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杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡的初步研究 被引量:8
1
作者 姚伦广 杜昌升 +1 位作者 彭建新 洪华珠 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期380-383,T002,共5页
Microscopic examination of Spodoptera litura(SL-1)cell infected with AcMNPV or SfaMNPV revealed progressive cell blebbing starting at 8h~12h postinfection and culminating in total cell destruction at 24h postinfectio... Microscopic examination of Spodoptera litura(SL-1)cell infected with AcMNPV or SfaMNPV revealed progressive cell blebbing starting at 8h~12h postinfection and culminating in total cell destruction at 24h postinfection.The fragmentation of the infected cell nuclei was observed by stained with the specific fluorescent dye DAPI.Agarose gel electrophoresis analysis of the DNA extracted from infected cells show typical DNA ladder. All these supported that both viruses infected SL-1 cells undergo apoptosis.Through lipofectin transinfection,we observed that only the DNA of AcMNPV or SfaMNPV can also induce apopotosis of SL-1 cell.Virus titer analysis revealed that neither viruses can duplicate in SL-1 cells. 展开更多
关键词 杆状病毒 诱导 昆虫细胞凋亡 斜纹夜蛾细胞系 梯形带
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昆虫中肠Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N的研究进展 被引量:7
2
作者 刘凯于 姚汉超 +1 位作者 杨红 洪华珠 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2004年第3期203-207,共5页
鳞翅目昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜 (BBM)上的Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N(APN)的结构和位点密度的改变是昆虫对Bt毒素的主要抗性机制之一 ,该文简要综述了APN受体的研究进展。每种昆虫中肠上皮细胞中有数种APNs,彼此间同源性较高 ,其... 鳞翅目昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜 (BBM)上的Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N(APN)的结构和位点密度的改变是昆虫对Bt毒素的主要抗性机制之一 ,该文简要综述了APN受体的研究进展。每种昆虫中肠上皮细胞中有数种APNs,彼此间同源性较高 ,其中部分APNs为Cry1A家族毒素的功能性受体。不同种类昆虫的APNs受体 ,甚至同一种昆虫的不同类型APNs,其所结合的毒素种类可能不同。APNs决定该昆虫对Cry1A类毒素的敏感程度差异。有些抗性昆虫的APNs基因编码区发生了多个点突变。 展开更多
关键词 鳞翅目 昆虫 BT毒素 中肠上皮细胞刷状缘膜 受体 抗性 BBM
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苏云金芽孢杆菌晶体毒素感染敏感昆虫离体与活体细胞的病理学比较研究 被引量:1
3
作者 洪华珠 肖明 +2 位作者 魏林 虢华山 陈曲侯 《中国生物防治学报》 CSCD 1990年第S1期39-42,共4页
用苏云金芽孢杆菌蜡螟变种81—6菌株的晶体毒素感染菜青虫幼虫和家蚕离体细胞 感染早期两类细胞的线粒体都发生内脊膨大鼓起,随后细胞质内出现较大的空泡,感染后期线粒体膜和细胞质膜都发生溶解和破裂,细胞解体死亡。研究结果表明:离体... 用苏云金芽孢杆菌蜡螟变种81—6菌株的晶体毒素感染菜青虫幼虫和家蚕离体细胞 感染早期两类细胞的线粒体都发生内脊膨大鼓起,随后细胞质内出现较大的空泡,感染后期线粒体膜和细胞质膜都发生溶解和破裂,细胞解体死亡。研究结果表明:离体细胞和活体细胞在感染苏云金芽孢杆菌晶体毒素后,细胞的病变过程相同。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 细胞病理变化 离体和活体
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昆虫对苏云金杆菌的抗性研究进展 被引量:10
4
作者 鲁晓知 洪华珠 《生物防治通报》 CSCD 1993年第1期36-39,共4页
本文综述了昆虫对苏云金杆菌抗性的产生、抗性稳定性和遗传学基础以及抗性作用机制等方面的研究近况。
关键词 苏云金杆菌 抗性
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基因工程菌中重组质粒的稳定性研究进展 被引量:21
5
作者 肖硕 洪华珠 彭建新 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第4期9-12,共4页
基因工程菌(细胞)是现代生物工程中的微型生物反应器,是基因工程的研究主体之一。获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞是基因工程的核心步骤与最终目的。基因工程菌重组质粒稳定性问题是基因工程菌工业化生产与实验研究中的... 基因工程菌(细胞)是现代生物工程中的微型生物反应器,是基因工程的研究主体之一。获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞是基因工程的核心步骤与最终目的。基因工程菌重组质粒稳定性问题是基因工程菌工业化生产与实验研究中的最主要问题,就其在基因工程中的重要性、影响因素及提高稳定性策略方面作简要介绍并展开综述。 展开更多
关键词 基因工程 重组质粒 稳定性 策略
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粉纹夜蛾细胞中Bt Cry1Ac选择抗性的研究及离体品系与毒素结合的比较 被引量:4
6
作者 刘凯于 蒋才富 +2 位作者 洪华珠 彭建新 余泽华 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2003年第3期247-250,共4页
采用BtCry1Ac活性毒素对粉纹夜蛾BTI Tn 5B1细胞进行 5 6代筛选后获得了抗性比为 1 2 80倍的抗性细胞。ELISA检测表明抗性细胞总蛋白和膜蛋白结合的Cry1Ac数量都少于敏感细胞。配体结合Western杂交实验显示 :抗性细胞和敏感细胞的膜蛋... 采用BtCry1Ac活性毒素对粉纹夜蛾BTI Tn 5B1细胞进行 5 6代筛选后获得了抗性比为 1 2 80倍的抗性细胞。ELISA检测表明抗性细胞总蛋白和膜蛋白结合的Cry1Ac数量都少于敏感细胞。配体结合Western杂交实验显示 :抗性细胞和敏感细胞的膜蛋白与总蛋白都有 5条电泳迁移率相同的毒素结合多肽带 ,其分子量分别为 2 0 7,1 5 8 5 ,1 1 8 8,72 ,3 8 5kD ;抗性细胞的 1 1 8 8和 72kD的阳性带比敏感细胞的略弱 。 展开更多
关键词 粉纹夜蛾 细胞 BtCry1Ac 选择抗性 离体品系 毒素结合 抗性机制 杀虫细菌 苏云金芽孢杆菌
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甜菜夜蛾微孢子虫研究:Ⅲ.超微结构与致病机理 被引量:21
7
作者 陈广文 陈曲侯 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 1999年第2期121-128,共8页
从甜菜夜蛾幼虫体内首次分离到一种侵染寄主脂肪体、马氏管和中肠的微孢子虫,该微孢子虫对甜菜夜蛾(Laphygmaexigua)、菜青虫(Pierisrapae)和棉铃虫(Helicoverpaarmigera)幼虫有较强的致病力,并可经卵垂直传播;水平传播主要借... 从甜菜夜蛾幼虫体内首次分离到一种侵染寄主脂肪体、马氏管和中肠的微孢子虫,该微孢子虫对甜菜夜蛾(Laphygmaexigua)、菜青虫(Pierisrapae)和棉铃虫(Helicoverpaarmigera)幼虫有较强的致病力,并可经卵垂直传播;水平传播主要借助于病虫的粪便及虫尸。用电镜观察了该微孢子虫感染甜菜夜蛾幼虫后的超微结构变化。结果表明:寄生细胞被感染后,细胞核膨大并变形,由正常的圆球形被挤压成长条状,但核膜及核周间隙没有发生变化;线粒体体积变小,嵴增宽,嵴的排列方向发生改变,双层膜部分或全部被破坏而消失,最后线粒体解体;细胞质中平行排列的扁平囊状粗面内质网变得紊乱,在严重感染的细胞中,内质网被挤压成小碎片。研究还发现,该微孢子虫只在寄主细胞质中发育而不侵入细胞核。文中还对微孢子虫的致病机理进行了讨论。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 微孢子虫 超微结构 致病机理
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对虾白斑症病毒体内外感染的研究 被引量:2
8
作者 余泽华 刘凯于 +5 位作者 杨凯 王家坤 虢华珊 邱宝国 姚汉超 陈曲侯 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期64-67,共4页
WSSV可经注射、投喂或共居感染克氏螯虾和日本沼虾 ,病毒感染的组织匀浆物注射后发病很快 ,但蔗糖介质纯化的 WSSV注射后发病较慢 ,Ficoll-4 0 0介质纯化的 WSSV注射后发病时间介于前二者之间 .中国对虾细胞内 WSSV一般每个囊膜只含一... WSSV可经注射、投喂或共居感染克氏螯虾和日本沼虾 ,病毒感染的组织匀浆物注射后发病很快 ,但蔗糖介质纯化的 WSSV注射后发病较慢 ,Ficoll-4 0 0介质纯化的 WSSV注射后发病时间介于前二者之间 .中国对虾细胞内 WSSV一般每个囊膜只含一个核衣壳 ,但此毒种经克氏螯虾反复增殖后 ,多粒包埋的病毒粒子明显增多 .从病虾的每克鳃可提出约 0 .66mg的 WSSV.含WSSV的血淋巴或组织匀浆液感染 8种昆虫细胞后 ,传代 展开更多
关键词 对虾白斑症病毒 WSSV 体内感染 体外感染 病毒感染 感染液 发病情况
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荧光增白剂对苏云金杆菌毒力的增效作用及其紫外防护功效的研究 被引量:2
9
作者 徐莉 杨红 +1 位作者 彭建新 洪华珠 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第S1期247-247,共1页
关键词 荧光增白剂 苏云金杆菌 增效作用 紫外防护 棉铃虫 昆虫学研究所 华中师范大学 杀虫剂毒力 二苯乙烯类 苏云金杆菌制剂
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昆虫抗杆状病毒活性物质的诱导及鉴定 被引量:5
10
作者 吴琼 洪华珠 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期164-168,共5页
用BmNPV感染家蚕3龄幼虫,取其血淋巴经(NH4)2SO4分级沉淀,得到病毒抑制因子(viralinhibitoryfactor,VIF)粗制样品Ⅰ和Ⅱ。通过TCID50测定检测其抗病毒活性,结果VIF样品Ⅰ和样品Ⅱ均表现出抗病毒活性。将样品Ⅰ、Ⅱ经DEAE-SepharoseFF柱... 用BmNPV感染家蚕3龄幼虫,取其血淋巴经(NH4)2SO4分级沉淀,得到病毒抑制因子(viralinhibitoryfactor,VIF)粗制样品Ⅰ和Ⅱ。通过TCID50测定检测其抗病毒活性,结果VIF样品Ⅰ和样品Ⅱ均表现出抗病毒活性。将样品Ⅰ、Ⅱ经DEAE-SepharoseFF柱初步纯化,测得主要活性峰分别为峰c1、峰b2。对样品Ⅰ、Ⅱ进行SDS-PAGE电泳分析表明,样品Ⅰ比其对照样品多出4条带,它们的分子量分别为:83 7kD、65 2kD、43 0kD、32 8kD;而粗VIF样品Ⅱ比其对照样品多出一个组份,并且有3个组份表达量增多,多出的组份分子量为36 0kD。对灭活指数最高的峰b2作进一步电泳分析,证明存在5条带,其中有一条带可能是对应于样品Ⅱ上多出的那个组份。基于此初步证明,感染BmNPN的家蚕的免疫血淋巴中产生了抗病毒活性物质。 展开更多
关键词 昆虫 杆状病毒 诱导 核型多角体病毒 抗菌肽
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抗苏云金杆菌毒素Cry1Ac粉纹夜蛾细胞系的特性研究 被引量:3
11
作者 刘凯于 杨红 +2 位作者 蒋才富 彭建新 洪华珠 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2004年第3期205-211,共7页
为了从离体细胞水平探讨昆虫对苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的部分抗性机制,本文采用活化的Cry1Ac 毒素对粉纹夜蛾BTI-TN-581-4细胞连续筛选86代,获得了高水平抗性细胞,研究了其某些特性。它对Cry1c 产生了低水平的交互抗性,对低渗溶液... 为了从离体细胞水平探讨昆虫对苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的部分抗性机制,本文采用活化的Cry1Ac 毒素对粉纹夜蛾BTI-TN-581-4细胞连续筛选86代,获得了高水平抗性细胞,研究了其某些特性。它对Cry1c 产生了低水平的交互抗性,对低渗溶液的耐受性显著增强,双向电泳图谱表明抗性细胞膜蛋白组分发生了明显的变化。膜蛋白组分的变化可能导致了筛选细胞的耐低渗透压和抗Cry1C。 展开更多
关键词 粉纹夜蛾细胞系 CrylAc毒素 交互抗性 膜蛋白 苏云金芽孢杆菌
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对虾白斑症病毒的初步研究 被引量:1
12
作者 刘凯于 余泽华 +5 位作者 杨凯 王家坤 虢华珊 姚汉超 陈曲侯 徐敬明 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期336-340,共5页
对虾白斑症病毒可通过人工投喂感染克氏螯虾 ,病程发展迅速 ,死亡率高 .该病毒既可见在胞核中复制 ,也常见于胞质中装配 .通过差速离心 ,蔗糖垫层离心或密度梯度离心后 ,再将分离物中细胞源核酸消化掉 ,可提取出较纯的病毒 DNA.
关键词 白斑症病毒 组织病理 投喂感染 形态学 对虾
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苏云金芽孢杆菌Cry1A毒素抗性相关受体类钙粘蛋白的研究进展 被引量:2
13
作者 刘凯于 郑进 +1 位作者 彭蓉 洪华珠 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2004年第3期145-149,共5页
综述了Cry1A毒素的受体类钙粘蛋白的结构 ,受体与毒素的结合特性 ,受体基因在离体细胞中的表达和表达产物介导Cry1A毒素裂解细胞的功能 ,以及受体基因的突变与抗性的关系 。
关键词 CDr1A毒素 类钙粘蛋白 基因表达 突变 抗性
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昆虫对苏云金杆菌的抗性及防治策略 被引量:5
14
作者 杨红 洪华珠 《昆虫知识》 CSCD 1997年第2期117-120,117,共5页
关键词 害虫 苏云金杆菌 微生物杀虫剂 抗药性 生物防治
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日本血吸虫金属蛋白酶基因的克隆和表达及其对小鼠的免疫保护性研究 被引量:2
15
作者 徐斌 鞠川 +4 位作者 卢艳 莫筱谨 冯正 许学年 胡薇 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期81-86,共6页
目的克隆和表达日本血吸虫金属蛋白酶(metalloprotease)编码基因并纯化表达产物,观察其在成虫体内定位及在小鼠的免疫试验。方法根据表达序列标签(EST)测序的结果设计引物,从含有金属蛋白酶基因的日本血吸虫cDNA克隆(SJM2CFB04,简称SjB... 目的克隆和表达日本血吸虫金属蛋白酶(metalloprotease)编码基因并纯化表达产物,观察其在成虫体内定位及在小鼠的免疫试验。方法根据表达序列标签(EST)测序的结果设计引物,从含有金属蛋白酶基因的日本血吸虫cDNA克隆(SJM2CFB04,简称SjB04)中扩增得到该编码基因片段,亚克隆至原核表达载体pET28a中表达,应用组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。应用间接免疫荧光法,观察金属蛋白酶在血吸虫成虫体内的分布。将18只C57BC/6小鼠随机分成两组,实验组用SjB04重组蛋白(25μg/只)免疫小鼠,共3次,每次间隔2周;对照组用佐剂免疫(50μl/只)。末次免疫后2周,每鼠腹部感染40±2条日本血吸虫尾蚴,攻击后第37天起连续收集6 d小鼠粪便,计算每克粪虫卵数和减卵率;第42天剖杀小鼠,门静脉灌注收集成虫并计算减虫率。结果获得了SjB04基因(ORF 528 bp)的编码序列,构建了原核表达载体,并在大肠埃希菌中表达,经组氨酸标签亲和层析法获得纯化重组蛋白SjB04。免疫荧光法检测结果显示,SjB04主要定位于日本血吸虫成虫的肠管表皮。Western blotting分析结果显示,该纯化重组蛋白SjB04能被感染兔血清和免疫兔血清识别,在相对分子质量(Mr)29 800处出现一清晰条带。用该纯化蛋白免疫C57BC/6小鼠后,减虫率为27.1%,粪减卵率为57.8%。结论克隆获得的日本血吸虫SjB04重组蛋白主要定位于日本血吸虫成虫的肠管表皮,该蛋白可明显减少感染日本血吸虫的C57BC/6小鼠的粪卵排出量。 展开更多
关键词 日本血吸虫 金属蛋白酶 免疫保护力
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杆状病毒几丁质酶基因结构与功能的研究进展 被引量:4
16
作者 贾放 余泽华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期74-77,共4页
杆状病毒几丁质酶基因是杆状病毒的非必需基因 ,是高度保守的基因。该基因在杆状病毒复制晚期表达产生几丁质酶 ,该酶N端具信号肽 ,中部是酶的活性区 ,C端是酶的内质网结合区。杆状病毒几丁质酶同时具有内切和外切几丁质酶活性 ,主要功... 杆状病毒几丁质酶基因是杆状病毒的非必需基因 ,是高度保守的基因。该基因在杆状病毒复制晚期表达产生几丁质酶 ,该酶N端具信号肽 ,中部是酶的活性区 ,C端是酶的内质网结合区。杆状病毒几丁质酶同时具有内切和外切几丁质酶活性 ,主要功能是水解昆虫体内的组成型几丁质。杆状病毒几丁质酶对于虫体液化是必需的 ,同时它还是原组织蛋白酶 (pro V Cath)的分子伴侣 ,并与病毒侵染机制相关联。 展开更多
关键词 杆状病毒 几丁质酶 基因结构 功能
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中国棉铃虫核型多角体病毒VHA_(273)原毒株及其克隆株的比较研究 被引量:2
17
作者 贾放 徐佳 +4 位作者 聂英超 肖杨 周蕊 李小青 余泽华 《中国病毒学》 CSCD 2003年第3期241-245,共5页
本文从形态结构、生物活性、核酸限制性内切酶图谱、结构多肽等方面对中国棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)VHA273多粒包埋型原毒株及其单粒包埋型克隆株H9进行了比较研究.它们对中国棉铃虫三龄初幼虫的LC5o值分别为2.987×104PIBs/mL和... 本文从形态结构、生物活性、核酸限制性内切酶图谱、结构多肽等方面对中国棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)VHA273多粒包埋型原毒株及其单粒包埋型克隆株H9进行了比较研究.它们对中国棉铃虫三龄初幼虫的LC5o值分别为2.987×104PIBs/mL和1.647×104PIBs/mL当感染剂量为2×107PIBs/mL时,其LT5o值分别是4.866d和4.797d.两个毒株的生物活性差别不大.经SDS-PAGE分析,两毒株结构多肽图谱带型相差较大.两毒株基因组经EcoR Ⅰ,BamH Ⅰ,Hind Ⅲ和Xba Ⅰ消化后,得到的内切酶图谱表现为两毒株间有差别.这些差异的发现将有助于从分子水平揭示多粒包埋病毒和单粒包埋病毒形成原因. 展开更多
关键词 棉铃虫核型多角体病毒 VHA273原毒株 克隆株 生物活性 结构多肽 生物防治
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斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA诱导同源昆虫细胞的凋亡 被引量:1
18
作者 杜昌升 彭建新 洪华珠 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期592-596,共5页
发现野生型斜纹夜蛾核型多角体病毒 (Spodopteralituranuclearpolyhedrosisvirus ,SpltNPV)DNA转染SL 1细胞能诱导细胞凋亡 .SpltNPV DNA转染其同源细胞系斜纹夜蛾核SL 1细胞 6h后 ,光镜下即可见细胞膜表面突出或形成小泡 ,细胞碎裂成... 发现野生型斜纹夜蛾核型多角体病毒 (Spodopteralituranuclearpolyhedrosisvirus ,SpltNPV)DNA转染SL 1细胞能诱导细胞凋亡 .SpltNPV DNA转染其同源细胞系斜纹夜蛾核SL 1细胞 6h后 ,光镜下即可见细胞膜表面突出或形成小泡 ,细胞碎裂成凋亡小体 ,18h后 ,细胞 10 0 %碎裂成凋亡小体 .DAPI荧光染色显示感染细胞核渐呈半月形 ,直至碎裂被凋亡小体包裹 .被转染的SL 1细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型梯形谱带 .野生型SpltNPV病毒粒子感染的SL 1细胞既无多角体的出现 ,也无凋亡现象的发生 . 展开更多
关键词 斜纹夜蛾核多角体病毒 DNA 诱导 同源昆虫细胞 斜纹夜蛾细胞系 细胞凋亡
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重组杆状病毒杀虫剂研究进展 被引量:3
19
作者 惠丰立 彭建新 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第4期43-45,共3页
从缺失病毒非必须基因增加杀虫效果、插入外源基因提高杀虫速度。
关键词 杆状病毒 重组病毒 杀虫剂 生物防治
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三种苏云金芽孢杆菌晶体蛋白火箭免疫电泳的研究 被引量:1
20
作者 洪华珠 李星 《中国生物防治学报》 CSCD 1990年第S1期43-46,共4页
本文以火箭免疫电泳技术检测HD—1、81—6、187三种苏云金芽孢杆菌的晶体蛋白,结果表明:这种方法可以快速、特异性地检测晶体蛋白的含量。在抗血清浓度为3%的凝胶上抗原抗体所形成的免疫沉淀线峰高与晶体蛋白的浓度呈明显的线性关系。... 本文以火箭免疫电泳技术检测HD—1、81—6、187三种苏云金芽孢杆菌的晶体蛋白,结果表明:这种方法可以快速、特异性地检测晶体蛋白的含量。在抗血清浓度为3%的凝胶上抗原抗体所形成的免疫沉淀线峰高与晶体蛋白的浓度呈明显的线性关系。本文还就火箭免疫电泳沉淀线峰高与一些条件的关系进行了讨论。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 晶体蛋白 火筋免疫电泳
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