大鼠镉性肾损伤与急性肾功能衰竭的关系

目的初步探讨镉性肾损伤与急性肾功能衰竭(ARF)的关系。方法将健康雄性SD成年大鼠36只随机分为6组,高、中、低剂量染镉组大鼠连续5d腹腔注射1.6、0.8、0.4mg/kgCdCl2;肾衰模型组大鼠禁水24h后,50%甘油以10ml/kg于两后肢肌肉注射,注射后自由饮水;镉+甘油组大鼠连续5d以0.8mg/kg腹腔注射CdCl2,禁水24h后,于第5天以10ml/kg两后肢肌肉注射50%甘油,注射后自由饮水;对照组大鼠连续5d腹腔注射生理盐水后以生理盐水代替甘油造模,其余处理同肾衰模型组。分别测定各组血肌酐、尿素氮(BUN)、尿β-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)、肾皮质镉含量,并用光镜、电镜观察肾组织形态学变化。结果3个染镉组中,只有高剂量组血肌酐及尿素氮水平较对照组升高(P<0.05)。尿NAG动态观察发现,0.8、1.6mg/kg剂量组分别在第3、5天出现峰值(与对照组比较P<0.05)。肾组织形态学观察结果与生化指标变化基本一致。但上述指标变化均未达到肾衰模型组水平。而镉+甘油组出现较肾衰模型组更为严重的变化,主要表现在镉+甘油组大鼠尿NAG浓度在染镉后第5天(甘油染毒第1天)为肾衰组的3倍多,到镉染毒后第7天(甘油染毒后第3天),仍为近2倍(P<0.01)。同时镉+甘油组较肾衰组近曲小管细胞损伤严重。结论单独大剂量急性染镉不能导致急性肾功能衰竭(ARF),但一定剂?

拟除虫菊酯诱导大鼠脑组织神经生长因子的表达

目的 为了探讨拟除虫菊酯对中枢神经系统损害的机理。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,斑点杂交 ,流式细胞术及免疫组织化学技术同时检测了氯菊酯 (PM )和溴氰菊酯 (DM )对大鼠脑组织中神经生长因子 (NGF)表达的影响。结果4种方法检测结果均表明 1次大剂量 (PM1组 ,4 0 0mg·kg- 1)和连续 5d较小剂量 (PM2组 ,2 0 0mg·kg- 1)PM处理后大鼠脑组织NGF的mRNA和蛋白表达增多。其中RT PCR和斑点杂交结果表明各组大鼠大脑皮层和海马的NGFmRNA水平均有显著升高 ;其蛋白表达水平的变化与mRNA升高基本一致。而DM对NGF的影响与PM稍有不同 ,虽然大剂量(DM1组 ,2 5 .0mg·kg- 1) 1次ip和连续 5d较小剂量 (DM2组 ,12 .5mg·kg- 1)ip均可引起NGFmRNA表达的增加 ,流式细胞术结果却表明DM2组海马的NGF蛋白表达水平无明显的增加 ;免疫组化亦表明DM2组皮层及海马各区NGF的蛋白表达均无明显升高。结论 两型拟除虫菊酯对NGF蛋白表达的诱导作用不同 。

溴氰菊酯对大鼠脑组织G蛋白转换的影响

目的 研究溴氰菊酯对大鼠脑组织中G蛋白在活性状态和非活性状态之间转换的影响。方法 雄性SD大鼠经溴氰菊酯腹腔注射处理 ,用Westernblot方法检测大鼠脑中GAP的含量 ,用酶学方法检测大鼠脑NDK的活性。结果 溴氰菊酯可以增加大鼠脑组织中GAP的含量 ,升高NDK活性。

软骨藻酸对人神经胶质瘤细胞的氧化损害及血红素氧化酶-1表达的诱导

目的探讨软骨藻酸(domoicacid)对人神经胶质瘤(H4)细胞的氧化损害及对血红素氧化酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)蛋白的诱导。方法对体外培养的H4细胞分别给予0.064、0.64、6.4μmol/L软骨藻酸,24h后测定各剂量组与对照组细胞生存率、丙二醛(MDA)含量,并采用免疫组化和流式细胞术检测HO-1蛋白表达。结果在四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)实验中H4细胞生存率随软骨藻酸剂量增大而下降,呈明显的剂量依赖关系。各剂量组MDA含量与对照组差异均有显著性(P<0.01),6.4μmol/L组MDA含量与0.064μmol/L组差异也有显著性(P<0.01)。免疫组化显示,对照组细胞胞浆HO-1弱阳性染色,0.064、0.64、6.4μmol/L组分别呈低、中、高密度阳性染色。流式细胞术显示各剂量组HO-1荧光强度与对照组差异均有显著性(P<0.01),6.4μmol/L组与0.064μmol/L组差异也有显著性(P<0.01)。结论软骨藻酸对H4细胞具有细胞毒作用和氧化损害作用,并可能通过氧化损害间接诱导HO-1蛋白表达增多。

诱导血红素氧化酶表达对乙醇所致人原代肝细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨乙醇暴露与诱导血红素氧化酶(HO 1)表达之间的关系。方法 经体外灌流、分离培养人原代肝细胞 ,观察 10 0mmol·L- 1乙醇暴露 9h后谷胱甘肽 (GSH) ,谷草转氨酶 (GOT) ,乳酸脱氢酶 (LDH)和丙二醛 (MDA)的变化以反应人原代肝细胞的氧化损伤 ,用RT PCR及Western印迹方法检测乙醇对人原代肝细胞HO 1mRNA及蛋白表达的影响。结果 10 0mmol·L- 1乙醇暴露 9h后可导致人原代肝细胞明显的氧化损伤 ,肝细胞中的GSH明显降低 ,而MDA明显升高 ,GOT和LDH ,此外 ,急性乙醇暴露下 ,HO 1表达开始应激升高 ,随后慢慢降低 ,肝细胞经HO 1诱导剂预处理后再与乙醇作用 ,能减轻乙醇对肝细胞的氧化损伤作用 ,并且这种作用可被HO 1抑制剂所抵消。结论 诱导HO 1对乙醇所致人原代肝细胞的氧化损伤有保护作用。

雌二醇对溴氰菊酯染毒胶质细胞EAAs释放影响

目的 以原代培养的神经胶质细胞为研究对象 ,观察溴氰菊酯对胶质细胞兴奋性氨基酸 (EAAs)释放的影响 ,并探讨内分泌激素雌二醇对溴氰菊酯作用的影响。方法 高效液相色谱 (HPLC)检测不同水平 17β -雌二醇(10 -5、10 -8、10 -11mol/L)对 2× 10 -5mol/L溴氰菊酯染毒大鼠原代神经胶质细胞兴奋性氨基酸释放的影响 ,并观察雌激素受体拮抗剂Tamoxifen对雌激素有无拮抗作用。结果 2× 10 -5mol/L溴氰菊酯可增加大鼠原代胶质细胞谷氨酸 (Glu)释放 ,释放增加率为 82 0 3% ;10 -8mol/L17β -雌二醇可部分抑制溴氰菊酯所致Glu释放增加 ,抑制率为37 77% ;Tamoxifen对雌二醇的作用并无干扰。结论 17β

雌二醇对溴氰菊酯染毒大鼠脑组织神经毒性的影响

目的 以去卵巢大鼠皮层脑片为研究对象 ,观察内分泌激素 17 β 雌二醇对溴氰菊酯 (Deltamethrin ,DM )染毒脑片兴奋性氨基酸递质释放、ATPase活力的影响。方法 高效液相色谱 (HPLC)检测不同水平雌二醇 (10 - 5、10 - 8和10 - 1 1 mol/L)对DM染毒大鼠皮层脑片氨基酸释放的影响 ,化学比色法检测雌二醇对DM染毒大鼠皮层脑片Na+ K+ ATPase、Mg2 + ATPase、Ca2 + ATPase和Ca2 + Mg2 + ATPase活力的影响 ,并观察雌激素受体拮抗剂Tamoxifen对雌二醇作用的影响。结果 2× 10 - 5mol/L的DM处理可增加高钾去极化状态下皮层脑片天冬氨酸 (ASP)和谷氨酸 (GLU)释放 ,3个剂量的 17 β 雌二醇均可抑制DM所致GLU的释放 ,10 - 1 1 mol/L的 17 β 雌二醇可抑制DM所致ASP的释放 ,Tamoxifen可拮抗10 - 8mol/L 17 β 雌二醇对DM染毒脑片EAAs释放的作用 ;2× 10 - 4mol/L的DM可抑制脑片 4种ATPase活力 ,10 - 5和 10 - 8mol/L雌二醇可拮抗DM对Mg2 + ATPase、Ca2 + Mg2 + ATPase活力的抑制 ,Tamoxifen对雌二醇的作用未见明显影响。结论 在大鼠皮层脑片中 17 β 雌二醇对DM的神经毒性有一定的保护作用 ,该作用可能部分通过雌激素受体介导产生。

软骨藻酸对H4细胞血红素氧化酶-1的诱导

[目的 ]研究软骨藻酸对H4细胞血红素氧化酶 1(hemeoxygenase 1,HO 1)的诱导。 [方法 ]流式细胞仪检测0、0 .0 64、0 .64、6.4μmol/L软骨藻酸作用细胞 2 4h后HO 1蛋白表达、HO 1mRNA转录和HO 1酶活性。[结果 ]HO 1蛋白表达 :0 .0 64、0 .64、6.4μmol/L浓度组的荧光强度分别为 ( 68.0 7± 7.0 7)、( 81.3 4± 8.64 )和 ( 81.95± 8.3 0 ) ,与对照组 ( 60 .60± 5 .3 6)比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1)。HO 1mRNA转录 :0 .0 64 μmol/L组相对表达量为 ( 0 .43 9± 0 .0 0 7) ,与对照组( 0 .411± 0 .0 0 8)比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;0 .64 μmol/L和 6.4μmol/L组分别为 ( 0 .5 0 6± 0 .0 13 )和 ( 0 .63 1± 0 .0 3 6) ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。HO 1酶活性 :0 .0 64mol/L组为 ( 3 89.3 2± 3 4.75 )pmol/(mg·h) ,与对照组 ( 3 2 6.75±2 7.0 5 )pmol/(mg·h)相比 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;0 .64和 6.4μmol/L组分别为 ( 4 61.75± 2 7.84)和 ( 687.5 0± 3 5 .93 )pmol/(mg·h) ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。前述 3指标结果均有随剂量浓度增加而逐渐升高的趋势。 [结论 ]软骨藻酸能诱导H4细胞HO 1蛋白表达、HO 1mRNA转录和HO

氯菊酯诱导脑源性神经生长因子的表达

目的 为了进一步阐明氯菊酯 (PM)的神经毒作用机制。方法 用逆转录 -PCR(RT -PCR)、斑点杂交、流式细胞仪及免疫组织化学技术检测了氯菊酯对大鼠脑组织中脑源性神经生长因子 (BDNF)表达的影响。结果 大鼠一次大剂量〔PM1,40 0mg/ (kg·d) ,ip〕或反复小剂量〔PM2 ,2 0 0mg/ (kg·d) ,ip〕给予氯菊酯后 ,明显诱导其大脑皮层和海马的BDNFmRNA水平 :RT -PCR表明PM1和PM2组大鼠皮层和海马BDNFmRNA诱导率分别为 67% ,81%和 5 3 %和5 4%。斑点杂交亦显示 ,PM1和PM2组皮层和海马BDNF的水平分别高出对照组 5 7% ,78%和 3 6% ,5 0 % ,且均表现为对皮层的诱导强于海马。而BDNF蛋白表达结果表明 ,氯菊酯对蛋白水平的影响与BDNFmRNA并不一致 :流式细胞分析表明PM1和PM2组大鼠皮层BDNF的蛋白表达均明显升高 ,尤其是PM2组 ,其BONF蛋白水平是对照组的 2 3 7% ,然而海马BDNF蛋白量无明显改变 ;免疫组化结果与流式细胞分析基本一致 ,仅PM1组海马CA1区蛋白表达较对照组高2 1%。

软骨藻酸对H4细胞氨基酸释放和Ca^(2+)浓度的影响

目的 研究软骨藻酸 (domoicacid)对H4细胞的兴奋性、抑制性氨基酸释放和胞内游离Ca2 + ( [Ca2 + ]i)浓度的影响。方法 应用高效液相色谱 (HPLC)和荧光分光光度计检测 0、0 0 64、0 64和 6 4μmol/L软骨藻酸作用于细胞 2h后的兴奋性、抑制性氨基酸释放和 [Ca2 + ]i浓度。结果 天冬氨酸和谷氨酸 :中、高剂量组均高于对照组 ,差异有显著性(P <0 0 5 ) ;甘氨酸 :仅高剂量组高于对照组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;γ 氨基丁酸 :低、中和高剂量组均低于对照组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;兴奋性氨基酸 /抑制性氨基酸 :低、中和高剂量组均高于对照组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。胞内[Ca2 + ]i :低、中和高剂量组分别为 ( 2 0 8 65± 11 0 1)、( 3 42 3 1± 15 0 8)和 ( 5 81 3 6± 17 2 4)nmol/L ,高于对照组 [( 14 3 2 5±11 97)nmo1/L] ,差异有显著性 (P <0 0 1)。兴奋性氨基酸与 [Ca2 + ]i浓度有显著的正相关性 (r =0 93 2 0P <0 0 1)。结论 软骨藻酸能引起H4细胞兴奋性和抑制性氨基酸释放和胞内 [Ca2 + ]i变化 。

血红素氧化酶在软骨藻酸对细胞DNA损伤中的作用

目的 研究血红素氧化酶 (hemeoxygenase ,HO)系统在软骨藻酸 (domoicacid ,DA)对H4细胞DNA损伤中的作用。方法 应用单细胞凝胶电泳法 (SCGE)分别测定 0、0 0 64、0 64和 6 4μmol/LDA单独及与HO系统的活性阻断剂ZnPP 9(10 - 5mol/L)联合作用于H4细胞 6、12、2 4和 48h后彗星拖尾细胞率及拖尾尾长。结果 彗星拖尾细胞率 :中剂量和高剂量组各时间点均比对照组高 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。中剂量 +阻断剂组各时间点均相应高于中剂量组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。彗星拖尾尾长 :中剂量组 12、2 4和 48h比对照组长 ,2 4、48h比低剂量组长 ,差异均有显著性 (P<0 0 5 )。高剂量组各时间点均比对照组、低剂量组和中剂量组长 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。高剂量 +阻断剂组和中剂量 +阻断剂组 2 4、48h分别高于高剂量和中剂量组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。尾长 时间作Regression分析 ,各剂量组r差异值均有显著性 (P <0 0 1)。结论 软骨藻酸能诱导H4细胞DNA损伤 ,HO系统对这种损伤有一定的保护作用。

软骨藻酸对小鼠脑组织HO-1蛋白表达的影响

目的 研究软骨藻酸 (domoicacid)对小鼠脑组织丙二醛 (MDA)含量及血红素氧化酶 -1(hemeoxygenase-1,HO -1)蛋白表达的影响。方法 小鼠连续 5d腹腔注射软骨藻酸染毒后 ,采用硫代巴比妥酸 (TBA )法测定小鼠脑组织中MDA含量 ,并用免疫组织化学方法检测小鼠脑组织中HO -1分布及表达。结果 低剂量 (1/ 90LD5 0 )组海马、高剂量 (1/ 10LD5 0 )组大脑皮层和海马MDA含量明显升高 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5)。对照组大脑皮层和海马HO -1阳性细胞平均光度 (A)分别为 0 0 953± 0 0 2 52和 0 0 940± 0 0 3 0 4;低剂量组皮层和海马A分别为 0 14 10± 0 0 40 7和 0 14 0 6± 0 0 3 54,与对照组相比 ,有显著性差异 (P <0 0 5) ;高剂量组大脑皮层和海马A分别为 0 162 6± 0 0 3 74和 0 160 4± 0 0 3 2 5,与对照组相比 ,有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 软骨藻酸对小鼠大脑皮层和海马具有氧化损害作用 ,并诱导皮层和海马HO

雌激素与神经毒性

雌激素作为一种内分泌激素 ,在神经系统中发挥着重要的作用 ,除了对性别分化和神经内分泌的调节外 ,还表现出对神经毒性的防护作用。其神经保护作用与雌激素受体途径、调节兴奋性氨基酸受体功能、维持胞内钙稳态、与神经生长因子相互作用、抑制细胞凋亡、调节质膜功能和免疫炎症反应等有关。

杀虫丁亚慢性染毒对小鼠免疫功能影响的研究

观察杀虫丁对小鼠免疫系统的影响,以白细胞总数、免疫器官脏器系数、血清溶血素水平、迟发超 敏足垫肿胀率及碳粒廓清指数为指标。连续天灌胃给药,、剂量,未见对免疫功能的280.2 mg/kg2.0 mg/kg 明显影响,在剂量,可见血清溶血素水平明显降低,表明杀虫丁在该剂量亚慢性染毒条件下对小鼠20 mg/kg体液免疫功能有显著性抑制作用,而对小鼠细胞免疫功能未观察到有明显作用。

雌二醇对溴氰菊酯染毒大鼠皮层突触体神经毒性的影响

目的 观察雌激素对溴氰菊酯染毒动物皮层突触体膜兴奋性氨基酸递质释放和ATPase活力的影响。方法 用高效液相色谱 (HPLC)检测不同水平 17β 雌二醇 (10 - 5 、10 - 8、10 - 11mol/L)对 2× 10 - 5 mol/L溴氰菊酯染毒的去卵巢大鼠皮层突触体氨基酸释放的影响 ;用化学比色法检测 17β 雌二醇 (10 - 5 、10 - 8、10 - 11mol/L)对 2× 10 - 4mol/L溴氰菊酯染毒的去卵巢大鼠皮层突触体Na+ K+ ATPase、Mg2 + ATPase、Ca2 + ATPase、Ca2 + Mg2 + ATPase活力的影响 ,并观察雌激素受体拮抗剂Tamoxifen对雌二醇作用的影响。结果 2× 10 - 5 mol/L溴氰菊酯处理可增加高钾去极化状态下大鼠皮层突触体天冬氨酸 (Asp)和谷氨酸(Glu)的释放 ;10 - 8、10 - 11mol/L的 17β 雌二醇可抑制溴氰菊酯所致高钾去极化状态下突触体Asp和Glu的释放 ,对Asp释放抑制率为 2 8.42 %、2 4.3 6% ,对Glu释放抑制率为 2 1.52 %、14 .57% ;Tamoxifen对 17β 雌二醇的抑制作用未见拮抗。 2× 10 - 4mol/L溴氰菊酯可抑制突触体 4种ATPase活力 ;10 - 5 mol/L雌二醇可拮抗溴氰菊酯对 4种ATPase活力的抑制 ;10 - 8、10 - 11mol/L雌二醇可增加Ca2 + ATPase活力 ;Tamoxifen对雌二醇的拮抗作用仍未见明显影响。结论 17β 雌二醇对溴氰?

溴氰菊酯及6-羟基多巴胺对PC12细胞Nrf2/ARE通路影响

目的探讨溴氰菊酯(DM)与6-羟基多巴胺(6-OHDA)对转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路作用的影响及差异。方法用10μmol/L溴氰菊酯处理PC12细胞1h或用100μmol/L6-OHDA处理PC12细胞17h后,用RT-PCR方法检测细胞Nrf2基因和其驱动的靶基因-γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS,由重亚单位GCSh和轻亚单位GCS1组成)和血红素氧合酶(HO-1)基因 mRNA表达水平,蛋白印迹(Westernblot)方法检测细胞Nrf2蛋白水平,免疫荧光细胞化学技术检测细胞HO-1蛋白水平。结果 DM染毒诱导转录因子Nrf2 mRNA表达、激活Nrf2,Nrf2可能参与DM对Nrf2下游基因GCSh、GCS1以及HO-1表达的调控;6-OHDA能诱导PC12细胞Nrf2 mRNA和蛋白的表达以及激活Nrf2;6-OHDA也诱导细胞HO-1或GCSh mRNA和蛋白的表达。结论 DM与6-OHDA对Nrf2/ARE通路的作用相似,DM是可干扰Nrf2/ARE通路的神经毒物。

溴氰菊酯对γ-GCS活力和谷胱甘肽含量影响

目的探讨溴氰菊酯(DM)对PC12细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)活力和谷胱甘肽(GSH)含量的影响。方法用0、1、10、100μmol/L DM处理PC12细胞6或12 h后用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒性;用0、10、100μmol/L DM处理PC12细胞6或12 h后,超速离心分离细胞胞质碎片,邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱(HPLC)荧光法检测组织中γ-GCS酶活力和GSH含量。结果 100μmol/L DM处理细胞6、12 h的细胞存活率为(0.862±0.053)、(0.746±0.101),均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.001);与对照组γ-GCS酶活力(1.78±0.26)pmol/106细胞.min比较,10、100μmol/L DM处理细胞6 h组γ-GCS酶活力为(1.66±0.20)、(1.73±0.09)pmol/106细胞.min,差异均无统计学意义;与对照组GSH含量(10.18±0.23)pmol/106细胞比较,10、100μmol/L DM处理细胞6 h GSH含量为(10.19±1.18)、(10.26±0.29)pmol/106细胞,差异均无统计学意义;与对照组γ-GCS酶活力(1.94±0.19)pmol/106细胞.min和GSH含量(9.57±0.39)pmol/106细胞比较,10μmol/L DM处理细胞12 h组γ-GCS酶活力(1.73±0.21)pmol/106细胞.min和GSH含量(9.72±0.41)pmol/106细胞差异均无统计学意义,100μmol/L DM处理细胞12 h组γ-GCS酶活力(1.62±0.09)pmol/106细胞.min差异有统计学意义(P=0.006)。结论较高浓度的DM处理细胞较长时间才抑制γ-GCS酶活力,可能与DM的细胞毒性作用有关。

溴氰菊酯对PC12细胞活性氧生成的影响

目的研究溴氰菊酯（DM）对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞活性氧（ROS）生成的影响。方法对培养的PC12细胞分别进行处理：（1）终浓度为0、10和100μmol／L的DM分别处理PC12细胞1、6和12h（两因素析因设计）；（2）终浓度为0、10和100μmol／L的DM分别处理PC12细胞1、6、24h或24、48h；（3）PC12细胞分别在终浓度为10mmol／L乙酰半胱氨酸（NAC）预处理2h、终浓度为500μmol／L的DL-甲硫氨酸磺酰亚胺（BSO）及终浓度为40μmol／L的叔丁基对苯二酚（tBHQ）预处理16h，再给予10μmol／L DM作用6h。所有处理结束时，用2’，7’-二氯荧光黄双乙酸酯（DCFH-DA）探针法测定细胞ROS含量。结果DM诱导ROS生成呈剂量和时间效应关系。10μmol／LDM处理组PC12细胞增加ROS的DCF荧光强度，是溶剂对照组的2．24倍，差异有统计学意义（P〈0．01）。而分别用NAC、BSO及tBHQ预先处理PC12细胞均能明显降低DM所增加的ROS，分别是DM组的22％、62％、38％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论DM能诱导PC12细胞ROS生成增高，胞内巯基水平和抗氧化功能降低可能是ROS生成增高的影响因素。