重组人铜锌SOD在脱水过程中的二级结构变化及保护剂的作用

用衰减全反射(ATR)傅立叶变换红外光谱技术研究了重组人铜锌SOD(rhCu,Zn-SOD)在脱水过程中的二级结构变化及保护剂的作用。结果显示,在脱水过程中,蛋白质结构发生了重排,无论是真空干燥还是冷冻干燥,子峰峰位都发生偏移,α-螺旋结构消失,产生无规卷曲结构。糖和硼酸盐能够有效地维持酶的天然构象,其中海藻糖对冻干过程中rhCu,Zn-SOD的α-螺旋结构维持率为93%。

钝顶螺旋藻Fe-SOD的纯化及性质

从螺旋藻中分离纯化的Fe-SOD平均比活为4576U/mg,总活力回收率50%,纯度达电泳纯。SDS-PAGE测定纯化的Fe-SOD亚基相对分子质量为21ku,每分子亚基含0.7个Fe原子;在Tris-盐酸缓冲液中的最适pH为8.2、最适温度为25°C;在紫外区279nm有最大光吸收,酶的pH稳定范围为6～11,65°C以上迅速失活,该酶对H2O2敏感,在5mmol/LH2O2中迅速失活,而在φ=0.1的乙腈和5mmol/L叠氮化钠中稳定。

酶解星虫水溶性蛋白制备降血压肽的工艺研究

以可口革囊星虫水溶性蛋白为原料,利用胃蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解星虫蛋白制备降血压肽;并以酶解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率为指标,对酶解条件进行优化,确定了星虫蛋白酶解的最佳条件为酶解时间4h、酶解pH为1.8、酶添加量为0.3%(w/v),温度37℃,所得酶解产物的IC50为1.85mg/mL。同时对酶解产物的体内降血压活性进行了动物实验,研究表明,星虫蛋白降血压肽在给药后1h,收缩压(SBP)开始下降,一直持续8h,SBP平均降低了约17mmHg。

紫草籽抗氧化物质(SOD和黄酮类化合物)的研究

紫草籽SOD提取工艺为 :粗酶液提取 ,超滤 ,硫酸铵分级沉淀 ,DEAE -FF离子交换层析和SephadexG - 10 0凝胶过滤。实验表明 ,纯化后的SOD比活达到 32 89.2U mg .pro ,活性回收为 35 .4 %。紫草籽中黄酮类化合物的最佳提取条件为 :乙醇浓度6 0 %、固液比 1:5、温度 5 0℃、提取时间为 2h。然后用HZ816树脂进一步分离纯化得精制黄酮 ,其纯度为 86 .3% ,总黄酮回收率为 77%。进一步实验表明精制黄酮对DPPH·的EC50 为 12 .6mg L ,优于茶多酚 ,与维生素C非常接近。紫草籽精制黄酮对小鼠离体肝、肾和心组织中的MDA生成均有抑制作用 ,其中对离体肝组织中MDA生成的抑制效果最明显。

基于分子模拟的离子液体修饰Porcine Pancreas脂肪酶催化性能和稳定性的相关研究

采用分子模拟手段研究了功能性离子液体[HOOCBMIm]Cl修饰Porcine Pancreas脂肪酶(PPL)结构稳定性与催化性能增强的机理.在335和300 K下比较研究两种脂肪酶的一系列相互作用特点与结构性质,包括静电势(electrostatic potential,ESP)、均方根偏差(Root Mean Square Deviation,RMSD)、能量变化、溶剂化面积等等.分析结果表明:在335K下,修饰后的脂肪酶(Engineered PPL)的RMSD值(0.537?)小于未修饰的脂肪酶(Wild-type PPL)的RMSD值(0.68?),同时Engineered PPL的自由能也低于Wild-type PPL的自由能,说明Engineered PPL的构象更加稳定.修饰剂的引入使得Engineered PPL的疏水性面积和溶剂可及性面积(Solvent Accessible Surface Area,SASA)增大,增强了Engineered PPL的稳定性和水解活力.修饰剂的正电性与修饰位点附近的负电势氨基酸形成静电吸引作用,优化了蛋白表面电荷的相互作用,进一步提高了蛋白稳定性;同时也稳定了蛋白盖子结构的打开状态,有利于底物进入蛋白空腔催化位点,实现催化活性提升.本文从分子水平展示了离子液体修饰脂肪酶并提供了一种解析化学修饰改变酶学性质的方法.

过氧化氢漂白对开心果中花青素的影响

目的考察漂白剂过氧化氢及碱液漂白对开心果中花青素的影响,并对漂白工艺的必要性进行探讨。方法用带有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪检测漂白过的开心果果衣中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和矢车菊素-3-O-半乳糖苷含量;对开心果的硬外壳、果衣及果仁的外观进行对比。结果开心果中2种花青素含量对H2 O2很敏感。用0.1%过氧化氢漂白30 min,就可使花青素含量减少约60%。当H2O2浓度为5%以上时,开心果中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量减少至检测不出,而矢车菊素-3-O-半乳糖苷含量损失达到90%。漂白的动力学过程也指出,反应发生迅速、直接,渗透过程不是反应的限速步骤。碱液与过氧化氢的协同漂白可使开心果外壳漂得更洁白,但果仁中花青素含量损失更多。检测了5种市售漂白过的开心果和2种市售未漂白的开心果,漂白过的开心果中2种花青素均未检出,而未漂白开心果中花青素均有保留。结论漂白过程破坏了食用部分中的花青素,因而这一工艺步骤是否有必要,值得结合《中华人民共和国食品安全法》和《食品添加剂使用卫生标准》进一步讨论。