小麦内根圈中几类微生物群体数量比较的研究

报道了２种土壤和２种土壤里小麦内根圈中几类微生物群体数量的测定结果，提出了以“好气性细菌总数”为参考系的比较方法分析小麦内根圈的根圈效应。小麦内根圈对芽胞杆菌有强烈的抑制效应。相对于“好气性细菌总数”而言，２种土壤中的贫营养细菌数和固氮菌数的相对数量相差很大，而小麦内根圈的根圈效应起一定的“中和”作用。荧光假单胞菌群不论在总数上还是在与“好气性细菌总数”的相对数量上优势都很低，与前人的一些报道相距甚远。在南温带冬季作物生长期，耐寒细菌群的代谢作用不可忽视。

微生物发酵韧皮纤维制浆造纸的研究

利用亨氏厌氧技术从沤麻塘底泥等厌氧生境中分离筛选到clostridium属的N_2,Y_4,Z_(2-8)三株厌氧细菌,研究结果表明,其户酶最适pH为70—7.4,最适温度为30℃,最佳碳源为淀粉,最佳氮源为豆饼粉。N_2、Y_4、Z_(2-8)的果胶酶活分别为:913u,973u,927u,半纤维素酶活分别为:137u、140u、170u,纤维素酶活分别为0、3u、0,产酶高峰时间在72小时左右。 三个菌株混合发酵红麻皮、构皮等韧皮纤维,5天可成浆。打浆后做手抄片,红麻皮浆手抄片白度为40.5,裂断长为3529m。构皮浆手抄片白度为22.7,裂断长为2998m。

苏云金芽孢杆菌的分类及生物活性蛋白基因

本文综合叙述了苏云金芽孢杆菌鞭毛抗原血清亚种的分类、生理生化鉴定,伴孢晶体对无脊椎动物4个门中的生物以及节肢动物门中9个目昆虫的生物活性,生物活性蛋白及其编码这些蛋白基因原定位和分类等方面的新动态。

利用发光酶基因标记技术跟踪棉花根圈中的绿针假单胞菌PL9L

采用细菌转化和杂交的方法，成功地将全套发光酶基因标记系统Ｔｎ７ｌｕｘＣＤＡＢＥ引入绿针假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ）ＰＬ９，得到稳定的发光标记菌ＰＬ９Ｌ。采用发光菌落平板计数法和Ｘ射线胶片自显影法，通过盆栽试验和盒裁试验，研究了发光标记菌ＰＬ９Ｌ在棉花根圈的定殖动态和分布规律。盆栽试验结果表明，在灭菌土盆栽中，播种后６ｄ左右ＰＬ９Ｌ在棉花根圈的定殖水平达最高（３１×１０９ｃｆｕ／ｇ根土），播种后５６ｄ左右趋向稳定，ＰＬ９Ｌ数量为１７×１０２ｃｆｕ／ｇ根土；未灭菌土盆载中，播种后８ｄ左右ＰＬ９Ｌ的定殖水平达最高（１１×１０９ｃｆｕ／ｇ根土），４６ｄ左右趋向稳定，菌数为１４×１０２ｃｆｕ／ｇ根土。盒栽试验结果表明，ＰＬ９Ｌ可从种子向根尖方向扩散，但并不与根的伸长生长同步，播种后３６ｄ，灭菌土盒栽中ＰＬ９Ｌ可扩散至种子下方１２０ｃｍ以内，而未灭菌土盒栽中ＰＬ９Ｌ扩散至１１０ｃｍ以内。在棉花根尖区域均未检测到ＰＬ９Ｌ。

食物颗粒和非食物颗粒对苏云金杆菌以色列亚种生物活性的影响

以埃及伊蚊幼虫为材料 ,比较了食物和非食物颗粒对苏云金杆菌以色列亚种致病能力的影响 ,结果表明 :食物 (Pharmamedia)和非食物性颗粒 (活性炭及Carmin)皆能显著提高伊蚊幼虫对苏云金芽胞杆菌以色列亚种商品制剂的抵抗力 ,颗粒物的这种作用与其营养功能无关。

苏云金芽胞杆菌转座因子的转座机理及其与杀虫晶体蛋白基因的关系

各种苏云金芽胞杆菌在杀虫毒力和杀虫谱上有很大差异。研究表明，这种特异性的杀虫毒力与存在于苏云金芽胞杆菌内的转座因子有密切关系，不同类型的转座因子其转座方式各异，总的来说可分为３种，即同源重组、转座重组和特异位点重组。这种转座过程的发生往往伴随着苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的变异，这在基因工程菌的构建和杀虫多样性的研究上有着重要意义。

苏云金芽孢杆菌无晶体突变株的逐级升温筛选及其转化性能

逐级从４２ ℃到４４ ℃和４６ ℃升温培养、并用０－０５ ％ ＳＤＳ 处理苏云金芽孢杆菌ＹＢＴ１４６３ ，获得了一系列内生质粒被部分或完全消除的无晶体（Ｃｒｙ －） 突变株，对４ 种Ｃｒｙ － 突变株的转化性能及导入的外源质粒的稳定性进行了研究。用限量培养基和４２ ℃培养筛选到Ｃｒｙ － 突变株后，升温至４４ ℃，从Ｃｒｙ － 突变株得到内生质粒被进一步消除的突变株；然后升温至４６ ℃来培养其中突变株ＢＭＢ１７０ ，并用０－０５ ％ 的ＳＤＳ进行处理，最终筛选到１ 株无质粒突变株ＢＭＢ１７１ 。用ｐＨＴ３１０１ 、ｐＢＭＢ１７３６ 、ｐＢＴＬ１ 和ｐＨＶ１２４９ 等４ 种外源质粒进行的转化及稳定性研究表明，转化频率的大小及导入质粒的稳定性与用作受体菌的Ｃｒｙ － 突变株携有的内生质粒数之间呈现一定的相关性，Ｃｒｙ－ 突变株的转化频率显著高于出发菌株，其中ＢＭＢ１７１ 的转化频率最高达１０７ 转化子／μｇ ＤＮＡ，且所导入的外源质粒的稳定性也高于其它Ｃｒｙ － 突变株及出发菌株ＹＢＴ１４６３ 。

利用苏云金芽胞杆菌转座子Tn4430构建含cry1 Ac10基因的解离载体

将cry1Ac1 0基因和苏云金芽胞杆菌的复制起始区连接在一起 ,并在其两侧按相同方向各连接一个来自苏云金芽胞杆菌转座子Tn4430的解离位点 ,构成转移单位。再将革兰氏阳性细菌的抗性标记基因和大肠杆菌克隆载体 pUC1 9与之连接 ,获得含cry1Ac1 0基因的解离载体pBMB80 1。将其转化苏云金芽胞杆菌无晶体突变体 ,再导入含解离酶基因的辅助质粒 pBMB1 2 0 0。在解离酶作用下 ,两个解离位点间发生重组 ,消除基在操作中的抗性标记基因等非必需基因片段 ,获得仅保留有完整cry1Ac1 0基因和来自苏云金芽胞杆菌质粒复制起始区 ,在无抗生素选择压力下能稳定遗传的重组质粒pBMB80 1B。

影响库蚊幼虫摄食鱼腥藻的因素

在实验室条件下 ,致乏库蚊幼虫可大量摄食鱼腥藻 ,并能消化利用 ,完成生活史。鱼腥藻在蚊幼虫肠道中滞留时间约 6 h,酵母约 5 h,鱼腥藻比酵母稍难消化。对比幼虫孵化至化蛹周期 ,饲喂鱼腥藻为 1 94h,而饲喂酵母则为 1 42 h,饲喂鱼腥藻比饲喂酵母延缓了蚊幼虫期5 2 h。致乏库蚊幼虫摄食鱼腥藻的适宜条件为 :p H7— 8,温度 2 5— 3 0℃ ,藻液浓度愈高 ,摄食越多。随着蚊幼虫的生长 ,摄食量递增。

苏云金芽孢杆菌中华亚种CT-43菌株伴胞晶体蛋白的特性

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)为革兰氏阳性细菌,在其芽孢形成过程中可产生一种对鳞翅目、双翅目和鞘翅目幼虫有高毒力的蛋白质伴胞晶体,近来又发现它对动、植物寄生线虫以及扁形动物门的一些种类有毒,现已成为芽孢杆菌的第二大研究对象。

发酵韧皮纤维的厌氧细菌菌株筛选及制浆效果

利用亨氏厌氧技术从沤麻塘底泥等厌氧生境中分离筛选到Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属的Ｎ２、Ｙ４、Ｚ２－８３株厌氧细菌。研究结果表明，其产酶最适ｐＨ为７．０～７．４，最适温度为３０℃，最佳碳源为淀粉，最佳氮源为豆饼粉。Ｎ２、Ｙ４、Ｚ２－８的果胶酶活分别为９１３ｕ、９７３ｕ、９２７ｕ，半纤维素酶活分别为１３７ｕ、１４０ｕ、１７０ｕ，纤维素酶活分别为０ｕ、３ｕ、０ｕ，产酶高峰时间在７２ｈ左右。３个菌株混合发酵红麻皮、构皮等韧皮纤维，５ｄ可成浆。打浆后做手抄片，红麻皮浆手抄片白度为４０．５，裂断长为３５２９ｍ；构皮浆手抄片白度为２２．７，裂断长为２９９８ｍ。

从弗氏链霉菌中筛到的1株泰乐菌素产生菌

以泰乐菌素（Ｔｙｌｏｓｉｎ）标准品为对照，采用纸层析法对收集到的１１株弗氏链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｒａｄｉａｅ）的发酵滤液进行鉴别，发现其中０２８菌株的纸层析谱与标准品完全相同。进一步将该菌株经ＮＴＧ诱变后，筛选获得的１株突变株Ｈ１８８，进行摇瓶发酵。并从发酵滤液中分离、提取得到纯品。经紫外分光光度计和高效液相色谱检测表明，它与泰乐菌素标准品属同一物质。从而证明０２８菌株是１株泰乐菌素产生菌。

苏云金芽孢杆菌无质粒突变株BMB171的转化和表达性能

研究了苏云金芽孢杆菌无质粒突变株ＢＭＢ１７１的转化性能和表达ｃｒｙ１Ａｃ和ｃｒｙ１Ｃａ基因的性能．用ｐＨＴ３１０１、ｐＢＭＢ３０５、ｐＢＭＢ１７３６、ｐＢＭＢ６７１、ｐＢＴＬ１和ｐＨＶ１２４９等６种外源质粒电转化无质粒突变株ＢＭＢ１７１，其转化频率分别是Ｂｔ４Ｑ７、Ｂｔ４Ｄ１０和Ｂｔｉ．ＩＰＳ．７８／１１等３种常用受体菌相应最高转化频率的１０００、６．７、１２．５、６６．７、３５００和２倍，其每μｇＤＮＡ的最高转化子数达１０７．导入ＢＭＢ１７１的外源质粒的稳定性与其复制子类型和质粒大小有关．无质粒突变株ＢＭＢ１７１表达ｃｒｙ１Ａｃ基因的表达量高于对照受体菌Ｂｔ４Ｑ７，略低于Ｂｔ４Ｄ１０和Ｂｔｉ．ＩＰＳ．７８／１１，而ＢＭＢ１７１表达ｃｒｙ１Ｃａ基因的表达量高于这３种受体菌；对小菜蛾３龄幼虫和甜菜夜蛾初孵幼虫的毒力测定结果表明，ＢＭＢ１７１表达ｃｒｙ１Ａｃ基因的杀虫毒力高于Ｂｔ４Ｑ７和Ｂｔ４Ｄ１０，略低于Ｂｔｉ．ＩＰＳ．７８／１；

昆虫中肠液性质对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体毒力的影响

综述了昆虫中肠液性质对苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis伴孢晶体毒力的影响。中肠液的酸碱度和蛋白酶是影响伴孢晶体溶解与原毒素活化的两大因素。中肠液的酸碱度不仅影响到伴孢晶体的溶解速度 ,还影响到各种蛋白酶的活性表现 ;而蛋白酶则直接参与了原毒素的活化 ,其组成与活性影响着原毒素的活化速度和杀虫专一性。因中肠液蛋白水解能力过高而导致原毒素的过度降解是某些昆虫对苏云金芽孢杆菌低度敏感的主要原因 ,而中肠液对原毒素活化能力的降低则与昆虫抗性的形成有关。此外 ,中肠液的沉淀作用及其它生理生化特性也影响着原毒素毒力的正常发挥。

电脉冲法转化苏云金芽孢杆菌BMB171的研究

研究了用电脉冲法转化苏云金芽孢杆菌受体菌ＢＭＢ１７１的优化条件以及由转化导入的几类ｃｒｙ基因在ＢＭＢ１７１中的表达效果。结果表明，采用ＳＧ溶液作电脉冲缓冲液，用１０．ｏｋＶ／ｃｍ的脉冲场强和１次电脉冲（４．６ｍｓ）以及采用对数前期（ＯＤ６５０ｎｍ为０．２～０．３）收获的受体菌，可以达到最高转化频率，其中用ｐＨＴ３１０１电转化 ＢＭＢ１７１的最高频率达 ８×１０７转化子／μｇ ＤＮＡ。转化频率随质粒ｐＨＴ３１０１浓度的增加，在５４．６９ｐｇ／ｍＬ至３．５０μｇ／ｍＬ范围内直线性增加，随后达到饱和。转入的几种外源质粒在ＢＭＢ１７１中可分别表达其携带的ｃｒｙｌＡｃ１０，ｃｒｙｌＡｂ，ｃｒｙｌＣａ和ｃｒｙ３Ａａ基因，产生特征性的杀虫晶体蛋白，并形成典型的伴孢晶体。

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的结构与功能研究进展

苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)杀虫晶体蛋白的毒性肽由三个典型的结构域组成 .结构域Ⅰ位于肽链的N端 ,为一组由 6～ 7个两亲的α螺旋围绕着一个疏水的α螺旋形成的α螺旋束 ,参与了细胞膜的穿孔 ;结构域Ⅱ位于肽链的中间 ,为三组以“希腊钥匙” (Greekkey)拓扑结构连接在一起的反平行的 β折叠片层 ,其顶端的突环参与了毒素与受体蛋白的结合 ;位于C端的结构域Ⅲ是由两组反平行的 β折叠片层组成的夹心结构 ,以 β果酱卷 (jellyroll)拓扑结构排列 。

用血清学方法测定苏云金芽孢杆菌晶体蛋白含量

用苏云金芽孢杆菌ＨＤ－１、７２１６和ＣＴ－４３菌株晶体蛋白的碱溶和胰蛋白酶酶解产物作抗原，制备相应的抗血清。用环状沉淀反应、双相单扩散反应和火箭免疫电泳等技术测定了苏云金杆菌几个菌株和制剂的晶体蛋白的含量。用环状沉淀反应测定晶体蛋白的最低量为０．２２μｇ／ｍＬ，火箭免疫电泳为１５μｇ／ｍＬ，双相单扩散反应为６２μｇ／ｍＬ。生物测定的结果与几种血清学方法测定的结果有一定的相关性，菌株ＨＤ－１、７２１６和ＣＴ－４３的伴胞晶体经碱溶和胰蛋白酶处理后对小菜蛾幼虫的ＬＣ５０值分别为０．１４８、０．２４７和０．０９７μｇ／ｍＬ；经碱溶而未经胰蛋白酶处理的晶体蛋白对小菜蛾幼虫的ＬＣ５０值分别为１．８６７、３．１４７和１．０２２μｇ／ｍＬ，两种处理方法对晶体蛋白毒力影响很大。环状沉淀反应测定苏云金芽孢杆菌晶体蛋白含量灵敏度比火箭免疫电泳高，操作简便而快速；双相单扩散法灵敏度与火箭免疫电泳接近。

苏云金芽孢杆菌防治鞘翅目害虫的研究进展

本文综述了国内外有关防治鞘翅目害虫的苏云金芽孢杆菌菌株、杀虫晶体蛋白及作用方式、生物测定以及制剂和应用等方面的研究进展。

紫云英根瘤菌天然抗药性和质粒研究

从同一稻田的紫云英根瘤上共分离到１５４株紫云英根瘤菌。将来自该田块１０株紫云英的１００株根瘤菌列为分析组Ａ；来自同一植株不同根瘤的４０株根瘤菌列为分析组Ｂ；来自植株两个根瘤的１４株根瘤菌列为分析组Ｃ。对所有菌株１０种抗生素的抗药性测定表明，分析组Ａ分为３９个不同抗药类群；分析组Ｂ分为２２个抗药类群。同一根瘤的分离株其抗药性也存在差异。质粒检测显示所有菌株都含有质粒，质粒数为１～５条；质粒分子量主要在８３ＭＤ至６００ＭＤ。质粒图谱分析表明，分析组Ａ分为８个质粒型，分析组Ｂ分为６个质粒型，同一根瘤分离株的质粒数并不完全一致。在所有分离株中，第２质粒型的菌株为优势菌群。

苏云金芽胞杆菌CT－43的芽胞萌发及芽胞和伴胞晶体的形成

在电镜下观察了苏云金芽胞杆菌菌株ＣＴ－４３的芽胞萌发、芽胞和伴胞晶体的形成过程。芽胞萌发分活化、萌动和脱出３个阶段。芽胞形成分为轴丝形成、前芽胞隔膜形成、前芽胞形成、初生细胞壁形成、芽胞外套形成、芽胞衣片层形成和芽胞形成７个阶段。伴胞晶体形成从芽胞形成第２阶段开始，由一些小结晶聚集而成。晶体镶嵌在菌株ＣＴ－４３中很普遍。结合实验对伴胞晶体形成的调控和外膜的形成等进行了讨论。