环境镉污染健康风险评价指标体系的构建

目的建立环境镉污染健康风险评价指标体系,为风险评估奠定基础,为风险管理提供理论依据。方法采用德尔菲法和专家会议法相结合确定指标体系。结果构建了包括3项一级指标、6项二级指标和20项三级指标的指标体系,并确定其权重值。结论环境镉污染健康风险评价指标体系构建科学合理,指标体系的完善有待于进一步实证研究。

基于中国居民疾病发病和死亡情况的环境重金属污染健康风险评估标准探讨

重金属污染日趋严峻,严重影响了人们的生活质量,而健康风险评估可有效地应用于环境管理决策。基于健康风险评估标准制定的原则,通过结合中国居民慢性病的患病率和死亡率现状,参照不同国家的健康风险评估标准,对适合中国人群的环境重金属污染健康风险评估标准进行探讨。

环境污染健康损害评价指标体系探索

为解决环境污染健康损害诉讼中评价指标这一关键问题,构建了环境污染健康损害评价指标体系。依健康的定义将健康损害评价分为生理评价和心理评价两部分。其中生理评价指标分为暴露指标、效应指标和易感性指标3大类,暴露指标则分为摄入量指标和暴露标志物指标两个方面,效应指标又分为一般人群健康指标和效应标志物指标两个方面。为了提高指标体系的可操作性,补充了5类主要器官健康损害生物标志物。

基于GADD153启动子的环境致癌物快速筛选系统研究

[目的]构建快速检测环境中痕量致癌物DNA损伤效应的重组人肝细胞株。[方法]构建含生长抑制与DNA损伤基因153(GADD153)启动子和萤光素酶报告基因的重组稳定转染人肝肿瘤HepG2细胞;发光检测不同致癌物对稳定转染细胞的DNA损伤效应;同时RT-PCR检测内源性GADD153mRNA的表达;彗星试验(Cometassay)检测DNA的损伤效应。[结果]稳定转染GADD153-LUC细胞株可检出多环芳烃、芳香胺、重金属、农药等已知环境致癌物以及实际水样中的含量。检测结果与彗星试验结果相比,大多数检测下限均低于彗星试验的检测限,其中对苯并芘、氯化镉和2-氨基芴的检测灵敏度分别高于彗星试验1000、300和100倍;对Aems试验不敏感的重金属、四氯化碳、氟化钠等重组细胞株具有较高的检测灵敏性。10μmol/L的氯化镉可诱导内源性GADD153mRNA和萤光素酶活性表达增加,相关分析表明两者具有良好的相关性(r2=0.9539)。[结论]重组细胞株GADD153-LUC细胞可快速检测环境中痕量污染物的DNA损伤效应。

基于健康风险评估的镉健康风险区划管理方法探讨

镉污染日趋严峻,严重影响人们的生活质量,给人们带来很大的经济损失。健康风险评估的最终目的是风险管理,健康风险区划即借助于风险评估进行。因此,基于健康风险评估,采用定性和定量相结合的方法,对镉健康风险区划管理进行初步探讨;借助于镉污染地区的实际应用,为健康风险区划管理的进一步推广提供依据。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定蜂王浆中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留

采用高效液相色谱-串联质谱（HPLC—MS／MS）法同时测定了蜂王浆中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留。样品加入阴性蜂蜜和水均质后，采用乙酸乙酯提取，蒸发浓缩，C18固相萃取净化。HPLC分离后，串联质谱法以电喷雾负离子多反应监测方式（MRM）进行定性定量分析。通过对固相萃取条件的优化，大大减小了基质的干扰。氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素的检出限分别为0．1ng／g、0．2ng／g和0．5ng／g，平均回收率为89．9%～98．4％，相对标准偏差（RSD）均小于8．2％。

武汉市自来水处理工艺过程中内毒素的含量

目的了解武汉市主要饮用水中内毒素的污染现状以及自来水常规处理工艺对内毒素的去除效果。方法于2008年3月,采集以长江为水源的平湖门水厂和以汉江为水源的宗关水厂原水、一次加氯、混凝沉淀、过滤、二次加氯(出厂水)、管网末梢水环节水样进行检测。采用《中华人民共和国药典》(2005版)中细菌内毒素鲎试剂检查法的光度测定法检测水样中内毒素的含量。结果平湖门水厂的长江原水的内毒素含量范围为(100.98±2.75)EU/ml,管网末梢水中内毒素含量范围为(18.53±0.01)EU/ml;宗关水厂的汉江原水的内毒素含量范围为(86.40±1.69)EU/ml,管网末梢水中内毒素含量范围为(41.68±1.94)EU/ml。平湖门、宗关水厂自来水常规处理工艺对内毒素的总去除率分别为81.65%和51.76%。结论自来水处理工艺对内毒素有去除效果,但出厂水内毒素含量仍较高。

原花青素对饮食所致高脂血症大鼠心血管的保护作用

[目的]研究原花青素对饮食所致高脂血症大鼠心血管的保护作用机制。[方法]对5周龄Wistar大鼠按体重随机分成4组:正常饮食组(对照组,C组)、高脂饮食组(高脂模型对照组,H组)、高脂饮食+20mg/kg原花青素(药物高剂量,HD组)、高脂饮食+10mg/kg原花青素(低剂量组,LD组)。喂饲4周后测定各组大鼠血脂、氧化应激和心肌瘦素、Na+-K+-ATPase酶和Ca2+-Mg2+-ATPase酶水平。[结果]与对照组相比,H组血清总胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)及丙二醛(MDA)水平显著升高,血清SOD、GSH-Px、CAT三种抗氧化酶水平明显降低,心肌Na+-K+-ATPase酶、Ca2+-Mg2+-ATPase酶和MDA水平降低;HD和LD组血清SOD、GSH-Px、CAT以及心肌Na+-K+-ATPase酶、Ca2+-Mg2+-ATPase酶和瘦素水平显著升高,MDA含量降低,但对血脂水平无显著影响。[结论]原花青素具有心血管保护作用,其作用机制至少包括抗氧化作用和增加心肌细胞对瘦素的调节敏感性两个方面。

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞DNA损伤的拮抗作用

[目的]研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝L-02细胞株DNA损伤的拮抗作用。[方法]观察5、 10、25 mg/L的LSPC与200 mmol/L乙醇共同作用于L-02肝细胞24 h后,对细胞生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量,DNA损伤修复酶:[切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、O6- 甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)、错配修复hMSH2基因、DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)]表达水平等方面的差异进行比较。[结果]与乙醇组相比,5、10 mg/L的LSPC使细胞的生存率分别由73．14%上升到84．79％和90．52％,细胞SOD、CAT、GSH含量增加(P<0．01),MDA含量减少(P<0．01);有效降低细胞DNA损伤程度(P<0．05)。5 mg/L的 LSPC可显著增加乙醇处理细胞中ERCC1、DNA-PKcs、hMSH2的表达(P<0．01),但对MGMT的表达无影响(P>0．05), 10、25 mg/L的LSPC与乙醇组比较,所有4种DNA损伤修复酶的表达均无明显改变。[结论]适量的LSPC可拮抗乙醇诱导的L-02肝细胞的DNA损伤作用。

纳米二氧化钛对氯化镉所致人胚肝L-02细胞毒性作用的影响

[目的]研究纳米二氧化钛(nano-TiO_2)对氯化镉(CdCl_2)所致人胚肝细胞毒性作用的影响。[方法]不同浓度的CdCl_2(0.001、0.01、0.1μmol/L)单独或与0.01 mg/L nano-TiO_2混合后,分别作用于人胚肝L-02细胞24h,观察各组L-02细胞的DNA损伤水平,以及hMsh2基因(hMsh2)、O^6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)和DNA依赖蛋白激酶复合物催化亚基(DNA-PKcs)的mRNA表达水平。[结果]与相应剂量的CdCl_2单独染毒组比较,nano-TiO_2与各浓度的CdCl_2混合染毒组L-02细胞的DNA损伤加重(P<0.05),hMsh2表达水平明显上升(P<0.05),MGMT表达水平无显著性变化,nano-TiO_2与0.01、0.1μmol/L的CdCl_2混合染毒组DNA-PKcs的基因表达水平明显上升(P<0.05)。[结论]0.01mg/L的nano-TiO_2可以加重各浓度CdCl_2对L-02细胞的DNA单链损伤,从而使CdCl_2对L-02细胞毒性作用增强。

基于PCR技术的绿脓杆菌快速检测方法研究

目的:应用PCR技术来实现绿脓杆菌的快速鉴定。方法:绿脓杆菌特异性的PCR扩增引物是根据已报道的ETA基因序列设计的,同时考察该PCR方法的特异性和敏感性。另外,一种不提取基因组DNA而直接制备简易模板的直接PCR方法在本研究中也被尝试。结果:PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析,仅在包含绿脓杆菌基因组DNA的样品中得到单一条带。直接PCR方法也成功扩增出同样的条带,而整个过程在4 h内完成。结论:这种扩增绿脓杆菌ETA基因的直接PCR方法对绿脓杆菌的鉴定来说是一种快速、特异、敏感和相对简单的方法。

焦炉工GSTM1、GSTT1基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关系

[目的]探讨GSTM1和GSTT1基因多态性与外周血淋巴细胞DNA损伤的关系。[方法]选择某焦化厂248名焦炉作业工人,其中炉顶区作业工人99人,炉侧作业78人,炉底作业71人。120名与之相匹配的对照人群选自该厂非职业多环芳烃(PAHs)暴露者。采用单细胞凝胶电泳实验观察外周血淋巴细胞DNA损伤;运用多重PCR方法检测GSTM1、GSTT1基因多态性。同时,通过问卷调查的方式了解被调查者的年龄、吸烟、饮酒和个人职业暴露史。[结果]炉顶和炉侧区作业工人外周血淋巴细胞的Olive尾矩(OliveTailMoment,OTM)经对数转换后分别为1.37±1.16和1.46±0.97,均明显高于炉底区和对照组(OTM分别为0.98±1.18、0.56±0.99),差异显著(P<0.05)。经调整年龄、吸烟、暴露等级等因素后,焦炉作业组中GSTM1(-)基因型和GSTM1(+)基因型的外周血淋巴细胞DNA损伤分别为1.36±1.15和1.15±1.10,差异无显著性(P>0.05)。其中炉顶区作业工人GSTM1(-)基因型OTM明显高于GSTM1(+)基因型(分别为1.56±1.08、1.09±1.25,P<0.05)。此外,在焦炉作业组中,GSTM1(-)GSTT1(+)基因型OTM为1.44±1.13,明显高于GSTM1(+)GSTT1(+)基因型0.94±1.06,差异具有显著性(P<0.05);GSTM1(+)GSTT1(-)和GSTM1(-)GSTT1(-)基因型OTM分别为1.36±1.10、1.28±1.17,两者差异无显著性。[结论]在炉顶作业工人中,GSTM1基因型可以明显影响外周血淋巴细胞DNA损伤程度。GSTM1和GSTT1基因存在交互作用,同时携带GSTM1(+)和GSTT1(+)基因型的焦炉作业工人淋巴细胞DNA损伤水平较低。

基于纳米金固定大肠杆菌O157:H7酶免疫传感器的研究

目的：建立一种快速检测大肠杆菌O157：H7的新型酶免疫传感器。方法：用静电吸附作用和抗原抗体特异性反应将大肠杆菌O157：H7单克隆鼠抗固定在辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG／纳米金修饰的玻碳电极表面，制备用于检测大肠杆菌O157：H7的酶免疫传感器。通过循环伏安法和恒电位法测定大肠杆菌O157：H7被固定在电极表面引起的电信号改变进行定量分析。结果：在含0．1mol／L PBS（pH7．4），1 mmol／L二甲氨基甲基二茂铁，0．2mmol／L H2O2，30℃的底液中该酶免疫传感器的检出限为1×10^2cfu／ml，检测线性范围为1×10^3～1×10^5 cfu／ml，相关系数为r=0．997。结论：该传感器制备方法简单，具有灵敏度高、检测时间短、操作简单等优点，在临床医学和环境监测中具有较好的应用价值。

戊二醛含量测定中干扰因素的研究

消毒技术规范规定的戊二醛含量化学测定法即盐酸羟胺法受很多操作条件影响。为了解影响的因素以便有效控制,采用调节测定中的pH和添加干扰物质的途径,对现行测定方法进行了改进观察。结果,在戊二醛含量相同的条件下,其测定值随pH的增加而逐渐降低,pH对戊二醛含量测定值有明显的干扰作用。在被测戊二醛溶液中加入亚硝酸钠和碳酸氢钠各5.0 g/L后,戊二醛含量测定值降低了21.77%,反映出此两种物质的加入对戊二醛含量测定有干扰作用,但是该种干扰可通过本底扣除法消除;戊二醛含量测定值与碳酸氢钠加入量呈负相关,即Y=-0.8119X+19.895(R2=0.9135)。18 g/L戊二醛消毒液中含有1.8 g/L甲醛可使其含量测定值增加到21.23 g/L,显示出甲醛对戊二醛含量测定的有干扰作用。结论,戊二醛含量的化学测定受pH值和某些物质的干扰,戊二醛含量测定应严格控制测定条件。

过氧乙酸消毒液空气消毒效果观察

目的 了解过氧乙酸消毒液现场和模拟现场杀菌效果、为防制疾病传播，合理使用消毒剂提供依据。方法 模拟现场杀菌试验和现场杀菌试验。结果 模拟现场，50、25、10mg／L三种浓度的过氧乙酸水溶液按8ml／m^3用量喷雾，作用20min，空气中细菌的杀灭率分别为99．95％～100％、98．74％～99．30％、85．05％～86．73％；过氧乙酸水溶液最低有效作用浓度为50mg／L。现场杀菌试验，2000mg／L过氧乙酸水溶液用气溶胶喷雾器按8ml／m^3用量喷雾，作用30min，消亡率为95．52％～99．36％。结论 合理使用过氧乙酸空气消毒剂，可以减少空气消毒剂对消毒物体刺激和损坏，并可节省消毒成本。

p,p'-DDE,β-BHC单独及其联合对睾丸Sertoli细胞JNK MAPK信号转导通路机制的研究

目的:研究2,2-双-(对氯苯基)-1,1-二氯乙烯(p,p'-DDE)和β-六氯化苯(β-BHC)单独作用及联合作用对离体培养大鼠睾丸Sertoli细胞c-jun氨基末端激酶(JNK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的作用机制。方法:从大鼠睾丸组织中分离Sertoli细胞进行离体原代培养2d,设溶剂(DMSO)为对照组,分别以终浓度为10、30、50μmol/L的p,p'-DDE,β-BHC及二者联合染毒Sertoli细胞24h,采用二步RT-PCR法检测Sertoli细胞JNK、c-junmRNA的表达水平。结果:①染毒24h后,对照组及10、30、50μmol/Lp,p'-DDE组Sertoli细胞JNKmRNA灰度比值分别为0.068±0.001、0.164±0.002、0.207±0.006、0.499±0.017;c-junmRNA灰度比值分别为0.122±0.002、0.157±0.006、0.218±0.007、0.289±0.004,随着p,p'-DDE剂量的增加,JNK、c-junmRNA的表达水平均逐渐升高,且10、30、50μmol/L组与对照组差异存在显著性(P<0.05)。β-BHC及联合染毒各组随着染毒剂量的增大,Sertoli细胞JNK、c-junmRNA表达水平也显著增加,且呈剂量依赖性关系(P<0.05)。②p,p'-DDE、β-BHC二者联合作用与单独作用相比,10μmol/L的p,p'-DDE,β-BHC及二者联合染毒组,JNKmRNA灰度比值分别为0.164±0.002、0.149±0.003、0.178±0.004;c-junmRNA灰度比值分别为0.157±0.006、0.131±0.004、0.172±0.002,联合染毒组JNK、c-junmRNA灰度比值均显著高于两者单独作用且存在显著性差异(JNK:P<0.05;c-jun:P<0.01);30、50μmol/L染毒剂量组JNK、c-junmRNA表达水平联合染毒组也显著高于单独染毒组(JNK:P<0.05,c-jun:P<0.01),而各DMSO对照组之间mRNA表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:p,p'-DDE、β-BHC及二者联合作用于睾丸Sertoli细胞后,JNK及其下游的c-jun基因转录水平均明显升高,且联合作用比单独作用更加明显。

源水和氯化饮用水中有机提取物对HepG2细胞DNA损伤的诱导作用及对gadd153基因表达的影响

背景与目的研究源水和氯化饮用水有机提取物对DNA的损伤作用以及对gadd153启动子和mRNA表达的影响。材料与方法应用彗星试验检测源水和氯化饮用水有机提取物对HepG2细胞的DNA损伤作用;构建含有gadd153启动子和荧光素酶报告基因的载体pGADD153-Luc,以检测荧光素酶活性(发光检测荧光素酶活性)反映gadd153启动子的活性,RT-PCR检测gadd153基因mRNA的表达。结果彗星试验显示在10、100ml/ml培养基剂量组源水和氯化饮用水有机提取物处理24h后,OTM(Olive尾距)显著高于对照组(P<0.01),并有良好的剂量反应关系(源水r=0.882,P<0.05;氯化饮用水r=0.940,P<0.05);氯化饮用水中有机提取物诱导OTM显著高于源水(P<0.05);荧光素酶表达在源水和氯化饮用水有机提取物各剂量组均显著高于对照组(P<0.01)并有良好的剂量反应关系(源水r=0.814,P<0.05;氯化饮用水r=0.921,P<0.05);相关分析表明荧光素酶活性与OTM呈正相关(源水r=0.980,P<0.01;氯化饮用水r=0.995,P<0.01);RT-PCR结果显示在100ml/ml培养基剂量组,源水和氯化饮用水中有机提取物诱导gadd153mRNA表达显著增加(P<0.05),并与OTM有良好的相关性(源水r=0.864,P<0.05;氯化饮用水r=0.897,P<0.05)。结论源水和氯化饮用水有机提取物可诱导HepG2细胞DNA损伤,导致gadd153启动子区的激活,并进一步调控下游gadd153基因mRNA的表达。

双酚A对乳腺癌MCF-7细胞的增殖作用及对其癌基因EphA2和c-Myc的mRNA表达水平的影响

[目的]研究具有类雌激素效应的环境污染物双酚A(BisphenolA,BPA)对雌激素受体(EstrogenReceptor,ER)阳性的乳腺癌MCF-7细胞增殖作用及对其中癌基因EphA2和c-MycmRNA表达的影响。[方法]以10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L等不同浓度的BPA对体外培养的MCF-7细胞进行染毒,通过细胞计数检测细胞增殖情况并使用RT-PCR方法测定细胞EphA2和c-Myc的mRNA表达量。[结果]BPA作用MCF-7细胞后可引起细胞增殖,各浓度组均高于溶剂对照组(P<0.05);并使其中的EphA2和c-Myc的mRNA表达呈现上升趋势,各浓度组c-Myc的mRNA水平要高于溶剂对照组(P<0.05)。[结论]BPA引起的细胞增殖可能是通过EphA2和c-Myc等癌基因的表达增加而引起的,并且BPA对细胞的增殖作用有一定的浓度范围。

B(a)P作用下的人支气管上皮细胞DNA损伤与XPA、XPC蛋白表达的关系

[目的]探讨苯并(a)芘[B(a)P]作用下人支气管上皮细胞16HBEDNA损伤与着色性干皮病A、C蛋白(XPA,XPC)表达的关系。[方法]用B(a)P(0、1、2、4、8、16、32、64μmol/L)浓度染毒细胞24h,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测B(a)P对细胞活性的影响。用彗星试验检测细胞DNA损伤并以Olive尾矩值(OTM值)评价DNA损伤程度。并用Western-blot检测XPA和XPC蛋白的表达水平。[结果]B(a)P浓度>4μmol/L的各组细胞活性均显著降低(P<0.05)。各染毒组细胞DNA损伤程度则显著增高(P<0.05)。不同浓度B(a)P染毒细胞中XPA、XPC蛋白的表达量有差异。在1μmol/L B(a)P染毒组,可检出XPA蛋白表达水平增高,但随着染毒浓度增加其表达量逐渐降低(P<0.05)。与对照组相比各染毒组细胞XPC的表达均显著降低(P<0.05)。回归分析显示XPA与OTM值之间决定系数为0.572,XPC与OTM值之间为0.852。[结论]B(a)P引起的XPA和XPC蛋白表达水平的变化与DNA损伤之间存在高度相关。

苯并(a)芘作用下的人支气管上皮细胞DNA损伤与XPF、XPG和ERCC1蛋白表达的关系

目的探讨苯并(a)芘(Benzo[a]pyrene,B[a]P)作用下人支气管上皮细胞(16HBE)DNA损伤与着色性干皮病F、G蛋白[Xeroderma pigmentosum group F,G(XPF,XPG)]和切除修复交叉互补蛋白1(Excision repair cross-complementing 1,ERCC1)表达的关系。方法用B[a]P(0,1,2,4,8,16,32,64μmol/L)染毒16HBE细胞24h,用噻唑蓝(Methylthiazoletetrazolium,MTT)法检测B[a]P对细胞的毒作用。用Comet实验检测细胞DNA损伤并以Olive尾矩值(Olive Tail Moments,OTM)评价DNA损伤程度。用Western-blot检测XPF、XPG和ERCC1蛋白的表达水平。结果B[a]P浓度大于4μmol/L的各组细胞活性均显著性降低(P<0.05)。各染毒组细胞DNA损伤程度则明显增高(P<0.05)。在不同浓度B[a]P染毒细胞中目的蛋白的表达量有差异。在1μmol/L和2μmol/L B[a]P组细胞XPF、XPG表达增高,且2μmol/L组XPG水平与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),但随染毒剂量增大(32,64μmol/L),XPF和XPG表达量明显降低(P<0.05)。ERCC1表达随染毒剂量的增高而逐渐增加,在16μmol/L达到峰值,随后逐步下降。回归分析显示XPF、XPG和ERCC1的表达与OTM值之间决定系数分别为0.691、0.745和0.642。结论B[a]P引起的XPF、XPG和ERCC1蛋白表达水平的变化与DNA损伤之间存在密切关系。