苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因的克隆及表达分析

选择本实验室分离的苏云金芽胞杆菌李氏亚种 (subsp .Leesis)菌株YBT 833、鲇泽亚种 (subsp .Aizawai)菌株YBT 1416和库斯塔克亚种 (subsp .Kurstaki)菌株YBT 15 35为出发菌株 ,以营养期杀虫蛋白基因PCR扩增的特异片段为探针 ,进行总DNA酶切片段的Southern杂交定位。结果显示 3株菌株的营养期杀虫蛋白基因 ,均位于经XbaI完全消化的 4～ 5kb大小的DNA片段上。将该区域DNA片段回收后克隆到pUC19载体 ,建立了 3个较基因组文库小的亚基因组文库。通过菌落原位杂交筛选和酶切鉴定分别得到 3个相应的营养期杀虫蛋白基因vip83、vip14和vip15 ,并对其测序。DNA序列比较发现基因vip83与已知营养期杀虫蛋白基因存在 5个差异碱基。将vip83、vip14基因亚克隆到苏云金芽胞杆菌 大肠杆菌穿梭载体pHT315 ,分别得到重组质粒pBMB890 1和pBMB890 2。将它们电转化到vip- 的B .t.受体菌BMB171和 4Q7,获得了相应的工程菌BMB890 1 171,BMB890 2 171,BMB890 1 4Q7和BMB890 2 4Q7。SDS PAGE电泳检测均有 88kD大小的蛋白表达。生物测定结果亦表明了 ,营养期杀虫蛋白Vip83和Vip14对鳞翅目棉铃虫、小菜蛾和甜菜夜蛾的三龄幼虫均有一定的杀虫活性 ;其中对小菜蛾的毒力最高 ,LC50 值分别为 2 8.6 ,31.6 ,45 .4和 37.6 μL mL。该结?

类似S-层蛋白的苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白基因的克隆

芽胞杆菌CTC菌株被鉴定为苏云金芽胞杆菌 ,鞭毛血清型H2 ,幕虫亚种 ;产生卵圆形伴胞晶体 ,伴胞晶体蛋白为 1 0 0kD ;测定了该蛋白的N 末端序列 ,该序列与炭疽芽胞杆菌的细胞表面S 层蛋白具 92 %～ 93%相似性 ;根据Southern杂交制作了该晶体蛋白基因ctc所在位置的限制性酶切图谱 ,分别克隆了该基因 5′和 3′端所在的 2 9kbXbaI片段和 3 1kbClaIDNA片段 ,彼此间具 0 6kb重叠 ,通过拼接获得含完整ctc基因的克隆。含该基因的大肠杆菌与表达S 层蛋白的大肠杆菌具相似生长特征。初步表明CTC菌株的伴胞晶体由细胞表面S 层蛋白组成。苏云金芽胞杆菌区别于蜡状芽胞杆菌和炭疽芽胞杆菌的唯一标准是能形成伴胞晶体 ,由于S 层是细胞表面的结构成分 。

对水稻有促生作用的紫云英根瘤菌筛选初报

通过无菌砂土管培养试验 ,从 2 30株紫云英根瘤菌中筛选出 9个对水稻“汕优 6 3”有一定促生作用的菌株。采用上述菌株及本室先期分离的高效固氮紫云英根瘤菌 JS5 A16在无菌土杯栽条件下接种水稻 ,发现 JS3A18- 3、JX1A10 - 1、ZJ11A6 - 2、HN6 A4 - 1、HN10 A8- 1、S14的促生作用均很显著。但在有菌土盆栽试验条件下 ,只有 HN10 A8- 1、JX1A10 - 1两个菌株对“汕优 6 3”的分蘖及植株鲜重、根鲜重等方面表现出明显的促进作用。

苏云金芽胞杆菌拟步行甲亚种质粒复制子ori165的克隆

以苏云金芽胞杆菌拟步行甲亚种菌株 (Bacillusthuringiensissubsp.tenebrionis)YBT 1 76 5作为出发菌株 ,克隆了一个包含复制子的EcoRI酶切片段 ,大小约为 1 1kb ,称为ori1 6 5。这是国内外从此亚种中克隆到的第一个复制子。缩小到 8kb左右后仍然能够复制。杂交结果显示 ,此复制子来源于菌株YBT 1 76 5可以检测到的分子量最大的质粒。以此复制子构建的穿梭载体pBMB6 0 71在不同受体菌中的稳定性差异很大 ,其中在以色列亚种无晶体突变株 4Q7中 ,传 40后代 ,稳定性 1 0 0 %。质粒pBMB6 0 71与含ori1 0 3 0和ori2 0 6 2在库斯塔克亚种无晶体突变株BMB1

苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白可以形成伴胞晶体

苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)CTC菌株产生卵圆形伴胞晶体 ,晶体蛋白分子量为 1 0 0kD ;透射电子显微镜观察结果表明该菌株有S 层结构 ,而且在母细胞内可以形成伴胞晶体和S 层的初体结构 ;其蛋白基因导入苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB1 71后 ,扫描电子显微镜观察结果表明转化子能形成晶体 ,而其形状与CTC菌株的相同 ;转化子晶体蛋白的分子量大小也与CTC菌株的相同 ,为 1 0 0kD。以上实验结果结合以前晶体蛋白N 末端测序和基因核苷酸序列 ,表明苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S

苏云金芽胞杆菌YBT-1520杀虫晶体蛋白基因的属性

通过Southern杂交发现高毒力苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)YBT 1 52 0菌株含有两个杀虫晶体蛋白基因片段 ,其 5’ 末端所在HindⅢ片段分别为 6 8kb和 4 6kb ,它们对应的基因分别命名为cry2 1 8和cry4 6。经PCR鉴定 ,该菌含有cry1Aa、cry1Ab和cry1Ac基因 ,以及cry2基因 ,其中cry2 1 8属于cry1Ac。分析了cry2 1 8基因 41 90bp的核苷酸序列 ,在杀虫晶体蛋白基因分类系统中被命名为cry1Ac1 0。结合Southern杂交和PCR结果可判断 3个cry1A基因的拷贝数不同 ,其中cry1Ac拷贝数最高 ,YBT 1 52 0菌株与其它库斯塔克亚种的杀虫晶体蛋白基因所在限制性内切酶位置明显不同。

转化cry3A基因对苏云金芽孢杆菌YBT-803-1生长特性的影响

将携带基因cry3A的质粒通过电脉冲法转入苏云金芽孢杆菌野生菌株YBT 80 3 1后 ,对该菌的生长产生了一定的影响。结果表明 ,转入cry3A基因后 ,转化子BMBY 0 0 3的生长速度与出发菌株YBT 80 3 1相比虽无明显变化 ,但产生杀虫晶体蛋白的时间较出发菌株延迟 6～ 8h ,且最适温度提高为 33℃ ,而对葡萄糖等 14种碳源和谷氨酸等 12种氮源的利用能力与出发菌株无明显差异。

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白作用的分子机制研究进展

本文主要综述了苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis ,Bt)杀虫晶体蛋白在分子水平上作用机制的研究进展。杀虫晶体蛋白经蛋白酶活化后形成的毒性肽一般由三个结构域组成。在杀虫过程中 ,毒性肽首先通过结构域Ⅱ或结构域Ⅲ的特殊部位与昆虫中肠上皮细胞膜上的受体蛋白发生专一性结合。这一结合开始是可逆的 ,随后发生紧密的不可逆结合。继而诱发毒性肽分子发生空间构象变化 ,使得结构域Ⅰ中的某些α 螺旋从α 螺旋束中弹出并插入细胞膜 ,并通过寡聚合作用造成膜穿孔 ,导致细胞渗透平衡破坏、中肠破裂。

蜡状芽胞杆菌转录激活子PIcR调控多基因的表达

蜡状芽胞杆菌是一种条件致病菌 ,它能引起食物中毒和其它形式的疾病。潜在的致病因子包括磷脂酶C、溶血素、肠毒素和呕吐毒素等。在很多致病菌中致病因子的表达都是协同调控的。从蜡状芽胞杆菌模式菌株ATCC1 4579经转座子诱变的文库 ,筛选到一株磷脂酶阴性的突变子 ,该突变子的蛋白酶活性明显减弱了。插入位点的序列分析表明 ,一个高度同源于苏云金芽胞杆菌转录激活子PlcR的基因被插入失活了。研究结果表明 ,除在苏云金芽胞杆菌中能激活磷脂酰肌醇磷脂酶C基因的转录外 ,转录激活子PlcR至少还能调控卵磷脂酶和一个或多个蛋白酶基因的表达 ,这是一个多效调节因子。