急性病毒性心肌炎患者CCL20对Th17细胞趋化性作用

目的:探讨CCL20与急性病毒性心肌炎(AVMC)患者Th17细胞趋化性的关系。方法:选择11例AVMC患者为研究对象,同时选取10例健康人作为对照。利用siRNA技术干预AVMC患者外周血巨噬细胞,将其分为A(不接受siRNA转染)、B(接受CCL20 siRNA转染)、C(阴性对照,接受scramble siRNA转染)亚组。应用ELISA法检测AVMC组患者血清CCL20及其巨噬细胞体外分泌CCL20的水平,趋化实验和流式细胞学结合观察体外不同水平CCL20对Th17细胞的趋化能力及表达CCL20受体CCR6的Th17细胞比例的影响,实时定量PCR法检测趋化板下室细胞表面CCR6mRNA的表达。结果:与健康对照组[(2.78±0.64)μg/L]相比,AVMC组患者体内血清CCL20水平[(11.36±2.45)μg/L]明显升高,P<0.05。体外实验中,B亚组巨噬细胞培养上清CCL20含量、趋化实验募集的Th17细胞比例、表达CCR6的Th17细胞比例和CCR6mRNA相对表达水平[(0.94±0.08)ng/L、(6.86±0.59)%、(2.56±0.78)%、(0.36±0.08)]均低于A亚组[(2.57±0.25)ng/L、(9.74±0.77)%、(4.55±0.84)%、(1.00±0.15)]和C亚组[(2.08±0.17)ng/L、(9.16±0.82)%、(4.12±0.43)%、(0.88±0.17)],均P<0.05,而A、C亚组间各参数差异均无统计学意义。结论:AVMC患者中Th17细胞趋化性与巨噬细胞分泌的CCL20有关。

淋巴细胞转输对线粒体腺苷酸转位酶诱导的自身免疫性心肌病小鼠细胞因子的抑制作用

目的:研究淋巴细胞转输对线粒体腺苷酸转位酶(ANT)合成肽诱导的自身免疫性心肌病传染性耐受的小鼠Th1/Th2亚群及血清和心肌组织细胞因子的影响。方法:用ANT多肽多次免疫Balb/C小鼠得到心肌病组,单抗组小鼠在给予ADP/ATP肽免疫的第0、1和2天,同时接受尾静脉注射400μg抗L3T4单抗;第6个月末时,将单抗组小鼠的脾细胞取出转输到正常小鼠体内(转输组),此小鼠亦同时给予多肽免疫,方法同心肌病组。对照组以不含ANT的相同免疫进行假性免疫,时间和剂量同心肌病组。采用流式细胞术检测脾T细胞内细胞因子IFN-γ/IL-4的含量;以ELISA法检测其血清中IFN-γ、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;实时荧光定量PCR法检测其心肌细胞因子mRNA表达。结果:转输组Th细胞IFN-γ、IL-4含量与对照组和单抗组接近且明显低于心肌病组;转输组小鼠血清IFN-γ和IL-2水平明显高于心肌病组而低于单抗组,IL-4和IL-6水平显著低于心肌病组;TNF-α水平在转输组则最高;心肌细胞因子mRNA的表达则转输组显著低于心肌病组,与对照组和单抗组相近。结论:淋巴细胞转输能够阻断心肌病诱导过程中绝大部分细胞因子的生成,与单抗早期干预的结果类似。

不同时期应用抗L3T4单抗治疗的自身免疫性心肌病小鼠免疫球蛋白G亚型分析

目的:探讨不同阶段应用抗L3T4单抗治疗自身免疫性心肌病对小鼠血清抗线粒体ADP/ATP载体抗体和免疫球蛋白G(IgG)亚型的影响。方法:将24只小鼠随机分为4组,每组6只。用含有人线粒体ADP/ATP载体肽的免疫液免疫近交系Balb/C小鼠建立类扩张型心肌病(DCM)模型(DCM组);以不含肽免疫液免疫小鼠作为对照组;在同时用含有ADP/ATP载体肽的免疫液的第0、1、2天连续3d以400μg抗L3T4单抗免疫小鼠获得早期治疗组;在给予ADP/ATP载体肽的免疫液第4个月初始连续3d给予抗L3T4单抗治疗获得中期治疗组。以ELISA法检测其血清中抗ADP/ATP载体抗体水平和IgG亚型(IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3)的变化;采用流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+T细胞内γ干扰素(IFN-γ)/白细胞介素(IL)-4的表达。结果:早期治疗组与对照组小鼠抗ADP/ATP载体抗体检测均为阴性,而中期治疗组与DCM组抗体均为阳性。DCM组各亚类水平均较对照组明显升高;早期治疗组IgG1、IgG2b和IgG3的产生均受到抑制,其水平接近对照组;中期治疗组IgG1水平介于DCM组和早期治疗组之间,IgG2b和IgG3的生成与DCM组差异无统计学意义,但显著高于早期治疗组;而治疗组与DCM组IgG2a水平则差异无统计学意义。早期治疗组小鼠IFN-γ/IL-4百分含量与对照组相比差异无统计学意义,但明显低于DCM组;中期治疗组IFN-γ的百分含量较DCM组更高,IL-4的百分含量介于DCM组和早期治疗组之间。结论:抗L3T4单抗治疗能够抑制DCM小鼠血清中的抗ADP/ATP载体抗体及IgG1亚型的生成和Th2相关细胞因子IL-4的百分含量,且以早期治疗的效果更明显。