抑制核转录因子κB活性对SGC7901/VCR细胞mdr1表达及凋亡的影响

目的 观察突变型IκBα抑制核转录因子κB（NF-κB）活性对耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR中多药耐药基因1（mdr1）的表达及细胞凋亡的影响.方法 突变型IκBα真核表达重组体（pCMV4-mIκBα）经脂质体介导转染至SGC7901/VCR细胞中,凝胶迁移率实验（EMSA）检测SGC7901/VCR细胞核内NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测细胞内mdr1的表达,荧光分光光度法检测罗丹明123（Rh123）的胞内聚集,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 pCMV4-mIκBα瞬时转染人SGC7901/VCR细胞24 h后,可显著抑制NF-κB活性达64%,抑制mdr1的表达达75%,使Rh123在细胞内的聚集增加2.3倍.转染24 h后SGC7901/VCR细胞凋亡率为（14.15±1.52）,与对照组（4.37±1.31）比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 突变型IκBα抑制NF-κB活性对耐药胃癌细胞株mdr1的表达有直接抑制作用,并促使耐药胃癌细胞凋亡.

Celecoxib可通过抑制核转录因子-κB活性诱导SGC7901/ADR细胞的凋亡

目的 观察环氧合酶-2（COX-2）特异性抑制剂Celecoxib对胃癌SGC7901/ADR细胞多药耐药1（mdr1）基因表达、核转录因子（NF）-κB激活水平及细胞凋亡的作用.方法 实验分为4组：SGC7901组、SGC7901＋Celecoxib组、SGC7901/ADR组和SGC7901/ADR＋Celecoxib组.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术检测mdr1基因的表达,电泳迁移率实验（EMSA）测定NF-κB激活水平,流式细胞术检测细胞内Rh123聚集及细胞凋亡.结果 SGC7901/ADR细胞中mdr1基因表达和NF-κB活性分别为SGC7901组的2.4倍和3.2倍（P＜0.01）,Celecoxib可显著抑制SGC7901和SGC7901/ADR细胞mdr1基因的表达及NF-κB活性,使SGC7901和SGC7901/ADR细胞内Rh123的聚集分别增加1.2倍和1.9倍,可使ADR诱导的SGC7901和SGC7901/ADR细胞的凋亡率分别提高1.65倍和2.98倍.结论 Celecoxib可能通过抑制NF-κB活性而抑制mdr1基因的表达,进而增加SGC7901/ADR细胞内药物聚集并促进细胞凋亡.

RIZ1基因表达缺陷对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的 观察抑癌基因Rb结合锌指结构基因（RIZ1）表达缺陷对结肠癌细胞增殖和凋亡能力的影响.方法 以表达RIZ1的LoVo细胞和不表达RIZ1的SW480细胞作为研究对象,采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测2株结肠癌细胞的RIZ1基因启动子的甲基化状况;以3×105/瓶为细胞观察单位,5 μmol/L的5-杂氮2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对细胞进行去甲基化处理48 h,用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测RIZ1的mRNA和蛋白表达,观察处理前后的差异;细胞增殖实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡.结果 在SW480细胞中可以扩增出RIZ1基因启动子的甲基化条带,经去甲基化处理后,则能检测出该基因的mRNA和蛋白的表达条带,其增殖速度明显减慢,凋亡率从（4.4±1.7）%增高到（23.8±2.6）%,差异有统计学意义（P＜0.05）,5 μmol/L的5-aza-CdR可显著上调SW480中RIZ1的表达;而LoVo细胞中未检测到基因启动子的甲基化,处理前后其基因表达、增殖和凋亡差异均无统计学意义（P＞O.05）.结论 抑癌基因RIZ1启动子异常甲基化在调节其表达中发挥重要作用,对RIZ1进行去甲基化处理使其重新表达能明显减缓结肠癌SW480细胞的生长,促进其凋亡.