工程菌株的培养... Adenoregulin(ADR)是来源于南美树蛙Phyllomedusabicolor皮肤的含有33个氨基酸的抗菌肽,在非极性环境中形成α_螺旋型结构,具有抗菌活性强、抗菌谱广的特点。将ADR基因克隆于pET32a载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),对这一工程菌株的培养条件进行了优化。通过正交试验,考察诱导时机、诱导剂量和诱导时间三个因素的不同水平对蛋白表达的影响,结果发现诱导时机的影响尤为显著,考察了9种不同培养基对表达量的影响,发现培养基中加入葡萄糖对目标蛋白的稳定表达起了重要的作用,确定最佳培养条件为:培养基为2×YT+0·5%葡萄糖,诱导时机为OD600=0·9左右,诱导剂IPTG加入的终浓度为0·1mmol/L,诱导时间为4h。采用前期恒pH、后期指数流加的策略进行工程菌BL21(DE3)/pET32a_adr的高密度培养,在整个流加过程中,通过控制葡萄糖的加入量,将菌株的比生长速率控制在0·15h-1,乙酸浓度也被控制在较低的水平(<2g/L),但是质粒丢失严重,在发酵结束时,约有40%的大肠杆菌中不带质粒,这导致了目标蛋白的表达量下降严重,但是表达的目标蛋白90%以上为可溶性形式。表达的融合蛋白无抑菌活性,而裂解后得到的ADR单体具有明显的抑菌活性。 展开更多
关键词 adenoregulin 大肠杆菌 重组表达 优化 高密度
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短小芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及酶学性质研究 被引量:4
8
作者 苏二正 吴向萍 +1 位作者 高蓓 魏东芝 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期132-138,共7页
从土壤样品中通过筛菌过程获得一株产脂肪酶的菌株,经16S rRNA鉴定属于短小芽孢杆菌,根据已报道的来源于芽孢杆菌的脂肪酶基因设计引物,克隆获得其全长基因,命名为lipS6,大小为648 bp,编码215个氨基酸,经比对其与已报道的脂肪酶基因B26... 从土壤样品中通过筛菌过程获得一株产脂肪酶的菌株,经16S rRNA鉴定属于短小芽孢杆菌,根据已报道的来源于芽孢杆菌的脂肪酶基因设计引物,克隆获得其全长基因,命名为lipS6,大小为648 bp,编码215个氨基酸,经比对其与已报道的脂肪酶基因B26有96%的同源性。构建重组表达质粒pET32a-lipS6,在大肠杆菌中实现了可溶表达,酶活达到2 000 U/mL。重组脂肪酶LipS6的最适温度为30℃,最适pH为9,低浓度的Ca2+与Mn2+对其有很明显的激活作用,疏水性有机溶剂对其毒害作用小,在正己烷体系中可以催化酯化反应,最适酯化底物酸为十四酸,底物醇为正丁醇。 展开更多
关键词 脂肪酶 短小芽孢杆菌 基因克隆 重组表达 性质
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青霉素酰化酶表达调控的研究进展 被引量:2
9
作者 蒋咏梅 章文贤 魏东芝 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期34-37,共4页
青霉素酰化酶(penicillin acylase,PAC)是抗生素工业的重要酶。它在大肠杆菌中需经过复杂的转录、翻译和后翻译才能成熟,且后翻译过程对活性酶的最终形成影响很大。在阐述PAC的苯乙酸诱导机制的基础上,详细论述了PAC的后翻译过程,并对... 青霉素酰化酶(penicillin acylase,PAC)是抗生素工业的重要酶。它在大肠杆菌中需经过复杂的转录、翻译和后翻译才能成熟,且后翻译过程对活性酶的最终形成影响很大。在阐述PAC的苯乙酸诱导机制的基础上,详细论述了PAC的后翻译过程,并对几种主要的影响因素进行了分析。 展开更多
关键词 青霉素酰化酶 大肠杆菌 诱导机制 后翻译过程 影响因素
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粘质沙雷氏菌利用蔗糖和柠檬酸铵生产2,3-丁二醇的研究 被引量:5
10
作者 杨云龙 张燎原 +4 位作者 孙建安 魏东芝 周文瑜 沈亚领 朱家文 《化学与生物工程》 CAS 2009年第9期41-44,共4页
研究了几种无机氮源对粘质沙雷氏菌发酵生物量和产物2,3-丁二醇形成的影响,在确定柠檬酸铵为无机氮源的基础上,利用响应面法(RSM)对柠檬酸铵和硫酸锰的浓度进行了优化,得出了最佳浓度,并以此最优成分进行了摇瓶发酵和分批补料发酵。在... 研究了几种无机氮源对粘质沙雷氏菌发酵生物量和产物2,3-丁二醇形成的影响,在确定柠檬酸铵为无机氮源的基础上,利用响应面法(RSM)对柠檬酸铵和硫酸锰的浓度进行了优化,得出了最佳浓度,并以此最优成分进行了摇瓶发酵和分批补料发酵。在摇瓶发酵中,110g·L-1的蔗糖最终被转化成44g·L-1的2,3-丁二醇,转化率为0.4g.g-1,产率为1.13g·L-1.h-1;在分批补料发酵中,共有166g·L-1的蔗糖被消耗,2,3-丁二醇的最高浓度为81.2g.L-1,乙偶姻的浓度为7.7g·L-1,2,3-丁二醇转化率达到0.489g.g-1,产率达到1.7g·L-1.h-1。 展开更多
关键词 粘质沙雷氏菌 无机氮源 2 3-丁二醇 响应面法 分批补料发酵
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粘质沙雷氏菌G1利用玉米浆干粉和磷酸氢二铵生产2,3-丁二醇的研究 被引量:3
11
作者 郝英利 张燎原 +4 位作者 孙建安 魏东芝 周文瑜 沈亚领 朱家文 《化学与生物工程》 CAS 2013年第6期34-38,共5页
研究了几种工业氮源对粘质沙雷氏菌G1发酵生产2,3-丁二醇的影响,在确定玉米浆干粉为氮源的基础上,利用Plackett-Burman(PB)实验和响应面法(RSM)实验对玉米浆干粉和磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]的浓度进行了优化,确定优化培养基(g·L-1)为... 研究了几种工业氮源对粘质沙雷氏菌G1发酵生产2,3-丁二醇的影响,在确定玉米浆干粉为氮源的基础上,利用Plackett-Burman(PB)实验和响应面法(RSM)实验对玉米浆干粉和磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]的浓度进行了优化,确定优化培养基(g·L-1)为:蔗糖90,玉米浆干粉20.32,(NH4)2HPO47.21,NaAc 4,柠檬酸钠14,MgSO40.5,Fe-SO40.02,MnSO40.01。并以此优化培养基进行了摇瓶和分批补料发酵,结果表明,摇瓶发酵中,90g·L-1的蔗糖最终被转化成43.06g·L-1的2,3-丁二醇;分批补料发酵中,2,3-丁二醇浓度为128.28g·L-1,产率为2.67g·L-1·h-1,转化率为0.48g·g-1蔗糖。以玉米浆干粉和(NH4)2HPO4为氮源,2,3-丁二醇浓度较高,培养基的成本大幅降低,为工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 粘质沙雷氏菌G1 玉米浆干粉 磷酸氢二铵 2 3-丁二醇 响应面法 成本 分批补料发酵
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TRAIL包涵体在细胞内重折叠现象的初步研究
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作者 汤亚南 潘若鋆 +5 位作者 周劲松 张国钧 孙菁 球谊 魏东芝 沈亚领 《工业微生物》 CAS CSCD 2009年第4期32-37,共6页
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Apo2L/TRAIL)是一种新型的抗肿瘤蛋白。但在大肠杆菌表达系统中,表达的TRAIL蛋白往往容易聚集形成包涵体。本文对重组TRAIL包涵体在胞内重折叠转化成可溶性TRAIL蛋白作了初步探索,结果表明:当蛋白表达后,... 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Apo2L/TRAIL)是一种新型的抗肿瘤蛋白。但在大肠杆菌表达系统中,表达的TRAIL蛋白往往容易聚集形成包涵体。本文对重组TRAIL包涵体在胞内重折叠转化成可溶性TRAIL蛋白作了初步探索,结果表明:当蛋白表达后,迅速降低温度至30℃并添加50μg/mL氯霉素继续培养4 h,可溶性TRAIL产量可提高至16.7%。这一结果在3.7L罐上也得到了证实,可溶性TRAIL表达量达到14.5%。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 重折叠 包涵体 重组大肠杆菌
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基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103的分离提取及毒性和抗白色念珠菌活性研究
13
作者 毛相朝 陶欣艺 +3 位作者 杨亮 沈亚领 魏东芝 邓子新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1859-1864,共6页
本文在建立了基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103分离提取工艺的基础上,经进一步纯化,获得一定供试样品。通过对比脱羧FR-008/杀念菌素CS103、FR-008/杀念菌素和两性霉素B三种化合物对人胚肾细胞毒性、对人血红细胞的溶血活性和对... 本文在建立了基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103分离提取工艺的基础上,经进一步纯化,获得一定供试样品。通过对比脱羧FR-008/杀念菌素CS103、FR-008/杀念菌素和两性霉素B三种化合物对人胚肾细胞毒性、对人血红细胞的溶血活性和对白色念珠菌的抗菌效果,发现脱羧FR-008/杀念菌素CS103的毒性较FR-008/杀念菌素和两性霉素B大大降低,且保持了较高的抗真菌(Candida albicans)活性。 展开更多
关键词 FR-008/杀念菌素 脱羧衍生物CS103 两性霉素B 毒性 抗真菌活性
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蜂胶HPLC指纹图谱及质量控制 被引量:19
14
作者 朱恩圆 窦玉玲 +2 位作者 魏东芝 王峥涛 卢艳花 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第18期1423-1425,共3页
目的:研究蜂胶HPLC指纹图谱,对蜂胶进行质量控制。方法:采用RP-HPLC测定。结果:不同来源的蜂胶所含黄酮类成分之间的相似性较大,其差异较小。结论:可以采用HPLC指纹图谱,对市场上蜂胶的品种和蜂胶保健品的真伪进行鉴别。
关键词 蜂胶 黄酮 HPLC指纹图谱 质量控制
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虫草素高产菌株的筛选及菌丝体中核苷类成分的分析 被引量:8
15
作者 刘艳芳 唐庆九 +6 位作者 杨焱 张劲松 冯娜 周帅 蔡令仪 高君辉 魏东芝 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2010年第6期1061-1064,共4页
用高效液相色谱对摇瓶培养获得的19个虫草属菌株的菌丝体及胞外液中核苷类成分进行了分析比较。结果表明,菌丝体中含有的核苷种类较多,且不同菌株菌丝体核苷类成分含量差异显著,而胞外液中的核苷主要为虫草素。同时发现虫草素主要分泌... 用高效液相色谱对摇瓶培养获得的19个虫草属菌株的菌丝体及胞外液中核苷类成分进行了分析比较。结果表明,菌丝体中含有的核苷种类较多,且不同菌株菌丝体核苷类成分含量差异显著,而胞外液中的核苷主要为虫草素。同时发现虫草素主要分泌到培养基中,胞外液虫草素的含量可比菌丝体中高出40倍。通过筛选,获得一株虫草素高产菌株,培养液中虫草素含量可达366mg/L。 展开更多
关键词 深层发酵 虫草素 核苷 胞外液
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新方法活化聚乙二醇修饰细胞因子类药物 被引量:5
16
作者 何明磊 熊玉春 魏东芝 《药物生物技术》 CAS CSCD 2005年第3期158-161,共4页
文章提供一种活化聚乙二醇的新方法。其主要步骤是先把聚乙二醇两端的两个羟基转化为羧基,然后在活化两个羧基的同时,用含有氨基的试剂将其中的一个活化端封闭,从而造成单端活化的状态,使之适合对蛋白质等物质进行修饰反应。使用该方法... 文章提供一种活化聚乙二醇的新方法。其主要步骤是先把聚乙二醇两端的两个羟基转化为羧基,然后在活化两个羧基的同时,用含有氨基的试剂将其中的一个活化端封闭,从而造成单端活化的状态,使之适合对蛋白质等物质进行修饰反应。使用该方法活化的分子质量为10ku的聚乙二醇修饰了重组人白细胞介素2,分子质量为12ku的聚乙二醇修饰了重组人干扰素α2b,取得了较好的修饰效果。 展开更多
关键词 聚乙二醇 活化 细胞因子 修饰
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A Benzofuranoid Neolignan from Magnolia biondii Pamp 被引量:3
17
作者 卢艳花 高扬 +2 位作者 王峥涛 刘建群 魏东芝 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS 2005年第3期137-139,共3页
Aim Isolation and structural elucidation of the constituents from the dried flower buds of Magnolia biondii Pamp. Methods Column chromatography and TLC were used to isolate chemical constituents. Spectroscopic methods... Aim Isolation and structural elucidation of the constituents from the dried flower buds of Magnolia biondii Pamp. Methods Column chromatography and TLC were used to isolate chemical constituents. Spectroscopic methods were employed for structural elucidation. Results One benzo furanoid neolignan (licarin B) and two bisepoxy lignans (magnolin, fargesin) were isolated and identified. Conclusion Licarin B is the first reported benzofuranoid lignan from the family Magnoliaceae. 展开更多
关键词 Magnolia biondii licarin B NEOLIGNAN
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末端连接ω-氨基酸的聚乙二醇修饰剂的制备 被引量:1
18
作者 熊玉春 刘清海 +1 位作者 何明磊 魏东芝 《华东理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期181-185,共5页
提出了一种新型聚乙二醇(PEG)修饰剂的合成方法。首先以两种ω-氨基酸和单甲氧基PEG为主要原料,经连接、纯化和水解等步骤,得到末端以酰胺键连接ω-氨基酸的PEG酸,再将得到的PEG酸用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)进行活化,得到聚乙二醇-β-丙氨... 提出了一种新型聚乙二醇(PEG)修饰剂的合成方法。首先以两种ω-氨基酸和单甲氧基PEG为主要原料,经连接、纯化和水解等步骤,得到末端以酰胺键连接ω-氨基酸的PEG酸,再将得到的PEG酸用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)进行活化,得到聚乙二醇-β-丙氨酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯(PEG-BPA-NHS)和聚乙二醇-γ-氨基丁酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯(PEG-GABA-NHS),总收率为60%。这类新的修饰剂经验证具有较长的水解半衰期(分别为7.6 min和16.7 min)和良好的蛋白修饰能力。 展开更多
关键词 聚乙二醇 ω-氨基酸 聚乙二醇修饰 活化 制备
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日本血吸虫腺苷脱氨酶基因的克隆和融合表达 被引量:1
19
作者 杨忠 徐斌 +3 位作者 王玮 冯正 魏东芝 胡薇 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期6-11,共6页
目的克隆和表达日本血吸虫(Sj)腺苷脱氨酶(ADA)编码基因,分析该基因的系统发育及预测其编码蛋白的空间结构。方法根据表达序列标签(EST)测序的结果设计引物,PCR法从含有SjADA基因的cDNA克隆中扩增得到该编码基因片段,亚克隆入原核表达载... 目的克隆和表达日本血吸虫(Sj)腺苷脱氨酶(ADA)编码基因,分析该基因的系统发育及预测其编码蛋白的空间结构。方法根据表达序列标签(EST)测序的结果设计引物,PCR法从含有SjADA基因的cDNA克隆中扩增得到该编码基因片段,亚克隆入原核表达载体pET32中表达,表达的融合蛋白用螯合琼脂糖凝胶FF亲和层析纯化。采用MrBayes算法构建系统发育进化树,用自动蛋白注释工具(DS GeneAtlas)软件模拟SjADA的蛋白空间结构。结果获得SjADA基因全长为1 059 bp的编码序列,并克隆、表达和纯化了重组蛋白(SjADA)。生物信息学分析显示,该基因与曼氏血吸虫的同源基因之间的序列一致性仅25%,属于不同的亚家族。其空间结构与PDB模板1A4M的一致性为41%,具有相似的二级结构和相应的活性位点残基。结论获得了SjADA重组蛋白。提示日本血吸虫嘌呤补救合成代谢途径与曼氏血吸虫有差异。 展开更多
关键词 日本血吸虫 嘌呤代谢 腺苷脱氨酶
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Determination of Candicidin/FR-008 and Related Components in Fermentation Broth by RP-HPLC
20
作者 毛相朝 沈亚领 +2 位作者 魏东芝 陈实 邓子新 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS 2005年第2期115-118,共4页
Aim A liquid chromatographic method for the determination ofcandicidin/FR-008 and related components in fermentation broth has been developed. Methods Therewere four major components in the candicidin/FR-008 complex, ... Aim A liquid chromatographic method for the determination ofcandicidin/FR-008 and related components in fermentation broth has been developed. Methods Therewere four major components in the candicidin/FR-008 complex, which were separated by HPLC under thefollowing conditions: SB-C8 column (4.6 mm x 250 mm, 5 μm) was used, the mobile phase consisted ofacetonitrileam-monium acteate (20 mmol·L^(-1) , pH 4.0) (40:60, V/V) , with a flow rate of 1 .0mL·min^(-1) , the UV detection wavelength was 380 nm, and the whole process was performed at 25℃ .Results The linearity was obtained in the range of 6.25 - 500 μg· mL^(-1) candicidin/FR-008 withthe regression equation of Y = 20 461 x + 30 748 and the correlation coefficient of 0.999 1. Theinstrument precision was 1.84% and the method precision was 3.8%. Conclusion This method isaccurate, rapid and simple; it can be used for determination of candicidin/FR-008 and relatedcomponents in fermentation broth. 展开更多
关键词 candicidin/FR-008 HPLC fermentation broth METABOLITES
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