一种适于PCR扩增的快速提取猪基因组DNA的碱裂解法

以大白猪背最长肌、脾脏、耳组织为材料,用碱裂解法和酚-氯仿法分别提取猪基因组DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测DNA的产量和质量,结果发现2种方法提取的DNA产量没有明显差异。通过猪MC4R、TEF-1基因特异引物进行PCR扩增均能得到目的条带。碱裂解法提取的DNA原液稀释5倍、10倍后作为模板均获得了较为稳定的扩增产物。该结果表明,简单、快速、无毒的碱裂解法适用于动物定性PCR检测时DNA的提取。

中国两头乌猪品种内源性逆转录病毒基因研究

目的对5个中国两头乌猪品种(通城猪、东山猪、沙子岭猪、赣西两头乌猪和金华猪)及3个国外品种(大白猪、长白猪和杜洛克猪)猪内源性逆转录病毒(PERV)的核心蛋白(gag)基因、多聚酶(pol)基因、囊膜(env)基因的3个亚型A、B、C,分别从DNA和RNA水平上进行研究,以发现中国两头乌猪品种在异种器官移植中的资源优势。方法利用PCR方法在DNA水平上对PERV基因的三个亚型进行鉴定,并通过半定量PCR方法在RNA水平上检测通城猪和大白猪PERV各亚型在心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脂肪、淋巴和脑组织中的表达谱。结果4个华中两头乌猪种中env-AB型为主要PERV亚型,分别占被测总数的92%～100%。在这4个品种中均没有检测到C亚型,金华猪以及3个国外猪种中均检测到了C亚型,病毒亚型种类也更丰富。半定量PCR实验结果显示gag、pol基因在两个品种9个组织中广泛表达,env-A在通城猪的心、肝、肺、脂肪和淋巴组织中表达量较低,env-B在通城猪的心脏和淋巴组织中表达量较低,而env-B在大白猪的肾脏中表达很低,其他所测8个组织中表达量都较高。结论通城猪、东山猪、赣西两头乌猪和沙子岭猪可以做为较佳的异种移植候选供体,具有良好的应用前景。

猪繁殖与呼吸综合征抗病指示性状的分子标记筛查及检测

为鉴定与猪感染猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)抗病指示性状相关的分子标记,以大白猪×通城猪高代横交群体为研究对象,选用159头健康仔猪进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)人工感染试验,利用“中芯一号”基因芯片进行全基因组SNP分型,与PRRS抗病指示性状血液淋巴细胞百分比进行关联分析,筛选抗病指示性状相关分子标记。结果显示,猪DDX17和BTG1基因上的3个SNPs位点(rs81257542,rs329240026和rs334594334)与PRRSV感染不同时间点的血液淋巴细胞百分比显著关联(P<0.05)。rs81257542位点的等位基因C、rs334594334位点的等位基因A及DDX17-BTG1的合并基因型CC-AA为优势等位基因和优势基因型,优势等位基因越多的个体,PRRSV感染早期淋巴细胞百分比越高,具有更强的抗病力;本研究通过设计ARMS-PCR引物,建立rs81257542和rs334594334位点的Tetra-primer ARMS-PCR检测方法,仅需一步PCR和电泳即可鉴定个体的基因型。以上结果表明,rs81257542和rs334594334位点可作为PRRSV抗病性状血液淋巴细胞百分比的分子标记,其快速检测方法可实现优势基因型快速筛查。

梅花星猪类群种质分子特征研究

利用PCR-RFLP等技术检测了湖北省黄梅县梅花星类群49头猪的ESR、FSHβ(影响产仔数)、TEF1(生长速度)、LPIN1、H-FABP(肌内脂肪含量),MC4R、CMYA1(背膘厚度)等7个候选基因的多态性。结果表明,梅花星猪类群中上述7个候选基因均有丰富的多态性,特别是肌内脂肪含量有利基因的基因频率较高,是其肉质优良的分子基础。其他性状相关基因的杂合子频率也较高,通过和已有的研究对比,初步分析梅花星猪类群受外来猪杂化程度严重,本研究为梅花星猪遗传资源的保护和利用提供了科学依据。

HP-PRRSV人工感染后猪4种血液指标的变化规律及与病毒载量的关系

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)感染后猪血液指标的变化及与病毒载量的关系,以大白猪×通城猪高代横交群体为对象,选用72头平均11周龄的健康仔猪进行HP-PRRSV人工感染,在感染前和感染后第4、7、11、14、21、28天和第35天进行白细胞计数、淋巴细胞百分比、单核细胞计数、粒细胞百分比4种血常规指标的测定,并与病毒载量进行相关分析。结果显示:(1)感染与感染前相比,感染第4、7天的白细胞计数、淋巴细胞百分比、单核细胞计数均极显著降低,粒细胞百分比极显著升高;感染第11、14天的淋巴细胞百分比显著降低,粒细胞百分比显著升高,其他时间点均无显著变化。(2)抗病组和易感组的淋巴细胞百分比和粒细胞百分比在感染第7天存在显著差异,其中抗病组的淋巴细胞百分比显著高于易感组(P<0.05),粒细胞百分比显著低于易感组(P<0.05)。(3)4种血液指标与病毒载量之间均存在中度相关(P<0.01)。以上结果表明,血液指标可以考虑作为PRRS早期抗病性的指示性状。