不同修复方式下养殖池塘底质营养物质的迁移特征

自2013年12月8日起至2014年5月5日,以养殖池塘污染沉积物为研究对象,采用室内模拟法研究了种青、暴晒、投放生石灰等方法修复淡水养殖池塘沉积物的效果。结果表明,在池塘沉积物修复期,种青组沉积物中总氮和总磷的含量、碱性磷酸酶的活性、烧失量均显著低于对照组(P<0.01);生石灰组沉积物中烧失量显著低于对照组(P<0.01)。覆水处理后,种青组水体中正磷酸盐、叶绿素a含量显著高于对照组(P<0.01),种青组水体总磷含量低于对照组(P<0.05);暴晒组水体中正磷酸盐、总磷含量低于对照组(P<0.05);生石灰组水体中各项指标均无明显差异。分析结果表明,种青、暴晒、投放生石灰降低了养殖池塘底泥中营养物质的含量,其中种青组沉积物中总磷的含量降低显著,覆水后水体中总磷的含量也有明显降低,以种青组的综合修复效果最佳。

架设生物浮床对池塘养殖鱼类生长和肌肉品质特性的影响

选择草鱼主养池塘为研究池塘,分析架设生物浮床的池塘中草鱼(Ctenopharyngodon idellus)和团头鲂(Megalobrama amblycephala)的生长和肌肉品质特性。池塘养殖试验时间为180d,试验期间测定草鱼和团头鲂生长指标,并利用生化分析和物性分析方法测定肌肉营养成分、系水力和质构特性。试验结果表明:试验池塘的草鱼和团头鲂的终末体质量高于对照池塘的养殖鱼类;试验池塘2种鱼的肥满度都显著高于对照池塘;试验池塘和对照池塘空壳体质量比没有显著差异。试验池塘草鱼和团头鲂的肌肉滴水损失和失水率均显著低于对照池塘,而熟肉率显著高于对照池塘。试验池塘的鱼类肌肉粗蛋白显著高于对照池塘;粗脂肪含量都高于对照池塘,在草鱼中差异显著,团头鲂差异不显著;试验池塘草鱼水分显著低于对照池塘,团头鲂水分和2种鱼灰分都没有显著差异。肌肉的质构特性分析表明,试验池塘草鱼的硬度、胶黏性、咀嚼性显著高于对照池塘;试验池塘草鱼回复性和凝聚性显著低于对照池塘,试验池塘团头鲂肌肉弹性显著高于对照池塘。

草鱼钠磷协同转运载体SlC34a2基因的克隆及组织表达分析

为了揭示草鱼对磷的吸收机制,运用RT-PCR和快速扩增c DNA末端方法,从草鱼(Ctenopharyngodon idella)肠中克隆获得钠磷协同转运载体基因Slc34a2,该基因全长为2446 bp,包含了1938 bp的开放阅读框,47 bp的5′非编码区(Untranslated region,UTR)和461 bp的3′UTR,编码645个氨基酸。草鱼SLC34A2蛋白的分子式为C3215H5125N801O902S30,分子量大小为70.39 k D,等电点为5.68,总平均疏水指数为0.458。对草鱼SLC34A2蛋白结构和功能预测分析,发现SLC34A2蛋白有11个跨膜域,1个半胱氨酸富集区,且N-端在胞外而C-端在胞内,也在第二个细胞外环中发现4个N-糖基化位点。用邻接法构建系统进化树,发现草鱼Slc34a2基因与硬骨鱼类聚类为一支,且草鱼SLC34A2蛋白与鲤(Cyprinus carpio)和斑马鱼(Danio rerio)SLC34A2的相似性最高,分别为90.3%和87.0%。实验采用了实时荧光定量PCR对草鱼Slc34a2 m RNA进行组织表达分析,结果表明Slc34a2 m RNA在组织中广谱表达,且在肠中表达最高,其次是肝脏、鳃、肾脏、脾脏、皮肤、肌肉、脑和头肾。实验为以后研究提高鱼对磷的利用和减少磷的排放奠定分子基础。

饲料锌对团头鲂幼鱼生长性能、血清生化指标和抗氧化功能的影响

以酪蛋白和明胶为蛋白源,七水硫酸锌（Zn SO4·7H2O）为Zn源,分别配制成7种Zn含量（7.4 mg/kg、20.3 mg/kg、32.1 mg/kg、51.0 mg/kg、84.4 mg/kg、169.7 mg/kg、332.4 mg/kg）的半纯化饲料,投喂初始体重为（3.6±0.1）g团头鲂（Megalobrama amblycephala）12周,考察Zn对团头鲂幼鱼生长性能、血清生化指标和抗氧化功能的影响,确定团头鲂幼鱼对饲料Zn的需要量。结果表明,随着饲料Zn含量增加,团头鲂增重率、特定生长率和全鱼Zn含量呈先增加后稳定的趋势;全鱼水分含量显著降低（P〈0.05）,粗蛋白含量显著增加。饲料Zn含量对团头鲂饲料系数无显著影响。饲料中添加Zn显著影响血清总蛋白、尿素氮、高密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇以及甘油三酯含量,而对血清白蛋白含量和碱性磷酸酶活性无显著影响。随着饲料中Zn含量的增加,团头鲂肝丙二醛含量显著降低（P〈0.05）,而肝过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性在各处理间均无显著差异。折线回归分析表明,团头鲂幼鱼（体重3.6~26.7 g）获得最佳生长时对饲料Zn需要量为32.6 mg/kg,获得最大鱼体Zn含量时Zn的需要量为47.6 mg/kg。本研究旨在确定团头鲂幼鱼对饲料中Zn的需要量,为配制团头鲂高效环保饲料提供科学依据。

复方中草药添加剂对施氏鲟肌肉营养成分及品质的影响

为了解饲料中添加复方中草药对施氏鲟肌肉营养成分和品质特性的影响,按照7∶5∶4∶4的质量比例将茯苓、白芍、鱼腥草及大黄进行复方制备,在饲料中添加3种不同含量比例(0.5%、1%和2%)的复方中草药,对体质量为(137.61±22.26)g的施氏鲟进行8周的养殖试验。试验设1个对照组(0%添加量)和3个添加组(0.5%组、1%组、2%组)。利用生化分析、物性分析方法对施氏鲟肌肉的常规营养成分、氨基酸、脂肪酸以及质构特性进行测定。结果显示,0.5%和1%组的肌肉粗灰分含量显著高于2%组和对照组,0.5%组的肌肉粗蛋白含量显著高于对照组和其他添加组。氨基酸总量和必需氨基酸总量在4组间没有显著性差异,但0.5%组的鲜味氨基酸总量显著高于对照组,其中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸含量都显著高于对照组,0.5%组天冬氨酸含量还显著高于1%和2%组。除了十七碳一烯酸在添加组中的含量略有下降外,其他脂肪酸在中草药添加组中的含量都要高于对照组。0.5%和1%的添加组可显著增加施氏鲟肌肉中大部分脂肪酸的含量,但2%添加量对施氏鲟肌肉中各脂肪酸含量并无显著影响。添加组的肌肉粘聚性显著高于对照组,2%组的肌肉咀嚼性显著低于对照组;而添加组和对照组在肌肉硬度、黏着性、弹性和回复性上均没有显著性差异。研究表明,适量的复方中草药能增加肌肉粗蛋白的含量,提升部分鲜味氨基酸和脂肪酸的含量,起到增加肌肉风味、改善肌肉品质的作用。

1龄黄颡鱼的肌肉营养成分及品质特性分析

黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)属硬骨鱼纲(Osteichthyes)、鲇形目(Siluriformes)、鲿科(Bagridae)、黄颡鱼属(Pelteobagrus),广泛分布于我国各大水系,是一种小型经济鱼类。黄颡鱼因其肉质细嫩、口味鲜美,受到广大消费者的青睐。近些年来,黄颡鱼已成为一种重要的名优养殖品种。但是在人工养殖的过程中,很多养殖鱼类的肌肉品质受到了一定的影响[1,2]。如何提高养殖鱼类肌肉品质已经成为水产养殖业的重要研究课题。

黄颡鱼甘露糖受体基因的克隆和功能分析

甘露糖受体(MR)隶属凝集素超家族,主要表达于巨噬细胞和未成熟的树突状细胞表面。MR不仅在先天免疫防御中发挥重要作用,还通过参与抗原呈递,激活T淋巴细胞,启动获得性免疫应答过程。本研究采用同源克隆技术获得黄颡鱼甘露糖受体(pf MR)基因,采用荧光定量PCR技术检测MR在正常黄颡鱼体内的分布情况,采用鲖爱德华菌感染黄颡鱼头肾巨噬细胞和甘露聚糖封闭MR方法研究黄颡鱼MR在抗细菌感染中的作用。结果显示,pf MR同团头鲂、草鱼、斑马鱼和尼罗罗非鱼的MR聚为一支。pf MR在所检测的12个组织中均有分布,其在肾脏、脾脏和肌肉组织中表达量较高,在血液中表达量较少。鲖爱德华菌感染黄颡鱼头肾巨噬细胞后,pf MR、IL-1β和TNF-a均被细菌诱导表达,超氧阴离子和一氧化氮的含量也上升,超氧阴离子在感染30 min后即显著上升,一氧化氮在感染12 h后才显著上升。甘露聚糖竞争结合MR,显著抑制巨噬细胞内化GFP标签的鲖爱德华菌,加入EDTA减少内化的荧光强度,加入Ca^(2+)使内化的荧光强度回升。研究表明,黄颡鱼头肾巨噬细胞MR参与鲖爱德华菌的识别和内吞过程,而且依赖Ca^(2+)。

感染累枝虫对黄颡鱼血液生化指标的影响

为探究感染累枝虫(Epistylis sp.)的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)病愈过程中血液生化指标的变化规律,测定了患病鱼和经药物治疗痊愈及健康的黄颡鱼的血清皮质醇、葡萄糖、乳酸(LD)含量以及碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的活性。结果显示,患病组黄颡鱼血清皮质醇、血糖含量和AST活性均显著高于痊愈组(P<0.05),血清ALT活性与痊愈组无显著差异(P>0.05)。与患病组相比,痊愈组黄颡鱼血清LD含量,LDH和ALP活性均显著升高(P<0.05)。与健康组相比,痊愈黄颡鱼血清皮质醇含量和ALT活性无显著差异(P>0.05),而葡萄糖、LD含量,LDH、AKP和AST活性则差异显著(P<0.05)。结果表明,累枝虫的寄生引起了黄颡鱼显著的应激反应,使鱼体非特异性免疫能力下降;经治疗痊愈后的黄颡鱼的非特异性免疫力可恢复正常,鱼体应激反应消失并表现出正常的游泳行为。

鳜亲环蛋白A在传染性脾肾坏死病毒增殖中的作用

为研究鳜亲环蛋白(CypA)在传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)感染中的作用,通过RT-PCR克隆了CypA全长开放读码框(SC-CypA)。结果表明SC-CypA基因全长495 bp,编码164个氨基酸,分子量为17.59 ku。通过Blast比对和同源性进化分析,发现其与人、鼠、原鸡和斑点鲖等物种的CypA具有高度相似性,表明SC-CypA属于CypA家族的成员。环孢素A(CsA)具有免疫抑制作用,是CypA的抑制剂。结果发现,CsA浓度与ISKNV增殖具有一定的剂量依赖关系;CsA作用不同时间对ISKNV均有抑制效果;CsA对ISKNV感染诱导的细胞因子的表达具有调节作用,能抑制IL-1β、IL-8、IL-18和ISG15的表达。研究表明,宿主的CypA对ISKNV的增殖起着重要的作用,通过添加其抑制剂CsA能有效抑制病毒的增殖。

不同保存方式对吴李碘泡虫孢子形态的影响

研究了4种保存方式(5%甲醛、10%甲醛、95%乙醇、-20℃冷冻)对吴李碘泡虫孢子形态的影响进行研究,结果表明,5%甲醛保存7d后孢子各指标与新鲜孢子相比无显著性差异,但保存30d后孢子部分指标显著小于新鲜孢子,说明5%甲醛可以用于短暂(7d以内)保存吴李碘泡虫孢子。其他3种保存方式保存7d和30d均导致孢子形态学指标与新鲜样品存在显著性差异。保存过程中,孢子各形态指标的变化率不同,说明保存时孢子发生不规则变形。保存相同时间,95%乙醇对孢子各形态指标影响最大,其次依次为-20℃冷冻、10%甲醛、5%甲醛。随着保存时间的延长,除10%甲醛保存孢子总体变化率增大外,其他3种保存方式保存孢子总体变化率均减小,说明延长保存时间吴李碘泡虫孢子并非一直收缩。

斑鳜水库网箱人工繁育与胚胎发育

充分利用水库资源及网箱优势,结合斑鳜繁育生物学特性,在水库网箱上成功批量繁育斑鳜鱼苗,为斑鳜人工繁育开辟一条新途径。2012年5月~2013年7月在辽宁省宽甸县景波水产品养殖场共进行了6批次繁育试验,共计催产亲鱼146组,平均催产率84%,获卵320万粒,平均受精率65%,平均孵化率80%,获水花鱼苗180万尾,利用水库网箱孵化鲤鱼苗配套提供饵料,繁殖了鲤水花11亿尾,共培育斑鳜夏花鱼苗40万尾(平均全长3.1cm),平均2750尾鲤鱼苗培育一尾斑鳜苗,培育前3d斑鳜全长日增长0.54mm,3d后全长日增长约1mm。水温19℃~22℃,显微摄影观察斑鳜胚胎发育时序和特点,受精卵140h7min破膜,胚胎发育划分为6个阶段25时期,提出在斑鳜产卵后配套饵料鱼亲鱼注射催产时间公式:t=t1-t2-t3;(t1:斑鳜胚胎发育时间;t2:饵料鱼胚胎发育时间;t3:饵料鱼亲鱼效应时间)。

人工饵料对主养黄颡鱼和主养草鱼池塘沉降颗粒有机质贡献的同位素示踪

研究假定池塘中沉降颗粒有机质主要来自残饵、粪便和悬浮颗粒物三种的混合,利用碳氮稳定性同位素示踪技术对主养草鱼(Ctenopharyngodon idellus)和主养黄颡鱼(Pelteobaggrus fulvidraco)池塘沉降颗粒中人为有机质(残饵)来源进行定量研究,同时分析了不同主养模式池塘沉降颗粒中碳氮营养物质的变化特征。结果表明:两种主养模式池塘沉降颗粒中总氮(Total nitrogen,TN)、总碳(Total carbon,TC)、总有机碳(Total organic carbon,TOC)以及总有机氮(Total organic nitrogen,TON)都呈现出从养殖初期到末期逐渐降低的趋势;并且主养黄颡鱼池塘颗粒沉降物中TN、TC、TON和TOC含量均显著高于主养草鱼池塘。主养黄颡鱼池塘沉降颗粒有机质碳氮稳定性同位素(δ13C和δ15N)平均值分别为–25.3‰和6.2‰;主养草鱼池塘沉降颗粒有机质δ13C和δ15N的平均值分别为–25.4‰和5.9‰。利用同位素混合模型计算出两种主养模式池塘沉降颗粒中人为有机质(残饵)贡献率分别为15.6%—35.4%(主养黄颡鱼池塘)和30.1%—70.1%(主养草鱼池塘),统计分析结果表明,两种主养模式池塘从养殖初期到末期沉降颗粒中饵料贡献率均显著降低(主养黄颡鱼池塘:r=–0.537,P<0.05;主养草鱼池塘:r=–0.800,P<0.01)。

3种壳聚糖对团头鲂体外头肾吞噬细胞呼吸爆发功能的影响

采用51%Percoll非连续密度梯度离心法分离团头鲂头肾吞噬细胞,在光镜和电镜下观察所分离细胞的显微、超微结构及吞噬作用;以二氢罗丹明(DHR123)为荧光探针,流式细胞仪检测细胞在佛波豆蔻酸乙酯(PMA)刺激下产生的呼吸爆发活动;光镜下观察壳聚糖对吞噬细胞吞噬功能的影响。结果表明:分离得到的细胞具有吞噬细胞(巨噬细胞与中性粒细胞)的形态学及功能特征;3种壳聚糖组(100μg/mL)均能提高吞噬细胞的呼吸爆发功能,在发荧光细胞比例及细胞发荧光强度上均极显著高于对照组。其中水溶性壳聚糖组的发荧光细胞比例显著高于其他试验组,而在细胞发荧光强度上,普通壳聚糖作用相对较高;同时壳寡糖能增强吞噬细胞的吞噬活性。

鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2) ORF25蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备

利用PCR方法扩增鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)ORF25基因的部分基因序列,并将扩增产物连接到原核表达载体pGEX-KG,成功构建了CyHV-2-ORF25-KG重组质粒。IPTG将其诱导后,SDS-PAGE分析表明:目的蛋白得到表达,分子质量大小为42ku,且主要以包涵体形式存在;用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,多次免疫后通过细胞融合,筛选出1株单抗5C6;经间接免疫荧光试验和Western blot试验验证,这株单抗可以识别CyHV-2ORF25蛋白。

黄鳝WT1基因序列分析及在性腺发育过程中的表达

采用RT-PCR法从黄鳝(Monopterus albus)性腺mRNA中克隆获得了WT1基因,根据其氨基酸序列有无KTS区将黄鳝WT1基因分为2种类型:WT1(-KTS)为1 236bp,WT1(+KTS)为1 245bp。与NCBI/GenBank上其他物种进行氨基酸序列比对,发现它们与斜带石斑鱼的WT1a相似性最高,分别为93.2%和93.0%,并且它们均在羧基端具有相似性很高的锌指结构区域。系统进化树分析发现,黄鳝WT1基因与斜带石斑鱼WT1a聚类为一支。WT1基因在黄鳝性腺、肾、肠、脾和心脏组织中都有表达,且该基因在黄鳝雌性、间性和雄性性腺中的表达量在各时期都有先升高后降低的表达趋势。

黄颡鱼MHC classⅡ基因全长的克隆及饲料维生素D3对其组织表达的影响

为进一步丰富鱼类MHC class Ⅱ基因的研究,同时也为进一步探讨低磷饲料中添加维生素D3对鱼类免疫功能可能的影响,实验利用RACE(Rapid-amplification of c DNA ends)即c DNA末端快速扩增技术,成功克隆出黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)class Ⅱ抗原基因,全长1074 bp,其中ORF(Open reading frame)708 bp,编码236个氨基酸,5′UTR(5′端非翻译区)78 bp,3′UTR(3′端非翻译区)259 bp。进行氨基酸序列比对分析得到:黄颡鱼MHC class Ⅱ基因ORF氨基酸序列与长吻逘(Leiocassis longirostris)的氨基酸序列相似度最高为69.5%,与锦鲤(Cyprinus carpio)的氨基酸序列相似度最低为50.4%。利用q PCR对黄颡鱼MHC class Ⅱ基因进行组织表达分析,结果表明MHC class Ⅱ在小肠、肝脏、鳃中表达较高;在肌肉、鳍条中表达较低;而在肾、脾脏、脑、头肾中表达量极低(几乎检测不到)。在低磷饲料中添加维生素D3显著诱导了该基因的上调表达。研究结果展示了黄颡鱼MHC class Ⅱ抗原基因的分子结构、组织表达以及维生素D3的作用,在降低磷排放的同时,为今后黄颡鱼免疫抗病及分子选育等方向的深入研究及免疫型饲料的使用奠定了基础。

嗜水气单胞菌气溶素的原核表达及其多克隆抗血清的制备

根据GenBank中致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)气溶素(aerolysin,Aer)基因的序列设计引物,以来自湖北的鱼源A.hydrophila分离株为模板扩增出aer基因的ORF序列,克隆到pMD18-T载体上进行序列测定。测序结果表明,A.hydrophila的aer基因的系统进化树中国内菌株聚为一支,国外菌株聚为一支。通过pET-32a(+)载体构建Ah15株aer基因的表达载体pET32a-15,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行诱导表达,通过SDS-PAGE分析,显示与预期大小约72.2ku相吻合的融合蛋白带,且以包涵体形式存在。浓缩后的包涵体蛋白免疫新西兰大白兔获得了重组蛋白的抗血清,Western blot结果显示,兔抗血清可以识别A.hydrophila的重组毒素,说明该基因的重组蛋白具有很好的免疫原性,可作为A.hydrophila基因工程疫苗研制的候选基因。

黄颡鱼幼鱼植物性蛋白饲料中添加柠檬酸替代磷酸二氢钠合适水平的研究

本实验探究黄颡鱼幼鱼植物性蛋白基础饲料中添加柠檬酸替代磷酸二氢钠的合适水平。共设置7个处理组：阳性对照组DP（只添加Na H2PO420 g/kg）和阴性对照组DN（不添加柠檬酸和Na H2PO4）;实验组D0（柠檬酸2 g/kg＋Na H2PO420 g/kg）、D25（柠檬酸2 g/kg＋Na H2PO415 g/kg）、D50（柠檬酸2 g/kg＋Na H2PO410 g/kg）、D75（柠檬酸2 g/kg＋Na H2PO45 g/kg）、D100（柠檬酸2 g/kg）。实验组中柠檬酸替代Na H2PO4的比例分别为0%、25%、50%、75%和100%,分别饲养初始规格为（3.5±0.1）g的黄颡鱼,每个处理组3口缸,每缸50尾,投喂8周。实验结束后,对鱼体生长性能、营养物质的表观消化率、全鱼营养成分、脊椎骨元素含量、抗氧化性能等指标进行分析。结果显示：（1）饲料中添加柠檬酸替代磷酸二氢钠实验组与阴性对照组相比,显著提高了黄颡鱼的末体质量、增重率、特定生长率,降低了饵料系数,但与阳性对照组相比差异不显著。替代比例为0%~50%时,生长表现最好;（2）实验组中柠檬酸替代磷酸二氢钠与阴性对照组相比,显著提高了干物质、蛋白质以及磷的表观消化率,降低了粪便N和P的含量,与阳性对照组相比差异不显著,且替代比例越高,粪便中N和P含量越低;（3）实验组中添加柠檬酸替代磷酸二氢钠对全鱼水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分含量无影响（P〉0.05）;但与阴性对照组相比显著提高鱼体Ca、M g、P、Cu的储积量（P〈0.05）,且随着替代水平的增加呈降低趋势,在0%~75%替代水平储积量最高;脊椎骨各元素含量与阴性对照组相比有所提高,但在替代组与对照组间无显著性差异;（4）柠檬酸替代无机磷在25%~75%水平与阴性对照组相比,显著增强了过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶的活性,但对丙二醛、免疫球蛋白M、血磷和血钙的含量无影响。综上所述,为保证鱼体正常生长,减少养殖环境污染,降低饲料成本,在当前基础配方下,黄颡鱼饲料中添加柠檬酸替代磷酸二氢钠的水平可为25%~50%。

急性热应激对草鱼肾细胞的影响

将草鱼肾细胞(CIK)在28℃条件下培养24h后,分别置于28(对照)、32、36和40℃的条件下暴露2h,测定不同温度处理组的细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞周期的改变、细胞内多泛素化蛋白水平以及caspase-3和bcl-2的表达变化;置于28(对照)、32、36和40℃的条件下暴露12h,测定不同温度处理组的细胞活力。试验结果表明,热应激引起细胞活力显著下降,导致CIK细胞的LDH漏出率显著上升,多泛素化蛋白表达量显著增加,bcl-2的表达量显著下调和caspase-3的表达量显著上调,G0/G1期细胞显著减少。急性热应激可能会引起CIK的细胞膜通透性和蛋白质表达量的变化,从而诱导细胞启动凋亡。

蜡质标本制作与保存对沉水植物稳定同位素的影响

实验通过模拟传统方法制作和保存蜡质标本,旨在探究制作和保存的不同阶段对3种沉水植物碳、氮稳定同位素值的影响。结果表明,制作和保存标本的过程均会对沉水植物的碳、氮稳定同位素值产生影响。植物标本压制的过程显著降低了沉水植物平均碳稳定同位素值,其中马来眼子菜下降了1.78‰,穗花狐尾藻下降了0.98‰,金鱼藻下降了0.72‰。在压制过程中氮稳定同位素值只有金鱼藻显著下降了1.1‰。沉水植物标本制作的浸泡过程使穗花狐尾藻和马来眼子菜的碳稳定同位素值分别出现了1.00‰和0.52‰的上升,金鱼藻的碳稳定同位素值增长小于0.08‰,氮稳定同位素值没有显著变化。沉水植物对标本制作和保存的过程响应存在种间差异。在制作和保存过程中对植物碳稳定同位素产生的影响大于氮稳定同位素值。因此建议,如果所研究对象的稳定同位素生态学差异小于3‰,蜡质标本的样品需要进行实验校准,不然会对结果产生影响。