转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白基因的同供体大鼠树突状细胞对胰岛移植物存活的影响

目的 探讨转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(转染CTLA4Ig基因)的同供体大鼠DC细胞对同种大鼠胰岛移植的影响。方法 链尿菌素(STZ) 60mg/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠糖尿病模型,胶原酶法分离、Ficoll 40 0密度梯度离心法纯化胰岛,GM CSF +IL 4诱生培育的方法,获得高纯度的DC ,含目的基因CTLA4Ig重组腺病毒AdvCTLA4Ig ,转染同供体DC细胞,与胰岛细胞同时移植于糖尿病受体大鼠肾包膜下,免疫组织化学、Dot ELISA、逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测CTLA4Ig基因在实验组和对照组DC细胞中的表达,并检测受体大鼠的血糖浓度变化,同时观察受体存活情况。结果 实验组DC细胞有CTLA4Ig表达,而对照组DC细胞没有CTLA4Ig表达,实验组正常血糖维持时间(17.3±2 .4)d较对照组(10 .1±1.5 )d、空白对照组(8.3±1.2 )d显著延长,实验组、对照组和空白对照组受体大鼠存活天数分别为(3 4.5±3 .4)d、(14 .7±2 .3 )d和(11.2±1.4)d ,实验组高于对照组(P <0 .0 1)。结论 表达CTLA4Ig基因的DC细胞可能诱异胰岛移植免疫耐受。

转染CTLA4Ig基因的树突状细胞抑制反应性T细胞增殖

目的 探讨转染人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白（CTLA4Ig）基因的树突状细胞（DCsRev）对反应性T细胞的作用。方法 通过重组逆转录病毒将目的基因CTLA4Ig转染到大鼠骨髓来源的树突状细胞（DCs）中。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）检测CTLA4Ig在DCs中的表达；采用混合淋巴细胞反应（MLR）检测DCsRev对反应性T细胞的作用。结果 检测结果证实CTLA4Ig基因成功转染至DCs。DCsRev的数量以及用DCsRev预处理反应性T细胞的时间长短与抑制MLR中T细胞增殖有一定的效应关系。当DCsRev数量在10^3～10^4。之间时，其抑制率最高，抑制率可达到为69．12％；用DCsRev预处理反应性T细胞12 h时，其对MLR中T细胞增殖的抑制率最高，为98．3％，12 h以后，随着预处理时间的延长，抑制率却不断下降。经DCsRev诱导的大鼠体内脾淋巴细胞在MLR中增殖低下。结论 转染CT-LA4Ig基因的DCs不但丧失了刺激MLR的能力，并且能够抑制MLR中反应性T细胞的增殖，提示DCsRev可能诱导抗原特异性T细胞的免疫耐受。