小檗碱对离体阴茎海绵体NO-cGMP信号通路的调控

目的 观察小檗碱(berberine,Ber)对离体的阴茎海绵体平滑肌肌条的舒张效应及其对NO -cGMP通路的调控。方法 采用离体平滑肌张力记录技术观察L- NAME和L -Arg等对Ber舒张离体阴茎海绵体平滑肌肌条的影响;通过逆转录酶链反应技术(RT PCR)检测大鼠阴茎海绵体中eNOS和iNOSmRNA的表达。应过125I放射免疫测定法,测定不同浓度的Ber对离体家兔阴茎海绵体平滑肌组织中cGMP水平的影响。结果 ①在离体阴茎海绵体平滑肌标本上,Ber舒张阴茎海绵体平滑肌的EC50为6 20μmol·L-1②当NO合酶抑制剂L NAME( 0 1mmol·L-1 )存在时,Ber的最大舒张效应由100%降低到84% ±3. 4%。当加入L Arginine(1mmol·L-1 )时,可部分对抗L NAME的作用,小檗碱对海绵体的最大舒张效应可恢复到96% ±4 5%。③Ber( 1, 10μmol·L-1 )浓度依赖性地增强ACh引起的舒张效应,ACh的最大效应分别由72% ±3. 6% 升高到81% ±5. 4%或93%±6. 3%。④Ber孵育海绵体组织mRNA1h和3h。用药后eNOSmRNA表达较之对照组增加,Ber孵育1h组eNOS基因mRNA增加了40%, 3h组增加了66% (n=5,P<0. 01)。但是,相同条件下,Ber对iNOS基因mRNA的相对表达无影响。⑤Ber能直接升高cGMP的含量(P<0 .05),EC50为1. 75μmol·L-1。在cGMP激发剂硝普钠(SNP)存在下。

TGF-β3真核表达载体转染骨髓基质干细胞促进其向软骨分化的实验研究

[目的]构建生长转化因子(TGF-β3)含绿色加强绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP-TGF-β3,然后用该质粒转染骨髓基质干细胞(Marrow stromal cells,MSCs)并促进MSCs向软骨方向分化。[方法]用RT-PCR法从大鼠的胚胎组织中提取TGF-β3的DNA全长,首先连接到pMDl8-T载体,扩增、纯化后经测序公司测序确定插入目的基因序列的正确性,然后再用带有EcoRI、PstI内切酶的引物,从pMD18-T将TGF-β3的全长再次扩增出来,最后将带有酶切位点的TGF-β3的全长插入到真核质粒pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-TGF-β3。体外培养大鼠MSCs,应用阳性脂质体将pIRES2-EGFP-TGF-β3转染到MSCs中,24h后在荧光显微镜下观察蛋白的表达,流式检测MSCs的转染效率;Westen Blot检测TGF-β3蛋白的表达;之后进行MSCs细胞球团培养,分别于第7、14、21、28d检测软骨基质胶原Ⅱ,胶原X和Aggrecan的表达,同时用甲苯胺蓝检测蛋白聚糖(proteoglycan)的表达。[结果]测序结果和酶切鉴定结果表明成功的构建了pIRES2-EGFP-TGF-β3质粒,转染MSCs之后,转染的效率达30%。Westen Blot结果表明TGF-β3获得了成功的表达,在接下来的细胞球团培养过程中,转染后MSCs被成功诱导向软骨分化。

雷公藤内酯醇、顺铂对骨肉瘤细胞体外增殖的影响

目的 研究中药制剂雷公藤内酯醇（TP）和顺铂（PDD）对骨肉瘤（MG63）细胞增殖的抑制作用，寻求骨肉瘤的中西医结合治疗方案。方法 将TP与PDD单独及联合于MG63细胞．采用MTT法检测细胞抑制率。结果 TP在1～125μg／ml的范围内对MG63细胞生长有明显抑制作用；PDD在1～20μg／ml的范围内对MG63细胞生长有明显的抑制作用；TP1～15μg／ml和PDD1μg／ml联合对MG63细胞生长有明显抑制作用；与对照组比较。P均〈0．01；TP10～15μg／ml和PDD1μg／ml联合细胞抑制率明显高于单用；二者单独及联合对细胞抑制率的影响均有明显时间依赖性。结论TP与PDD单独及联合均可抑制骨肉瘤细胞的增殖。

Par-3及Connexin在结直肠肿瘤中的表达变化

目的:研究Connexin、Par-3在结直肠肿瘤组织中的表达变化及特征,探讨其临床意义.方法:选取2007-05/2008-03在本院诊断治疗结直肠肿瘤患者51例,取材肿瘤组织并分为3组:肿瘤组织、癌旁组织(2.0cm)和正常组织(距肿瘤>5.0cm).电镜下观察肿瘤细胞形态变化,HE染色观察肿瘤组织病理变化,免疫组化及Westernblot检测Connexin、Par-3的表达.结果:肿瘤上皮细胞形态不规则,细胞极性消失,细胞器排列紊乱,细胞连接结构破坏,紧密连接、中间连接和桥粒结构基本消失.正常上皮细胞形态规则,细胞极性明显,细胞连接结构完整.免疫组化检测显示:正常肠道组织中Par-3与Connexin的表达水平最高(0.572±0.051,0.485±0.042),癌旁组织次之(0.432±0.049,0.367±0.035),癌组织表达水平最低(0.290±0.041,0.227±0.031);三种组织两两之间的差异性检测有极显著的统计学意义(P<0.05).结论:Connexin和Par-3的表达下调极可能是癌细胞恶变程度加重与复发转移的前兆.

小檗碱对离体家兔阴茎海绵体cGMP和cAMP水平的影响

目的:观察小檗碱(berberine,Ber)对离体家兔阴茎海绵体平滑肌组织中环磷酸鸟苷(cGMP)和环磷酸腺苷(cAMP)水平的影响。方法:采用125I放射免疫测定法,以西地那非(sildenafil,Sil)为阳性对照,测定不同浓度的Ber对离体家兔阴茎海绵体平滑肌组织中cGMP和cAMP水平的影响。结果:Ber能直接升高cGMP的含量(P<0.05),EC50为1.75μmol/L,但对cAMP含量无显著影响。在cGMP激发剂硝普钠(SNP)存在下,Ber和Sil均能浓度依赖性地提高海绵体组织中cGMP浓度(P<0.01),促进cGMP生成的EC50分别为1.32、0.67μmol/L。同样的条件下,Ber和Sil对cAMP的浓度均无显著影响(P>0.05)。在cAMP激发剂前列腺素E1(PGE1)刺激下,Ber和Sil也能够提高海绵体组织中cAMP的浓度(P<0.01),表现出浓度依赖性,促进cAMP生成的EC50分别为4.90、6.53μmol/L。结论:Ber可提高阴茎海绵体平滑肌中cGMP、cAMP的浓度,此效应可能为其舒张阴茎海绵体的潜在机制。

在医学课程教学中建立首席教师负责制的思考

探索在医学课程教学中建立首席教师负责制。设置首席教师对医学教师队伍建设、医学整合课程建设及青年教师教学能力提升十分必要。首席教师应该拥有一定职业素养、学术威望，具备一定的管理经验，投入足够时间与精力；承担组建课程教学团队，明确教学目标，制定课程教学计划与学习指南，评价、反馈与优化课程等责任；在课程教学全过程中发挥核心、示范、督导的重要作用，推进教学改革与创新，保障医学课程教学质量，最终实现卓越医学人才培养目标。

海人酸活化的小胶质细胞H_2O_2、NO的分泌对海马神经元谷氨酸含量的影响

目的:初步探讨海人酸(KA)活化培养的新生SD大鼠小胶质细胞(MG)及其分泌的一氧化氮/过氧化氢(NO/H2O2)、海马神经元、谷氨酸(Glu)之间的相互关系。方法:以KA作为MG的激活剂,以一氧化氮合成酶(NOS)的抑制剂氨基胍(AG)或过氧化氢的水解酶(CAT)作为工具药,先检测原代分离纯化培养的MG在KA激活后及工具药作用后各组条件培养液中NO和H2O2含量的变化,再用各组小胶质细胞条件培养液孵育离体海马神经元,观察其对神经元内Glu表达的影响。结果:KA作用后各组条件培养液中NO和H2O2含量明显升高,经AG或CAT处理后各组条件培养液中NO和H2O2含量显著降低;海马神经元的Glu免疫反应性KA组较对照组明显增强,在AG+KA组和CAT+KA组较KA组明显减弱。结论:活化的MG可能通过氧化损伤机制作为参与癫痫发作一个重要环节,提示采取抑制小胶质细胞活化、减少氧化损伤也可能是癫痫防治研究的一个重要方向。