血液病血小板无效输注的原因探讨

目的:探讨输注血小板无效的原因。方法:观察131例血液病患者的659例次单采血小板输注情况及效果并讨论其影响因素。结果:①急性白血病组(AL)、再生障碍性贫血组(AA)、特发性血小板减少性紫癜(ITP)组输注有效率分别为66.49%、71.19%、51.39%(P<0.05);②AL、AA发热组输注有效率低于未发热组(P<0.05);③AL脾脏肿大与无肿大组及弥散性血管内凝血(DIC)组与无DIC组输注有效率差异在统计学有显著差异(P<0.05);④外周造血干细胞移植组、骨髓移植组输注有效率分别为52.54%、38.22%(P<0.05),造血干细胞移植死亡组与未死亡组输注有效率分别为23.21%、52.91%(P<0.05)。结论:引起血小板输注无效的病因复杂。血小板输注应视患者一般状况、血小板计数及出血情况作出综合判断,避免或减少血小板输注无效,提高血小板输注的有效率。

雷公藤红素对白血病细胞Akt信号通路的影响及在细胞凋亡中的作用

目的研究雷公藤红素(celastrol)对人类白血病细胞株K562细胞Akt信号通路的影响及其作用。方法应用MTT法检测细胞增殖活性,Annexin V/PI双标法、Hoechst33258染色法和DNA ladder法检测细胞凋亡,Western Blot法检测Caspase家族成员及Akt信号通路相关蛋白在雷公藤红素作用前后的表达或磷酸化情况,并进一步分析其对雷公藤红素诱导细胞凋亡作用的影响。结果雷公藤红素以剂量-时间依赖性方式抑制K562细胞增殖,其24h半数抑制量(IC50)是(2.15±0.11)μmol/L;并以剂量依赖性方式诱导K562细胞凋亡,2.0μmol/L雷公藤红素处理24h后出现明显的DNA剪切现象,伴有典型的细胞凋亡形态学改变。雷公藤红素诱导细胞凋亡过程中伴随Caspase-3、8的活化,50μmol/L Caspase抑制剂z-VAD-fmk可阻断雷公藤红素作用的K562细胞凋亡。雷公藤红素降低K562细胞Akt信号通路中p-Ak,t Survivin和Bcl-2的表达,25μmol/LWORT(PI3K-Akt抑制剂)可显著提高雷公藤红素诱导K562细胞凋亡的作用。结论雷公藤红素显著抑制K562细胞增殖,通过活化Caspase途径诱导K562细胞凋亡。雷公藤红素诱导细胞凋亡过程中伴Akt磷酸化水平的降低,雷公藤红素参与PI3K-Akt抑制剂协同诱导K562细胞的凋亡。

低增生性急性白血病实验室分析与治疗

目的：探讨低增生性急性白血病（HAL）诊断与治疗。方法：通过分析2000年9月～2003年10月间在我院确诊的35例低增生性急性白血病的实验室资料，采用小剂量米托蒽醌联合重组人粒细胞集落生长刺激因子（rhGCSF）进行诱导治疗。结果：完全缓解17例，占48．6％；部分缓解7例占20．0％；不缓解11例，占31．4％；总有效率为68．6X。结论：采用rhG-CSF联合小剂量米托蒽醌治疗低增生性急性白血病是切实可行的。

大鼠凝血因子Ⅶ EGFP-EGF1融合蛋白的表达及其结合功能初步研究

本研究通过融合蛋白EGFP-EGF1的表达,探讨大鼠凝血因子Ⅶ上EGF1片段与组织因子(TF)的结合功能。用RT-PCR方法自大鼠肝脏组织获得EGF1编码区基因并将其插入EGFP原核表达载体中,构建pET28a-EGFP-EGF1融合蛋白表达载体;将该重组质粒转化大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达EGFP-EGF1融合蛋白;采用亲和层析方法Ni柱纯化融合蛋白,将融合蛋白作用于经脂多糖刺激表达TF的大鼠血管内皮细胞;通过荧光显微镜及流式细胞术观察和检测融合蛋白与细胞结合情况。结果表明:EGFP-EGF1在转化的大肠杆菌中获得高效表达并成功纯化,SDS-PAGE证实分子量约为36kD。荧光显微镜及流式细胞术检测显示该融合蛋白能与内皮细胞膜上的TF结合。结论:大鼠凝血因子Ⅶ上EGF1区可介导FⅦ与TF特异性结合,从而可能为分子靶向抗栓治疗研究提供部分基础。

急性巨核细胞白血病实验室观察

目的探讨急性巨核细胞白血病(AMKL)的形态、免疫化学及超微电镜等方法的特点。方法采用造血及淋巴组织肿瘤的WHO分类法急性巨核细胞白血病的诊断标准确诊。结果4例AMKL患者在形态学、免疫学、电镜检查方法有明显特点。结论对急性白血病患者行细胞化学、免疫组化及电镜检查可提高其诊断。

重组TFPI-2抑制纤溶酶活性的酶促动力学实验方法研究

目的:建立重组TFPI-2抑制纤溶酶活性的测定方法。方法:应用酶促动力学分析方法,建立TFPI-2抑制纤溶酶的测定方法并进行抑制动力学分析。结果:重组TFPI-2对液相纤溶酶均有显抑抑制作用,且呈剂量-效应关系。结论:重组TFPI-2具有强烈抑制纤溶酶活性的作用,为进一步体外探讨TFPI-2在相关领域的应用,提供了可靠的测定方法。

重组TFPI-2影响人卵巢癌细胞体外迁徙浸润能力的研究

目的 :从功能角度研究重组组织因子途径抑制物 2 (TFPI 2 )对人卵巢癌细胞体外迁徙、浸润能力的影响。方法 :①迁徙实验 ,加不同浓度TFPI 2培养的A2 780细胞和不加TFPI 2的A2 780细胞 ,通过Boyden小室体外浸润转移模型 ,以迁徙到聚碳脂微孔滤膜 (PVPF)背面的每高倍镜视野中的平均细胞数作为评价人卵巢癌细胞迁徙能力强弱的指标。②浸润实验在PVPF膜铺上基底膜基质胶 (Matrigematrix)后 ,行迁徙实验。结果 :①迁徙实验中 ,将A2 780 TFPI 2不同浓度组与A2 780对照组细胞穿过PVPF膜的细胞数进行比较 ,经t检验 ,没有统计学意义 (P >0 .0 5)。②浸润实验中 ,将A2 780 TFPI 2不同浓度组与A2 780对照组的细胞穿过人工膜的细胞数进行比较 ,及TFPI 2不同浓度组间的细胞数进行比较 ,经t检验 ,均有非常显著差异 (P <0 .0 1)。结论 :重组TF PI 2对人卵巢癌细胞体外自身运动能力无影响 ,但可显著抑制人卵巢癌细胞的体外浸润能力 ,为卵巢癌的蛋白酶抑制剂治疗提供一可能的靶向依据。

半乳糖凝集素-9在白血病微血管内皮细胞上的表达及其对CIK细胞影响的初步研究

目的:探讨内皮细胞在高表达半乳糖凝集素-9(Gal-9)对CIK细胞杀伤活性、凋亡率和跨内皮迁移的影响。方法:收集确诊的9例急性髓系白血病(AML)患者(不包括AML-M3)、8例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者、5例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者和6例健康对照者(HDs)的骨髓标本,利用流式细胞术检测Gal-9的表达。用慢病毒载体构建高表达Gal-9的病毒颗粒转染脐静脉内皮细胞系(EAhy 926细胞),应用PCR、Western Blot进行验证转染效率,将不同表达水平Gal-9的内皮细胞与CIK细胞共培养,应用CCK-8、流式细胞术、免疫荧光强度检测法检测共培养不同时间后CIK细胞的杀伤活性、凋亡率和跨内皮迁移率的变化。结果:入组患者的年龄、性别比较差异无统计学意义,AML和ALL患者骨髓中Gal-9表达明显高于CLL患者和HDs[AML(83.41±24.38)%,ALL(89.06±16.27)%vs CLL(59.33±34.43)%,HDs(4.48±3.62)%,P=0.0008]。与未转染高表达Gal-9的内皮细胞比较,高表达Gal-9的内皮细胞与CIK细胞共培养后,CIK细胞杀伤活性相对降低(135.10±37.51 vs 187.70±57.59),凋亡率增加[(28.45±6.15)%vs(23.93±3.47)%],并且CIK细胞跨内皮细胞迁移率降低。结论:白血病细胞中Gal-9高表达,CIK细胞表面Tim-3的表达增加,提示Gal-9/Tim-3途径可能影响CIK细胞治疗白血病的生物学效应;而内皮细胞高表达Gal-9则可能促进CIK细胞凋亡,影响CIK细胞的迁移和细胞杀伤效应,Tim-3单抗干预后可在一定程度上缓解相应的抑制效应。因此,CIK细胞治疗疗效的差异可能与Gal-9/Tim-3途径相关。

抑制自噬促进冬凌草甲素诱导的多发性骨髓瘤细胞凋亡涉及胞内ROS产生

目的本实验主要研究冬凌草甲素诱导多发性骨髓瘤发生自噬、凋亡,两者之间的关系以及所涉及的相关机制。方法利用MTT比色法检测冬凌草甲素对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖活性影响;透视电镜观察细胞内凋亡和自噬的形态学改变;TUNEL检测细胞凋亡;分别利用以下技术检测处理后的细胞内的自噬变化:使用QDs605nm-Anti-LC3荧光探针以及免疫荧光技术定位细胞胞内LC3Ⅰ和LC3Ⅱ蛋白,利用western blot免疫印记技术检测Beclin 1蛋白表达水平;利用DCFH-DA探针以及流式细胞术检测细胞胞内ROS水平。结果冬凌草甲素能明显抑制RPMI8226细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性;冬凌草甲素能同时诱发细胞凋亡、自噬和胞内ROS产生;NAC完全抑制胞内ROS产生后冬凌草甲素诱导的细胞凋亡消失;3-MA抑制自噬后,冬凌草甲素诱导的胞内ROS产生进一步增多,凋亡增多。结论冬凌草甲素能明显抑制RPMI8226细胞增殖;冬凌草甲素同时诱发细胞凋亡和自噬;胞内ROS产生介导冬凌草甲素诱导的凋亡;凋亡为细胞死亡的主要途径,而自噬通过下调胞内ROS产生抑制凋亡。

老年恶性淋巴瘤的临床特点和疗效分析

目的：探讨老年恶性淋巴瘤（ML）的临床特点、治疗及国际预后指数（IPI）的应用价值。方法：回顾性分析1998～2003年间59例首程治疗的老年ML患者的临床资料。本组患者37例接受治疗，大部分单纯采用联合化疗的方法，部分采用局部放疗加化疗或手术后加化疗的方法。结果：59例ML患者1、3、5年生存率分别为77．9％（46／59），41．1％（23／56），9．4％（5／53），而治疗组1、3、5年生存率分别为81．1％（30／37），45．9％（17／37），13．5％（5／37），其中存活5年以上者均为达完全缓解（CR）者。非霍奇金淋巴瘤（NHL）根据IPI分组，低危组、低中危组、中高危组、高危组中位生存期（MST）分别为88个月、60个月、52个月、6个月，其生存时间差异有统计学意义（P＜0．01），各组之间的CR率也存在统计学意义（P＜0．01）。Cox多因素分析显示，影响预后的独立因素为病理类型和IPI。结论：IPI是判断老年ML预后的重要指标，老年ML仍应考虑积极的综合治疗。

静脉马利兰环磷酰胺联用预处理异基因造血干细胞移植19例(英文)

背景：由大剂量口服马利兰联合环磷酰胺组成的BuCy2是目前主要的移植前预处理方案之一，但存在较多口服马利兰相关副作用。目的：评价静脉马利兰预处理造血干细胞移植治疗恶性血液病的有效性及安全性。设计：病例观察。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院血液科。对象：选择2006—05／12在华中科技大学附属协和医院血液病研究所行改良静脉马利兰联用环磷酰胺为预处理方案的异基因的造血干细胞移植13例慢性粒细胞白血病患者及6例急性白血病患者，男12例，女7例，年龄14—50岁，平均33岁，其中亲缘性移植9例，非亲缘移植10例，造血干细胞来源：外周血18例，骨髓1例。所有患者及家属对治疗项目知情同意。方法：应用静脉注射马利兰组成的BuCy2预处理对患者进行异基因造血干细胞移植，即所有患者均采用目前国内外通用的改良马利兰联用环磷酰胺方案，即移植前10d口服羟基脲40mg／kg，移植前9d静脉滴注阿糖胞苷2g／m^2，移植前8，7，6d应用马利兰针剂0．8mg／kg（该剂量根据既往研究与1mg／kg口服制剂等效），通过中心静脉插管由输液泵控制滴速大于2h输注完毕，1次，6h，共12次，静脉注射马利兰输注前可应用生理盐水或5％葡萄糖稀释至约0．5g／L（约稀释10倍）。移植前5，4d静脉注射环磷酰胺1．8g／（m^2·d），移植前3d13服甲基环已亚硝脲250mg／m^2观察患者肝静脉闭塞病以及其他副作用的发生情况，术后进行中位6．5个月的随访观察，主要观察患者疾病复发及存活情况。主要观察指标：①移植后100d肝静脉闭塞病发生及副作用情况。②随访结果。结果：纳入患者19例均进入结果分析，术后13d内均获造血功能重建，经血型转变、染色体核型及DNA多态性证实为供者植入。①肝静脉闭塞病发生及副作用：患者在移植后100d内的肝静脉闭塞病发生率和100d时的肝静脉闭塞病相关死亡率均为0，未观察到与静脉马利兰相关的严重毒副反应。②随访结果：术后6．5个月随访，1例患者因移植后肝炎死亡，2例患者复发，其中1例经氟达拉滨＋阿糖胞苷＋粒细胞集落刺激因子方案化疗及供者外周血造血干细胞支持后目前已经获得完全缓解，经DNA多态性证实重新获得供者植入，另1例患者目前化疗进行中。其余患者目前均无病存活。结论：静脉马利兰的应用，可能在一定程度上减少了移植后肝静脉闭塞病的发生及其他口服马利兰相关的毒副作用，从而提高了移植疗效。

急性脑梗死患者凝血功能的动态变化

目的了解急性脑梗死患者体内凝血功能的动态变化。方法对2002年1月～2005年12月被确诊为急性脑梗死患者的SFMC、D-D、vWF、GMP-140进行动态观察,以100例正常人作为对照组,两者进行比较。结果疾病组患者在急性期血浆D-D、vWF、GMP-140的浓度及SFMC的阳性率明显高于正常对照组,在恢复期均有明显下降,未达到正常对照组水平。结论动态观察急性脑梗死患者的凝血功能变化可作为判断患者病情严重程度及其恢复的指标。

血液病患者真菌感染二级预防现状

侵袭性真菌感染（IFI）在恶性血液病患者中发病率和死亡率均较高。近年来，对侵袭性真菌感染早期诊断的进步和新的有效药物的应用提高了恶性血液病患者首次抗真菌治疗的疗效，使更多患者获得再次化疗和造血干细胞移植的机会。但既往确诊或临床确诊侵袭性真菌感染的血液病患者再次接受免疫抑制剂治疗或细胞移植时真菌感染复发的危险性增加，死亡率极高。因此，采取措施预防真菌感染的再发，即真菌感染的二级预防成为必然要求。真菌感染的二级预防已成为广大医务工作者的共识。

Sokal和Hasford积分系统在慢性粒细胞白血病研究中的临床意义比较

目的比较Sokal和Hasford积分系统在研究慢性粒细胞白血病(CML)中的临床意义。方法204例患者按治疗方案与两种积分系统分别进行分组,比较干扰素两种积分系统对慢性期CML患者生存期的影响,并在不同危险度组内观察干扰素对患者生存期的影响。结果干扰素、Sokal和Hasford积分系统对CML患者的预后均有显著影响(P均<0.001),但多变量分析发现仅有Hasford积分是影响预后的独立因素。在Hasford中高危组与Sokal高危组内,干扰素并不能明显延长患者的生存时间。结论Sokal和Hasford积分系统能较好地预测CML患者的预后,对确定高危组患者后者更为准确。按预后评分系统将患者分组,有利于治疗方案的合理选择。