枸杞多糖通过泛素蛋白酶体途径降解突变亨廷顿蛋白

目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)降解突变亨廷顿蛋白(mutant huntingtin,mHtt)的途径。方法在稳定表达mHtt 160Q的HEK293细胞中使用不同浓度LBP,CCK8法检测细胞活力,caspase-3活性酶标法检测caspase-3活性;使用荧光显微镜检测、Image Pro Plus 6.0分析LBP对HEK293-160Q细胞中mHtt的影响并同时使用RT-PCR法检测LBP是否影响其mRNA水平;使用LBP、MG132及氯喹,分组处理HEK293-160Q细胞,通过Western Blot法检测不同组细胞中mHtt的变化。结果 LBP能提高HEK293-160Q细胞活力,降低caspase-3活性;LBP能减少细胞中mHtt且不改变其mRNA;不同药物处理HEK293-160Q细胞后,发现与只使用LBP相比,同时使用LBP与MG132会显著降低mHtt的降解,而同时使用LBP与氯喹则对mHtt的降解没有影响。结论 LBP能通过泛素蛋白酶体途径降解mHtt,减轻mHtt所引起的细胞毒性继而提高细胞活力、抑制细胞凋亡。

miR-21通过PTEN/AKT减轻突变亨廷顿蛋白细胞毒性

目的探讨miR-21减轻突变亨廷顿蛋白(mutant huntingtin,mHtt)细胞毒性的机制。方法利用qRT-PCR检测miR-21在亨廷顿病(Huntington’s disease,HD)转基因小鼠脑组织以及HEK293-160Q细胞中的变化;双荧光素酶实验检测PTEN是否为miR-21的靶基因;转染miR-21 mimics后,CCK8检测细胞活力,Caspase-3活性酶标检测Caspase-3活性,Western blotting检测PTEN、Ser-473位点磷酸化的AKT以及AKT。结果qRT-PCR结果显示,与野生型小鼠及HEK293-20Q细胞相比,HD转基因小鼠脑组织及HEK293-160Q细胞中miR-21均显著降低;双荧光素酶实验证实PTEN为miR-21靶基因;在HEK293-160Q细胞中转染miR-21 mimics后PTEN显著降低、p-AKT-Ser 473/AKT显著升高。结论miR-21能通过降低PTEN来提高p-AKT-Ser 473/AKT,减轻mHtt所引起的细胞毒性继而提高细胞活力、抑制细胞凋亡。