实验性关节炎大鼠外周血CD4^+T细胞固有胆碱能系统研究

目的 探索胆碱能系统在关节炎模型大鼠外周血CD4+T淋巴细胞表达状态及其在关节炎中的免疫调节作用。方法 Ⅱ型胶原乳剂多点皮内注射, 建立胶原性关节炎 (CIA) 大鼠模型, 根据关节炎严重程度将大鼠分为 CIAⅠ和CIAⅡ组。运用流式细胞术和双标记免疫荧光技术检测烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位 (nAChRα7) 及胆碱乙酰转移酶 (ChAT) 在CIA大鼠外周血CD4+T淋巴细胞中的表达, 分析其与外周血 CD4+ T淋巴细胞活化 (表达 CD71)的关系。结果 CIA 大鼠外周血 CD71 +/CD4+ T 淋巴细胞明显多于对照组 (P< 0. 01); CD4+ T 淋巴细胞表达nAChRα7和ChAT明显低于对照组 (P< 0 01), CIAⅡ组又明显低于 CIA Ⅰ组 (P< 0 01)。nAChRα7+/CD4+ 与CD71+/CD4+T淋巴细胞呈负相关关系 (P< 0 05); ChAT+/CD4+ 与 CD71+/CD4+ T 淋巴细胞无相关关系 (P>0. 05)。结论 nAChRα7和ChAT在正常大鼠外周血 CD4+ T淋巴细胞中表达, 并参与免疫细胞活性的抑制性调节,CIA大鼠外周血CD4+T淋巴细胞胆碱能系统功能减弱, 胆碱能系统在自身免疫性疾病中起重要调节作用。

US-FNAC结合CT、CgA和TG免疫组织化学染色在甲状腺髓样癌诊断中的应用

目的探讨超声引导下细针穿刺细胞学(ultrasound-guided fine-needle aspiration cytology,US-FNAC)联合降钙素(calcitonin,CT)、嗜铬素A(chromogranin A,Cg A)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)诊断甲状腺髓样癌(medullary thyroid cancer,MTC)的应用价值。方法对7例US-FNAC诊断且术后组织病理学确诊的MTC临床资料和超声特点、细胞病理学特征进行综合分析。细针穿刺标本采用常规涂片1~2张自然风干后刘氏染色液快速染色,现场进行细胞病理学评判,确保取得满意的细胞量,同时将剩余标本注入液基细胞保存液中保存,采用液基薄层制片,HE染色及CT、CgA和Tg免疫组织化学染色。结果7例MTC细胞均中等量到大量,均有散在突出的大细胞、双核细胞、浆样细胞或核偏位不规则细胞;6例伴梭形细胞,细胞病理学表现与MTC细胞学诊断标准基本相符,CT、CgA胞质均弥漫强阳性表达,Tg阴性,细胞病理学诊断为MTC。结论US-FNAC技术可提高甲状腺结节细针穿刺标本满意度,结合液基薄层制片与CT、CgA免疫组织化学染色可提高MTC术前诊断准确性,对MTC治疗具有重大的临床意义。

加热诱导肝癌细胞系HepA凋亡的研究

用细胞培养结合流式细胞仪检测 ,观察加热不同温度、不同作用时间对肝癌细胞系 Hep A的细胞凋亡的影响。结果发现 4 4℃时处理 1h和 2 h细胞凋亡最明显 ,经方差分析有显著意义 (P<0 .0 5 ) ,更高的温度和更长的作用时间都不能使凋亡率上升。这一结果说明 ,加热处理能诱导肿瘤细胞凋亡 ,但对于不同的肿瘤细胞而言 ,可能存在不同的热疗最佳条件 。

局部解剖学的虚实结合教学方法初步研究

目的采用虚拟仿真技术与传统教学方法结合进一步提高局部解剖学的教学水平。方法将八年制医学生分为两组,分别采用传统教学法和虚拟仿真与传统教学结合法,问卷调查学生对教学的意见反馈,统计分析随堂小测验和期末考试成绩。结果学生对虚拟仿真技术教学的接受程度高,实验组随堂小测验成绩高于对照组,但两组学生期末考试无显著差异。结论虚拟仿真技术与传统教学法结合有利于学生快速理解、掌握局部解剖学的知识点,如进一步深化,有广阔的应用前景。

大鼠睾丸生精细胞共培养系统的建立

目的建立生精细胞体外分化（如减数分裂、精子变态）培养体系,为研究精子发生中各种调控因素的作用提供一个良好的细胞模型。方法取20-22日龄的SD雄性大鼠睾丸,放在预冷的Hanks液中洗2次,用1 mg/mL胶原酶32℃消化15-20 min。然后将睾丸剪碎,重复用1 mg/mL胶原酶消化5-10 min。细胞用含10%胎牛血清及各种营养因子的HamF12/DMEM培养液悬浮,按约2×10^6/cm^2密度分别接种于双室培养槽（双室培养）或放有盖玻片的6孔板（单室培养）中,在32℃、95%空气、5%CO2条件下培养。每日在相差显微镜下观察共培养支持细胞/生精细胞的生长状态,定期进行苏木精-伊红染色、BrdU染色。结果在双室培养2周后,部分生精细胞可见鞭毛出现,培养4周后,培养体系中仍有一定数量的生精细胞附着在支持细胞上,部分生精细胞上可见鞭毛。单室培养的生精细胞在培养第4-5天开始出现明显脱落,培养1周后大多数生精细胞发生脱落死亡,生精细胞上未见鞭毛出现,但在培养体系中可见次级精母细胞及精子细胞。结论应用双室培养,生精细胞可存活达1月之久,而且部分生精细胞尾部出现鞭毛,从形态上发生了减数分裂及精子变态过程。

DNA倍体分析系统在乳腺包块针吸细胞学诊断中的应用

目的用全自动倍体分析系统判别乳腺肿瘤恶性程度。方法对51例妇女乳腺包块行穿刺针吸细胞涂片,做瑞氏染色行常规细胞学检查,用Feulgen染色做全自动DNA图像分析。结果常规细胞学和DNA倍体分析系统对19例良性乳腺疾病诊断一致。常规细胞学可对32例乳腺癌作出正确诊断,而DNA倍体分析系统只诊断出27例乳腺癌。乳腺癌早期,细胞核为2倍体(DNA定量为2 C),核面积略大;而乳腺癌晚期,可出现5 C,甚至9 C异倍体细胞,核面积明显增大。结论DNA倍体分析系统对判断乳腺肿瘤恶性程度有一定意义。

抗CD81抗体与星形胶质细胞增殖抑制的时效关系

目的研究抗CD81抗体作用星形胶质细胞不同时间后对细胞增殖的影响。方法纯化的星形胶质细胞培养12h后,加入抗CD81抗体(4μg/ml),分别作用18、32及96h后,采用MTT比色法检测星形胶质细胞的细胞活性,计算细胞抑制率;用流式细胞仪检测细胞周期时相。结果MTT法检测结果显示与未作用细胞相比,抗CD81抗体作用18、32、96h后,星形胶质细胞增殖显著受抑制,其抑制率分别为11.17%、13.17%、27.49%。流式细胞术检测结果显示抗CD81抗体作用18h后,S期细胞指数与未作用细胞相比,增加了16.09,星形胶质细胞主要被阻滞于S期;作用32h后,G0/G1期细胞指数与未作用细胞相比增加了4.08;96h后,G0/G1期细胞指数与未作用细胞相比增加了5.87,细胞主要滞留于G0/G1期。结论抗CD81抗体作用不同时间均对星形胶质细胞有显著抑制作用,抑制作用随作用时间延长而增强。早期,抗CD81抗体使星形胶质细胞阻滞于S期,随着作用时间的延长,逐渐使细胞阻滞于G0/G1期。

大鼠骨髓间充质干细胞的优化获取及生物学鉴定

目的 优化骨髓间充质干细胞的体外获取方法并鉴定。方法 取幼年SD大鼠骨髓 ,分离骨髓间充质干细胞 ,观察细胞形态特征、生长状况及表面抗原表达。结果 分离培养的细胞有两种不同的形态 ,一种为小梭形细胞 ,一种为大扁平细胞。第 9代以前生长性状稳定 ,增殖能力强 ,细胞倍增时间为 4 8 2h ;超微结构显示为早期幼稚细胞形态 ;免疫细胞化学检测细胞表达CD4 4、CD5 4、CD71,但不表达CD34、CD6 8、层粘连蛋白 ;在有限的传代数内 ,抗原表达无改变 ;与传统方法相比 ,细胞纯度高。结论 分离培养的细胞成分单一 ,具有干细胞特性 。

维生素C、E对氢化可的松所致大鼠学习记忆功能损伤的保护作用

为探讨慢性应激对学习记忆功能过氧化损伤的可能机制以及维生素 C(VC)与维生素 E(VE)对慢性应激所致学习记忆功能损伤的抗过氧化保护作用 ,本实验在反复给予大鼠氢化可的松 (HC)建立慢性应激损伤学习记忆功能的动物模型基础上 ,同时给予 VC、 VE后观察大鼠学习记忆成绩、海马形态以及血、海马超氧化物歧化酶 (SOD)与丙二醛 (MDA)含量的变化。发现长期给予 HC的大鼠 :1在 Y-迷宫中的学习记忆成绩下降 ,15次正确数分别由对照组的 10 .38± 1.4 1、 11.5 0± 2 .0 7降为 7.88± 1.73(P<0 .0 1)、 10 .0 0± 2 .2 0 ;2海马 CA1 区发生大量神经细胞核固缩的形态学改变 ,核固缩细胞数由对照组的 (3.2 0± 2 .4 0 )个 / mm线长度增为 (98.4 0± 2 0 .70 )个 / mm线长度 (P<0 .0 1) ;3血、海马 SOD含量减少 ,由对照组的 (134.5 7± 1.2 6 ) U/ ml、 (71.2 3± 3.73) U/ m l降为 (74 .79± 5 .4 7) U/ ml(P<0 .0 1)、 (42 .87± 2 .76 ) U/ ml (P<0 .0 1) ;MDA含量增加 ,由对照组的 (4.76± 0 .73)μm ol/ L、 (130 .89± 30 .6 2 )μmol/L 增为 (9.4 8± 1.4 5 ) μmol/ L (P<0 .0 1)、 (2 15 .6 2± 6 0 .37) μm ol/ L (P<0 .0 5 )。同时给予 VC、VE可使上述指标明显改善 :学习记忆成绩提高为 11.2 5± 1.2 8(

谷氨酸和白细胞介素-1β致痫大鼠海马cAMP含量的变化

目的 研究谷氨酸和白细胞介素 1β (interleukin 1β ,IL 1β)致痫大鼠海马组织cAMP含量的变化。 方法 40只SD雄性大鼠随机分为 4组 ,均行侧脑室注射 ,A组注射致痫剂量的L 谷氨酸钠 ;B组联合注射IL 1β和阈下剂量的L 谷氨酸钠 ;C组注射白细胞介素 1受体拮抗剂 (IL 1receptorantagonist ,IL 1ra) 3 0min后 ,再联合注射IL 1β和阈下剂量的L 谷氨酸钠 ;D组注射等容量的生理盐水。各组均在注射完毕 3 0min后断头取海马组织 ,采用放射免疫分析法(RIA)测定 4组大鼠海马的cAMP含量。结果 A、B两组大鼠均有明显的痫性发作 ,且海马cAMP的含量均明显高于D组 (P <0 0 5) ,C组大鼠海马cAMP的含量较B组下降 ,并且与D组无显著差异。结论 在谷氨酸和IL 1β的协同致痫活动中 。

慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损及海马神经元突触素和突触后致密物95表达的变化

目的 了解慢性捆绑应激对大鼠学习记忆能力的影响及可能的神经解剖学机制。方法 将大鼠分为应激组和正常对照组 ,应激组大鼠每天捆绑 6h共 2 1d ,然后用Y迷宫对 2组大鼠进行行为检测 ,运用免疫组织化学方法 ,观察 2组大鼠海马突触素和突触后致密物 95 (PSD 95 )的表达 ,并用计算机图像分析仪对免疫反应结果进行处理。结果 应激组大鼠学习记忆能力明显受损 (P <0 0 5 ) ;其海马CA3 区突触素和PSD 95免疫阳性产物较对照组明显减少 (P <0 0 1)。结论 慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损可能与其海马神经元突触素和PSD 95的表达减少有关。

大脑皮质及海马雌、孕激素受体在癫痫发作后的变化

目的 探讨雌、孕激素受体与癫痫发病的关系。方法 采用免疫组织化学 ABC法观察了侧脑室注射谷氨酸致痫雄性大鼠相关脑区雌、孕激素受体的变化。结果 雌、孕激素受体广泛分布于大脑皮质及海马区域 ,定位于胞核及胞浆 ,致痫组大鼠雌激素受体较正常对照组明显降低 ,而孕激素受体较正常对照组明显升高。结论 雌。

TNF-α反义寡核苷酸对马桑内酯刺激的星形胶质细胞的影响

为进一步探讨 TNF- α在星形胶质细胞激活中的作用 ,用 TNF- α反义寡核苷酸抑制由马桑内酯 (coriaria lac-tone,CL )诱导的星形胶质细胞 TNF-α的产生 ,观察 NFκBp6 5核转位和 IκBα降解的变化。在应用 TNF-α反义寡核苷酸后 ,由 CL 刺激引起的 TNFα生成在 2、 4、 12、 2 4 h均显著减少 ,NFκBp6 5核转位在相同的 4个时间点也均受到明显抑制 ,相应胞浆蛋白的 IκBα降解也低于对照组。实验结果表明 :由 CL诱导产生的

戊四氮致痫大鼠脑和脑脊液IL-1β、TNF-α含量的变化及大脑皮质和海马内GFAP和cyclin D1表达

目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)与癫痫发病及其与胶质细胞的关系.方法将SD大鼠随机分为2组:1.生理盐水对照组,腹腔注射与致痫剂等容量的生理盐水;2.戊四氮(PTZ)组,PTZ 60 mg/kg腹腔注射后2、4、8、12 h取脑,每个时间点、每项检测各8只.①采用行为学观察方法观察大鼠的行为表现;②用免疫组织化学方法(SABC法)显示大鼠大脑皮质和海马星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)含量的变化;③用Western blot方法测定大鼠大脑皮质和海马匀浆后细胞周期素D1(cyclin D1)表达的变化;④采用放射免疫分析方法测定大鼠大脑皮质和海马组织匀浆及脑脊液中IL-1β、TNF-α含量的变化.结果 PTZ组大鼠在注射PTZ 1～2 min后出现癫痫发作,而对照组无癫痫发作;注射PTZ 4 h后GFAP含量升高,与对照组比较GFAP表达明显增强(P＜0.05);注射PTZ 2 h后cyclin D1表达增加,与对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05);IL-1β、TNF-α在大鼠大脑皮质和海马组织匀浆及脑脊液中的含量在注射PTZ后均有不同程度的升高,与对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论大鼠癫痫发作时星形胶质细胞被激活,胶质细胞增殖并合成和分泌IL-1β、TNF-α等细胞因子,从而促进癫痫的发生和发展.

鱼源胶原蛋白海绵材料的构建及其生物学性能

目的构建鱼源胶原海绵材料,评价其生物学性能并与哺乳动物来源的胶原海绵材料相比较。方法分别从草鱼鱼皮和猪皮中提取鱼皮酸溶性胶原蛋白(SKA)、鱼皮酶溶性胶原蛋白(SKP)和猪皮酶溶性胶原蛋白(PSP),采用氨基酸组成分析和SDS-PAGE凝胶电泳对胶原蛋白进行结构鉴定;以制备所得的3种胶原蛋白构建柱状胶原海绵材料,采用差式扫描量热仪(DSC)、体外模拟胶原蛋白酶降解、材料拉伸性能分析以及NIH/3T3细胞培养实验评价胶原海绵材料的热稳定性、降解性、生物相容性和材料机械力学性能。结果从鱼皮和猪皮中分离、纯化得到的SKA、SKP和PSP均为典型的Ⅰ型胶原,SKA和SKP的氨基酸组成基本一致,但它们与PSP在氨基酸组成上存在部分差异。SKA和SKP的热变性温度分别为(35.6±0.2)℃和(35.8±0.3)℃,明显低于PSP的热变性温度(41.6±0.3)℃(P<0.05)。与PSP海绵相比,SKA和SKP海绵材料具有更好的耐胶原酶降解能力和材料拉伸强度,但其材料的延展性能低于PSP海绵(P<0.05)。在NIH/3T3培养实验中,3种胶原海绵材料均没有出现抑制细胞生长现象(P>0.05),SKP和PSP在培养48h和96h时展现出促进细胞增殖的能力(P<0.05)。结论鱼源胶原海绵材料在生物学性能上与哺乳动物来源的胶原海绵材料各有优劣,具备应用于生物医学材料领域中的潜在价值。

慢性复合应激对大鼠学习和记忆功能及海马内PKA-C_β表达的影响

目的研究慢性复合应激对成年雄性大鼠学习记忆功能和海马内蛋白激酶A(PKACβ)表达的影响。方法将成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和应激组,应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周,并测定应激第3周和第6周时两组动物的血清皮质酮水平。应激结束后,用Morris水迷宫和Y迷宫测试大鼠空间学习记忆成绩,并采用免疫组织化学方法分析海马各亚区PKACβ的表达。结果应激组大鼠的血清皮质酮水平在第3周明显高于对照组,但在第6周两组差别不明显。在Morris水迷宫测试中,应激组动物寻找隐蔽平台的潜伏期明显短于对照组;Y迷宫测试中,应激组动物寻找安全区的正确率也显著高于对照组。应激组大鼠的海马CA1和CA3区PKACβ的表达水平较对照组明显上调,而齿状回(DG)内PKACβ的表达在两组中无明显差别。结论慢性复合应激可增强大鼠海马依赖的学习记忆能力,PKA可能参与了其增强机制。

高温阻滞HeLa细胞于G_1期并引起G_1期细胞凋亡

目的 探讨高温阻滞 HeLa细胞周期进程及其与细胞凋亡的关系。方法 HeLa细胞经培养增殖后分为37 ℃、40 ℃、43 ℃和45 ℃共4个温度组。每组分别在0 .5、1、2和4 h共 4 个时间点取材, 经 PI染色在流式细胞仪上检测4种温度条件下, 4个时间段时HeLa细胞的凋亡指数和在各细胞周期时相中的指数。结果 37 ℃时, 60%的细胞处于G1期, S期及G2/M期的HeLa细胞分别为17%和18%, 约5%细胞凋亡。40 ℃时, 细胞周期受到抑制,G1期的HeLa细胞明显增加, 达73%, S及G2/M期的细胞分别为9%和15%, 凋亡细胞占3%。43 ℃时, 不但细胞周期受阻, 而且凋亡细胞极明显地增加, 达 19%, G1 期细胞为 61%, S期细胞为 9%, G2/M期细胞为 11%。45 ℃时, 细胞凋亡数和在细胞周期各时相的细胞数与40 ℃时的分布相似。结论 温度升至40 ℃时对HeLa细胞的增殖活动有明显的抑制, 使HeLa细胞滞留于G1期。43 ℃时除了细胞周期受抑制外, 凋亡细胞明显增加, 这可能是由于细胞周期受阻和高温启动了凋亡机制而诱发了细胞凋亡, 凋亡的细胞主要为 G1期的细胞。45 ℃以上的高温对 HeLa细胞的杀伤失去对周期时相的选择性, 均等地杀伤细胞周期各时相的细胞。

地塞米松对星形胶质细胞细胞周期的影响

目的 研究地塞米松 (Dex)对星形胶质细胞细胞周期的影响。方法 纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞分为 4组 ,分别加入不同浓度的Dex (0、 10 -5、 10 -4、 10 -3 mol/L)培养 18h后 ,经流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果 10 -3 mol/L的Dex诱发了星形胶质细胞的凋亡。 4个组的细胞周期各时相的细胞指数 :G0 /G1期依次为86 2 9± 0 2 8、 88 0 6± 0 0 3、 91 2 2± 1 14和 83 10± 2 39,前 3组随浓度增加而增加 ,第 4组例外 ;S期依次为 2 6 7±0 14、 3 5 9± 0 30、 2 97± 0 4 4和 6 0 6± 0 2 5 ,前 3组间无显著差异 ,第 4组明显增加 ;G2 /M期依次为 11 0 3± 0 5 1、8 35± 0 75、 5 81± 0 4 9和 10 84± 1 2 9,前 3组随浓度增加而减少 ,第 4组例外。S期细胞指数与G2 /M期细胞指数之比 ,分别为 1∶4 13、 1∶2 33、 1∶1 96和 1∶1 79,后 3组与第 1组有明显的差异。结论 Dex对星形胶质细胞的细胞周期进程有明显的抑制。治疗剂量的Dex抑制星形胶质细胞由S期向G2 期的转换 ,10 -4mol/L以下的浓度同时抑制其由G1期向S期的转换。大剂量的Dex可引起星形胶质细胞凋亡。

激活的星形胶质细胞分泌TNF-α对大鼠GABA表达的影响

目的 为进一步探讨星形胶质细胞在癫痫发病中的作用。方法 选用肿瘤坏死因子 α (tumornecrosisfac tor α ,TNF α)刺激及TNF α反义寡核苷酸阻断后马桑内酯 (coriarialactone ,CL)刺激纯化培养的海马星形胶质细胞 ,将上述两种条件培养基提取液 (astrocyticconditionedmedium ,ACM) 10 μl分别注入正常Sprague Dawley (SD)大鼠侧脑室 ,观察动物行为与脑电图的变化 ;用免疫细胞化学方法检测大脑皮质与海马中γ 氨基丁酸 (gamma aminobu tyricacid ,GABA)表达水平的改变 ,并做显微图像分析。 结果 ①侧脑室注射TNF α刺激后的条件培养基提取液可引起大鼠Ⅲ级癫痫样发作及典型的尖波、棘波、棘 慢波癫痫样脑电图表现 ,大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GA BA免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值均明显低于对照组 ;②侧脑室注射TNF α反义寡核苷酸阻断后由马桑内酯刺激的条件培养基提取液 ,大鼠无癫痫样行为发生 ,大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GABA免疫反应阳性神经元数和平均吸光度值与对照组无显著性差异。结论 ①激活的星形胶质细胞分泌的TNF α可诱导大鼠癫痫发作。②GABA表达的变化可能与癫痫发作有关。

白细胞介素-1β对Fos蛋白表达的影响及其在癫痫发作中的作用

目的 探讨白细胞介素 1(IL 1)在癫痫发病中的作用。方法 将实验动物分为四组 :A组 (对照组 )、B组 (IL 1β组 )、C组 (IL 1β +Glu ,阈下剂量组 )、D组 (IL 1受体拮抗剂 +IL 1β +Glu ,阈下剂量组 ) ,分别在各组大鼠侧脑室注射上述试剂 ,然后观察动物行为学表现并用免疫组织化学方法检测大脑皮质及海马Fos蛋白的表达。结果 A组无癫痫发作 ,B组发作程度达Ⅱ～Ⅲ级 ,C组为Ⅳ～Ⅴ级 ,D组为Ⅰ～Ⅱ级。在大脑皮质及海马 ,Fos蛋白在A、D组无明显表达 ,B、C组有明显表达 ,而在齿状回 ,A组仅少量表达 ,B、C、D组表达均明显增强。结论 IL 1β可通过其受体介导而诱导癫痫发作 ,与Glu联合应用可促进癫痫发作 ,免疫因子对神经系统的兴奋性有调节作用。