功能型分子标记(ISAP)的开发及评价

分子标记在图谱构建,QTL分析,基因定位以及标记辅助育种中起着越来越重要的作用。研究者都期望一个分子标记位点代表一个特定的基因,甚至与某种性状联系起来,这样,通过对某个分子标记的筛选即能对性状进行筛选,此即功能型分子标记。而目前广泛使用的基于PCR基础的分子标记如RAPD、SSR、AFLP等或是扩增非编码区域,或是随机在基因组中扩增,得到的位点一般与目标性状基因距离较远,这使得分子标记在应用上与其目标有一定的偏差。研究建立了一种基于基因中内含子序列的功能型分子标记,试图使标记位点与基因序列联系起来以达到其功能型的目的。它利用内含子剪接位置的保守一致序列作为其引物的核心序列,其上下游引物均为18bp,上下游引物间通过组合配对的方式作为扩增的引物对,对真核生物的基因序列进行扩增。为了验证ISAP的功能性,研究设计了17条引物(9条上游引物,8条下游引物,共计72个引物组合)对棉花F2群体进行扩增并构建遗传连锁图谱,其中67个显示了多态性,共得到212个位点。我们用此212个位点连同164个SRAP位点构建了一张包含276个位点的遗传连锁图谱,ISAP标记在整个连锁群中分布比较均匀,部分区域呈现标记高饱和现象,可能为编码序列富集区。另外对20个片段进行测序的结果表明,85%的序列显示了与已公布EST序列的同源性,说明扩增是跨越了外显子进行的,得到的序列与表达序列紧密连锁。结果显示,ISAP标记是简单,可靠,具有较高多态性,并且扩增基因区域的一种功能型分子标记。同时,还使用ISAP标记对其他植物进行了扩增,取得了良好的效果。

冰糖橙优良芽变的AFLP分析

应用AFLP技术,筛选了40对引物,其中EcoR I AGC+M seI CGA,EcoR I AGC+M seI CAC,EcoR I AGG+M seI CAC,EcoR I AGG+M seI CCA,EcoR I ACG+M seI CAC,EcoR I ACG+M seI CCA等共12对引物经PCR扩增,效果理想,共扩增出4 227条带,带型清晰、丰富、可靠性强。在EcoR1-ACG+M seI-CAC这对引物下,果实性状优良的单株变异与普通对照(即普通冰糖橙)有明显的带型差异,多态性比例达10.2%。应用AFLP技术进行柑橘芽变的分析和鉴定获得成功。

油桃品种的RAPD分析

为了用分子生物学方法对油桃品种进行分析 ,本研究利用 RAPD技术 ,采用从 2 0 0个 1 0碱基随机引物筛选的 2 2个引物对 1 9个油桃品种的基因组 DNA进行扩增 ,通过扩增 1 80个位点谱带的聚类 ,分析供试油桃的系统发育 ,将供试油桃品种分为 3类 ;并运用特殊谱带 ,建立了油桃的品种分子识别表 ,提出了重点保存的油桃种质有曙光、瑞光 2号、五月火、艾米拉、红李光。

黄肉桃种质资源的RAPD分析

利用RAPD技术,采用从200个十碱基随机物筛选的22个随机引物对37个黄肉桃品种的基因组DNA进行扩增,通过扩增的180个位点的谱带的聚类,分析供试黄肉桃的系统发育,运用特殊谱带,建立了黄肉桃的分子检索表,并提出了重点保存的黄肉桃种质。

利用RAPD技术对蟠桃品种的分析

为了对蟠桃的品种识别、系统发育及资源保存提供分子生物学依据.本试验利用RAPD技术,采用从200个随机引物中筛选的22个随机引物对13个蟠桃品种的基因组DNA进行扩增,通过扩增位点的谱带的聚类,分析供试蟠桃的系统发育,在相似系数为0 917处可将供试品种划分为5类,并运用特殊谱带,建立了蟠桃品种的识别谱带,并提出了需重点保存的蟠桃种质为玉露蟠桃、五月鲜扁干、苏联蟠桃、嘉庆、扬州124。

寿星桃种质资源的RAPD分析

该研究利用RAPD技术 ,从分子生物学角度对寿星桃种质进行分析 .采用从 2 0 0个 10碱基随机引物筛选的 2 2个引物对 10个寿星桃类型的基因组DNA进行扩增 ,通过对 180个扩增位点的谱带的聚类 ,分析供试寿星桃的系统发育 ;运用特殊谱带 ,建立了寿星桃的分子检索表 ;并对扩增的特殊位点进行统计 。

利用RAPD标记对桃不同类群的遗传差异比较

运用RAPD(randomamplifiedpolymorphicDNA)技术对桃属中 2 0 3份试材进行了研究 ,并对其中的砧木类、寿星桃类、碧桃类、垂枝桃类、红叶桃类、硬肉桃类、蜜桃类、水蜜桃类、蟠桃类、油桃类和黄肉桃类采用多态标记、标记频率、扩增位点变异系数、各位点的相关性的比较 ,结果如下 :寿星桃、垂枝桃、红叶桃和碧桃为较原始类 ,而硬肉桃、蜜桃、水蜜桃、蟠桃、油桃和黄肉桃为较进化类 ,且它们相关联程度大 在遗传多样性方面 ,砧木类最高 ;红叶桃、蜜桃、蟠桃和黄肉桃次之 ;寿星桃、碧桃、垂枝桃。

桃遗传多样性的RAPD分析

采用 RAPD技术 ,利用 2 0 0个引物筛选的 2 2个 10碱基随机引物对桃 182个变种、类型、品种进行 DNA扩增。对扩增位点上的带型分析 ,观察到有的引物在某一位点上明显有带的分离 ,且 S6 5、S4 59、S1 6 7、S6 0 引物在这一位点可以包含一个类群或几个类群全部的供试品种、变种或类型 ,但各类群都没有各自独特的特征带。聚类图分析表明 ,来源无性系的品种遗传一致度最大达 0 .990 ;有的品种也表现出较大遗传一致度的为 0 .985 ;也有的品种的遗传一致度较低 ,范围在 0 .6 86～ 0 .831之间。对桃的分类 ,以水蜜桃、寿星桃、垂枝桃作为类群划分较明晰 ,其它品种的类群划分则较困难 。

RAPD技术在桃种质资源保存中的应用

采用 RAPD技术 ,用筛选的 2 2个 10碱基随机引物对桃属 2 0 3个材料的 DNA进行扩增 ,对所得到的 180个位点建立数据库 ,并采用聚类法、统计学方法、标记频率法、多态带数和特殊位点法进行分析 。

蟠桃种质资源的RAPD分析

利用RAPD技术 ,采用从 2 0 0个随机引物中筛选的 2 2个随机引物对 13个蟠桃品种的基因组DNA进行扩增 ,通过扩增 180个位点的谱带的聚类 ,分析供试蟠桃的系统发育 ,并运用特殊谱带 ,建立了蟠桃的分子检索表 ;

冰糖橙和冰糖脐橙的性状研究

与普通冰糖橙比较，冰糖脐橙的果实成熟期比冰糖橙晚10～15d，果实增大，平均单果重增加，果实整齐度提高，果皮薄而光滑，呈橙黄色，肉质细嫩，化渣，果汁增多，总糖含量略低，总酸含量增高，与冰糖橙有较显著差异，风味加浓，果实品质更好。

冰糖脐橙DNA提取研究

提取DNA时,用N aC l和乙醚有效地去除了冰糖脐橙叶片中的多糖,新梢的嫩叶和成熟叶片均可作为DNA提取材料,改变了以前只采用嫩叶作为提取材料,摆脱了提取DNA材料来源的限制和取样时间局限性。

利用RAPD技术对新疆桃分类地位的探讨

采用RAPD技术 ,用筛选的 2 2个 10碱基随机引物对桃属 2 0 3个材料扩增 ,着重对其中的新疆桃类型进行了分子评价。针对新疆桃分类地位存在的异议 。

利用RAPD标记对桃品种特殊种质分析

采用RAPD技术，用从200 个随机引物筛选的22 个10碱基随机引物对148个桃品种进行DNA扩增。根据各品种扩增的RAPD带和聚类结果，分析具特殊位点，并在聚类图中聚在外围、相似系数较低的品种有玉露蟠桃、秋蜜、爱保太、佛尔蒂尼莫蒂尼和金皇后等特殊品种种质。从分子生物学角度，为种质保存和育种提供理论依据。

亲缘关系相近的桃品种的RAPD分析

对三组亲缘关系较近的品种 :砂子早生、砂激 2号 ;沪 0 2 1、沪 0 2 2、春蕾 ;1 2 1、银花露、白花、芒夏、朝霞、1 2 6 ;采用经过筛选的 2 2个 10碱基随机引物对其DNA扩增 ,通过RAPD带型分析 ,可得到鉴别。经聚类分析可知 ,来源于砂子早生无性系的砂激 2号具有与亲本较高的遗传相似系数 。

甘蓝型油菜新品系的抗裂角性筛选与相关性状分析

甘蓝型油菜(Brassica napus L.)的裂角落粒严重影响油菜的产量和机械适收性。利用改进后的随机碰撞法对122份甘蓝型油菜的自交系和杂交组合进行抗裂角性评价,发现抗裂角指数(Shatter resistant index,SRI)大于0.60的品系占4.1%。分析抗裂角指数(SRI)与角果长、宽、果喙的相关性,发现抗裂角指数与角果长和果皮厚呈极显著正相关,且相关系数较高。结合种子的品质性状分析,共筛选了3份品质性状优良且抗裂角性强的甘蓝型油菜新品系早熟圣光168、E-7039和E-7089。

桃嫩叶及DNA处理方法用于RAPD分析的探讨

将桃 (AmygdaluspersicaL .)幼嫩叶 ,用格兰仕微波炉中火档干燥处理 3min、6min ,其中 6min处理明显影响DNA扩增 ;3min处理对DNA扩增没有太大的影响。桃幼嫩叶三种保存方式 ( - 72℃ 1 2 - 1 8d ,- 2 0℃ 30d ,- 2 0℃ 2 40d)DNA的质量和扩增带均较好。DNA在两种温度 ( 4℃和 - 2 0℃ )下保存 2 1 0d ,经过对其扩增 。