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猪白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
被引量:
2
1
作者
江云波
方六荣
+5 位作者
肖少波
张辉
潘永飞
罗锐
李彬
陈焕春
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第8期841-845,共5页
本研究通过RT-PCR方法从用ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪IL-15(pIL-15)编码序列的cD-NA,将其克隆至T载体pMD18-T后,序列测定表明pIL-15基因长度为489 bp,编码162个氨基酸。进一步通过PCR方法获得缺失其N端48 aa的信号肽序列的成...
本研究通过RT-PCR方法从用ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪IL-15(pIL-15)编码序列的cD-NA,将其克隆至T载体pMD18-T后,序列测定表明pIL-15基因长度为489 bp,编码162个氨基酸。进一步通过PCR方法获得缺失其N端48 aa的信号肽序列的成熟pIL-15蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-28a的6×His下游,构建重组表达质粒pET-pIL15,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,重组菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到分子量约为15 ku的重组蛋白,其表达量占总菌体蛋白量的17.5%。Western blot试验也证实表达的重组融合蛋白6×His-pIL15能够很好地与抗6×His单抗发生反应。猪IL-15基因的克隆、表达为进一步研究其功能和应用奠定了基础。
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关键词
猪白细胞介素15
基因克隆
原核表达
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职称材料
题名
猪白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
被引量:
2
1
作者
江云波
方六荣
肖少波
张辉
潘永飞
罗锐
李彬
陈焕春
机构
华中农业大学动物病毒室农业微生物国家重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第8期841-845,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30300257)
国家973基础研究项目(2005CB523200)
文摘
本研究通过RT-PCR方法从用ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪IL-15(pIL-15)编码序列的cD-NA,将其克隆至T载体pMD18-T后,序列测定表明pIL-15基因长度为489 bp,编码162个氨基酸。进一步通过PCR方法获得缺失其N端48 aa的信号肽序列的成熟pIL-15蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-28a的6×His下游,构建重组表达质粒pET-pIL15,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,重组菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到分子量约为15 ku的重组蛋白,其表达量占总菌体蛋白量的17.5%。Western blot试验也证实表达的重组融合蛋白6×His-pIL15能够很好地与抗6×His单抗发生反应。猪IL-15基因的克隆、表达为进一步研究其功能和应用奠定了基础。
关键词
猪白细胞介素15
基因克隆
原核表达
Keywords
porcine IL-15
gene cloning
prokaryotic expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
江云波
方六荣
肖少波
张辉
潘永飞
罗锐
李彬
陈焕春
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
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