苏云金芽胞杆菌cry1A启动子上游区缺失体的研究

利用PCR方法 ,设计相应的扩增引物 ,以pHT/ 2 72up -pSGMU质粒DNA为模板 ,扩增得到缺失相应序列的上游片段 ,然后将其连接到pHT -pSGMU穿梭载体的BtI启动子前 ,再将这些缺失部分cry1A上游区的重组质粒转入苏云金杆菌中 ,观察它们对BtI -lacZ融合基因表达的影响。结果表明 ,缺失反向重复区 ,保留弯曲区 (PCRA) ,对BtI-lacZ融合基因在库斯塔克亚种菌株 80 - 2 1中的表达与完整上游区的增强作用相一致 ,而在鲇泽亚种中 ,BtI -lacZ基因表达量明显比未缺失体低。这一结果也证明cry1A上游弯曲区在转录调控上的重要作用。

苏云金芽孢杆菌的特异性结合蛋白研究

用3 2 P分别标记 3 0 8bpcry1A上游和 65 0bpcry1C上游片段 ,并将标记后的DNA与不同苏云金芽孢杆菌菌株的细胞粗蛋白进行凝胶阻滞反应。结果表明 ,cry1A和cry1C上游均能被苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种 (Bacillusthuringinensis subsp .kurstaki)的细胞粗蛋白特异性结合 ,而同一cry1基因上游序列可被不同多肽特异或非特异性竞争结合 ,不同的cry1基因上游序列也能同时被一种蛋白结合。说明苏云金芽孢杆菌某些特异细胞蛋白参与了cry1基因上游序列的转录调控作用 ,而不同的调节因子可能会竞争同一结合位点。库斯塔克亚种和鲇泽亚种 (B .thuringinensis subsp .aizawai)所含特异细胞蛋白在种类和作用上都有差异。