屏障系统动物实验室建设与管理的思考与实践

根据医学院校屏障系统动物实验室的特点,结合本单位的工作实际,从4个方面探讨对屏障系统动物实验室建设和管理方面的问题,对完善管理方法,推进管理规范化等探索实践进行了探讨。

大鼠尾部血管的解剖结构与鼠尾的生理功能探讨

目的通过对实验大鼠尾部血管的解剖研究,进一步明确其动静脉走行和分布,以加深对其生理功能的理解,为动物实验技术的规范化和实验动物模型设计提供解剖学基础。方法选用成年SD大鼠,采用红蓝两色颜料对尾部血管进行灌注后解剖、腹主动脉生理压力甲醛灌注固定后尾部组织切片、动脉显微血管造影,三种方法配合互相印证。结果证实了大鼠尾部浅层3套纵向动静脉系统,明确了背侧的动静脉链状结构,填补了深层血管分布的空白。提出了动静脉血管分布不匹配特点及其生理基础,明确了尾部血管的双层笼状沟通结构。结论本研究准确地显露了大鼠尾部丰富的血管结构,揭示了鼠尾深层血管系统的存在,并提出双层框架血管结构的理念,为探讨其生理功能的相关研究,避免重大损伤、后肢缺血代偿反应等打下良好的基础。

SPF动物的使用管理探讨

SPF动物（specific pathogen free animals）的使用管理主要包括其饲养管理和实验管理。饲养管理主要包括动物饲料、饮用水、垫料和废料管理及屏障系统管理和设备管理；实验管理主要是制度建设，保证其落实到位，包括饲养管理人员和科研人员的健康状况检查制度、培训制度和持证上岗制度、SPF动物的临床检查制度、使用登记和核查制度、实验人员出入登记制度、奖惩制度、GLP和SOP制度建设等。要加强实验设计质量管理和实验实施管理。

大动物准清洁系统试验研究设施探讨与实践

国内屏障系统啮齿类大、小鼠动物饲养及动物实验设施通过二十余年的努力,从布局、工艺、管理流程等诸多方面日臻完善。然而大动物饲养和动物实验设施特别是广泛应用于非临床药理、毒理学的犬、猴等设施在open system和barriersystem之间徘徊的局面。本文在中国国内首次提出了专门用于大动物饲养和实验的准清洁级系统的概念(Advanced C lean ingSystem)并用于客观具体的设施设计、施工和使用中。

5-氟尿嘧啶磁性白蛋白亚微球在正常及荷瘤小鼠体内的药代动力学与组织分布

5-氟尿嘧啶磁性白蛋白亚微球(5-flourouracilmagneticalbumindeuto-microsphere,5-Fu-MAD)是新型靶向给药系统,考察正常及荷瘤小鼠体内的代谢和分布为其临床应用提供参考。采用HPLC方法测定生物样品中5-Fu浓度。采用原子吸收光谱法测定组织铁浓度。结果显示,小鼠尾静脉注射5-Fu原料药及5-Fu-MAD后,于不加或加磁性支架条件下,药代动力学过程均呈一级二室动力学模型。小鼠静脉注射5-Fu各制剂组后5-Fu和Fe的分布以肝脏、肿瘤组织、脾脏、肺脏为高,肾脏、心脏次之,脑组织和肌肉组织最低。正常小鼠的肌肉组织和荷瘤小鼠肿瘤组织给予磁性支架后,分布显著增加(P<0.01)。可见,5-Fu-MAD在小鼠体内的分布具有缓释特征,且对加入了磁性支架的组织具有靶向性。

大鼠长期毒性试验质量控制探讨

大鼠长期毒性试验是费时长、参加人员多、消耗财力和物质大、操作繁琐复杂而又经不起重复的一个高难度研究工作,对其进行质量控制显得尤为重要。主要包括试验开始前的试验设计质量控制、试验过程中的全程质量控制和试验结束后的资料整理和实验报告质量控制。

蝙蝠葛酚性碱对犬冠状动脉结扎形成心肌梗死的保护作用

目的 :研究蝙蝠葛酚性碱 (PAMD)对急性心肌梗死的保护作用。方法 :用麻醉犬冠状动脉结扎造成心肌梗死模型 ,设立PAMD 3 5和 7mg·kg-1两剂量组 ,地奥心血康 (DAXXK) 4 0mg·kg-1阳性对照组 ,伪手术组及模型对照组。观察各组心电图ST段 ,血清LDK和CK ,以及心肌梗死范围的变化。结果 :PAMD 7 0mg·kg-1组30min时 ,在对抗ST段上移及降低LDH活性上优于DAXXK 4 0mg·kg-1组 (P <0 0 1) ,降低CK活性的作用与DAXXK相当 (P >0 0 5 ) ;7 0mg·kg-1PAMD组降低梗死范围与DAXXK 4 0mg·kg-1组作用无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 :PAMD对结扎犬冠脉造成急性心肌梗死有保护作用。

不同途径给以环磷酰胺诱发BALB/c小鼠免疫低下的结果比较

随着免疫学、免疫约理学、保健食品功能学的发展，免疫功能低下模型在新型药物、保健功能食品的研究中，起到越来越重要的作用。环磷酰胺是一种细胞毒性药物，它的毒性主要表现在对活化增殖的细胞上。它能杀死有丝分裂和进入循环周期的细胞，具有较强的免疫抑制作用，故在免疫毒理学研究中，常以环磷酰胺作为细胞免疫、体液免疫和巨噬细胞测定的刚性对照物。本文报告环磷酰胺腹腔注射和皮下注射两种给药方法所致的免疫功能低下程度之比较结果。

蝙蝠葛酚性碱对犬血流动力学及冠脉循环的影响

目的 研究蝙蝠葛酚性碱 (PAMD)对正常麻醉犬血流动力学、冠脉循环及心肌氧代谢的影响。方法 设立生理盐水阴性对照组及PAMD 3 5和 7 0mg·kg- 1 两剂量组 ,在不同时间点观察各组犬血流动力学、冠脉循环及心肌氧代谢的相关指标的改变。结果 与药前相比 ,PAMD两剂量组均可降低左心室收缩压 (LVSP)和±dp dtmax,减慢心率 ,增加心肌氧含量、降低心肌氧利用率 ,且具有增加冠状动脉血流量 ,降低冠状动脉阻力和外周阻力的作用。对血压、心输出量和左室舒张末压 (LVEDP)无显著影响。结论 PAMD能改善血流动力学。

8种典型选矿药剂对小鼠的急性毒性研究

为了解8种典型选矿药剂的毒性,选用小鼠灌胃给药做急性毒性试验。在预试验中确定死亡率为0和100%的剂量后,按改良寇氏法计算其中6种药剂LD_(50),并做出比较。最大耐受量法测定其中2种药剂急性毒性作用。正戊基黄药等6种药剂的小鼠灌胃给药范围为101.7～1611 mg/kg时LD_(50)由大到小的药剂依次为丁胺黑药、十二胺、正戊基黄药、水杨羟肟酸、H_(205)和Z_(200);醚胺GE-601、氧化石蜡皂的最大耐受量分别大于5 000 mg/kg、2 703 mg/kg。根据急性毒性分级标准,醚胺GE-601属于实际无毒的物质,正戊基黄药、丁胺黑药、十二胺、氧化石蜡皂、水杨羟肟酸属于低毒物质,而H_(205)和Z_(200)则属于中等毒物质。

香烟烟雾暴露对中国树鼩CXCR4、MHC-1、TNF-α、MCP mRNA表达的影响

目的观察香烟烟雾暴露对中国树鼩(Tupaia belangeri chinensis)血液、肺脏、心肌及支气管趋化因子受体4(CXCR4)、主要组织相容性复合体-1(MHC-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白(MCP)mRNA表达的影响,探讨香烟烟雾暴露与炎性相关细胞因子表达的关系及中国树鼩作为实验动物的应用价值。方法以灵长目中国树鼩为实验动物,动式染毒装置进行烟雾暴露12周,采集股静脉血0.5 mL,经股动脉放血合并颈椎脱臼法处死中国树鼩后,分别取肺、心脏及支气管组织100 mg。以GAPDH为内参,实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定吸入组及非吸入组中国树鼩的外周血、肺脏、心肌及支气管组织CXCR4、MHC-1、TNF-α、MCPmRNA的表达。结果烟雾暴露12周后吸入组中国树鼩外周血和支气管CXCR4表达量明显低于对照组(P<0.05),吸入组中国树鼩外周血中TNF-α表达量明显高于对照组(P<0.05);MHC-1、MCPmRNA表达量未见明显变化。结论香烟烟雾暴露可引起CXCR4和TNF-α的表达变化。中国树鼩对香烟烟雾暴露较敏感,是具有开发应用价值的灵长目实验动物。

药物安全评价中试验用犬的选择相关性研究

目的分析比较实验犬灌胃前后的心电图、血常规、血清生化指标的变化。方法选用武汉本地杂交犬与产自上海、广东的Beagle犬,检测灌胃前后心电图、血液学常规、血清生化指标。结果心电图:与广东Beagle犬比较,灌胃前武汉本地杂交犬,心率、QRS间期明显低,P-R、QT间期明显高,灌胃给水4周后,P-R明显高,QRS、QT间期明显低或低;与上海产Beagle犬比较,心率、P-R、QT、QRS间期明显高,灌胃给水4周后,QT间期明显低。血液学常规:与上海Beagle比较,杂交犬灌胃前血红蛋白含量、红细胞数、中性白细胞数明显高,灌胃给水4周后,白细胞数明显低;与广东犬比较,灌胃前血红蛋白含量、红细胞数明显高,灌胃给水4周后,红细胞数明显高。血液生化指标:与上海产Beagle犬比较,武汉本地杂交犬在灌胃前ALB、Cre、GLU、ALT、AST明显高或高,ALP、BUN、CHOL明显低;与广东Beagle比较,灌胃前AST、TP、ALB、GLU明显高,而ALP明显低。灌胃给水四周后差异趋势与灌胃前检测结果具备一定的相似性。结论在药物安全性评价中应普及使用Beagle犬,使用杂交犬必须选用按封闭群生产方式的育成犬作为实验用犬,且每个剂量组的样本数宜相对较多以便筛选。

氟桂利嗪口服液的人体相对生物利用度研究

用高效液相色谱 ( HPL C)法测定氟桂利嗪血药浓度。Spherisorb- C18为固定相 ,流动相为甲醇∶醋酸缓冲液( 8∶ 2 ,p H5 .5 ) ,UV2 10 nm检测 ,线性浓度范围 5～ 10 m g/ ml,方法回收率 80 .4 %～ 83 .2 %。应用该法研究了氟桂利嗪口服液的人体相对生物利用度为 ( 10 9.4± 6.8) % ,结果表明 ,两种制剂的 AU C、Tmax、Cmax之间无显著性差异。

复方亚甲蓝注射液浸润麻醉对小鼠痛阈的影响

目的研究镇痛实验中以痛阈值作为检测麻醉效应指标的可行性及复方亚甲蓝注射液的镇痛效应。方法100只小鼠随机分为5组:生理盐水组、利多卡因组、复方亚甲蓝注射液高、中、低剂量组。将小鼠固定于掌心,两电极分别刺于小鼠尾尖1/3处及左下肢足部,开通测量仪(量程0.5~1 mA,阶程6),观察记录发生第一嘶叫反应的电流值,作为动物给药前之基础痛阈值。选用4#针头随机区组设计注射于小鼠足跟偏内上部胫骨周围间隙内,再按照基础痛阈测定同样抓取小鼠并同部位刺激,观察记录给药后10 min、30 min1、h2、h、4 h、6 h8、h1、0 h、12 h2、4 h2、6 h之第一嘶叫反应的电流值,以电流的变化值及实际电流值为观察指标。结果利多卡因给药后10min痛阈值即显著升至最高点,其后逐步降低,其测定痛阈值与基础痛阈值及生理盐水组的同点测定痛阈值比较有极显著性差异的维持时间2~3 h左右,4 h后基本无镇痛效应;利多卡因给药后10 min、30 min1、h2、h痛阈相对基础痛阈的变化值与生理盐水组的同点测定痛阈相对基础痛阈的变化值比较有极显著性差异,维持时间2~3 h左右,4 h后变化值无统计学的意义;药后2 h^26 h各复方亚甲蓝组动物的痛阈值与利多卡因组比较有极显著性差异(P<0.01或P<0.05)。结论2%利多卡因(0.05 mL/只)镇痛作用持续时间小于4 h,而0.33%1、.1%和3.3%的复方亚甲蓝镇痛作用持续10~26 h。结果证明复方亚甲蓝具有及时而持久的局部镇痛效应。

环磷酰胺致BALB/c小鼠肝损伤的组织学研究

目的 研究环磷酰胺（CTX）对BALB/c小鼠肝组织的病理作用。方法 BALB/c小鼠腹腔注射CTX 15 mg·kg^-1·d^-1连续8 d,停药8 d后取肝组织,HE染色镜检,观察病理学改变。结果 CTX致肝组织广泛性的中度-重度水变性;肝窦受挤压,结构不清;灶状坏死,炎性细胞浸润。结论 CTX对BALB/c小鼠肝脏存在组织结构损害。

幽门螺杆菌临床分离株的随机扩增多态性DNA指纹图分析

目的 :建立武汉及周边地区幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染病人胃内分离的Hp的DNA指纹图谱 ,并进行数理统计分析 ,探讨Hp基因型与疾病的相互关系 ,为临床诊断、防治及致病机制提供理论与实践基础。方法 :采取随机扩增多态性DNA指纹法 (RandomamplifiedpolymorphicDNA ,RAPD)对 4 8例病人Hp基因组DNA进行PCR反应 ,其随机引物为 :12 90 5’ GTGGATGCGA 3’。反应产物经 2 %琼脂糖凝胶电泳 ,成像存盘。用统计分析软件 (Statisticanalysissoftware,SAS)对HpDNA指纹图的相似性以及与疾病的相关性进行分析。结果 :每个菌株都有其独特的DNA指纹图 ,显示其基因的多态性 ;计算机聚类分析显示 :HpDNA指纹图可分为两大类 ,其与宿主疾病之间有一定程度的相关性 (P <0 0 5 )。结论 :(1)RAPD对HpDNA扩增结果是稳定、可靠的 ,是一种较好的分型方法。 (2 )幽门螺杆菌感染所致疾病可能与其基因型相关。

氟尿嘧啶磁性清蛋白亚微球的急性毒理学实验研究

目的检测氟尿嘧啶磁性清蛋白亚微球（5-flourouracil magnetic albumin deuto-microsphere，5-Fu-MAD）的急性毒性，为进一步研究其长期毒性以及临床试验打下基础。方法100只小鼠随机分为2组，每组50只，分别平分为5个小组。实验组分别给予5-Fu-MAD 750,875，1000，1125，1250mg·kg^-1，以25μL·g^-1体重注射，对照组分别尾部静脉注射5-Fu注射液91，130,186，266,425mg·kg^-1，观察小鼠生活情况。结果对照组小鼠静脉注射5-Fu注射液半数致死量（LD50）为194．54mg·kg^-1，其95％可信区间为161．2—234．8mg·kg^-1。实验组小鼠静脉注射5-Fu-MAD最大耐受剂量为1250mg·mL^-1。两组小鼠主要脏器未见明显病理改变。结论5-Fu—MAD的最大耐受剂量是治疗剂量的5倍，急性毒性较低，提示其应用安全。

WHPI经腹腔注射和静脉注射对小鼠的急性毒性研究

目的考察WHPI经腹腔注射和静脉注射对小鼠的急性毒性作用。方法按中药新药毒理学研究指南的要求与方法,用SPF级昆明小鼠以腹腔注射、尾静脉注射两种给药途径进行了WHPI的急性毒性试验,用Bliss法计算其半数致死量(Lethal Dose 50,LD50)。结果受试物腹腔注射给药对昆明小鼠的LD50为30.08 mg/kg;尾静脉注射给药对昆明小鼠的LD50为71.45 mg/kg。结论 WHPI腹腔注射对昆明小鼠的毒性比静脉注射的毒性高。这可能是WHPI经肝代谢后的产物毒性比静脉注射时高,提示临床上宜采用静脉注射途径。

直视下行大鼠气管插管的方法比较

目的探讨更简单有效的大鼠气管插管方法。方法将40只大鼠随机分成经额镜辅助组和经颈透照直视组两组,比较插管时间、插管次数、插管一次成功率及拔管1周后存活率。结果经颈透照组的插管操作时间、插管次数、一次插管成功率均优于经额镜辅助组(P<0.05),拔管1周后的存活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用自制器材的经颈透照直视插管法优于经额镜辅助插管法,自制器材值得推广应用。