t(14;21)平衡易位携带者体细胞和生殖细胞的细胞遗传学研究(英文)

15%-20%的妊娠因为自发流产而中止,其中约50%是因为染色体异常所致。夫妇中的一方为平衡的染色体异常携带者时,即可能产生不平衡的配子和胚胎,临床症状可以有不同程度的变化:如不育、反复流产、甚至产出染色体综合症的患儿。以临床接诊的一对具有反复自然流产史夫妇为研究对象,常规进行精液、激素水平检测。取患者外周血淋巴细胞用RPMI1640培养基进行短期培养,经低渗、固定处理制备染色体标本片,对染色体数目和结构进行核型分析。选用特异的21qter和14qterDNA标记作为探针,对患者外周血淋巴细胞中期染色体进行FISH分析。运用FISH技术对患者精子细胞进行研究,配合流式细胞分析技术对精细胞DNA组份进行检测,分析配子中遗传物质的组成及各种类型配子的比例。结果发现女方核型正常为46,XX,男方核型为罗伯逊易位的携带者45,XY,-14,-21,+t(14;21)。患者外周血体细胞的分裂相染色体FISH显示一个细胞中分别存在1个红色的21qter和1个绿色的14qter杂交信号,另外有1个红色和1个绿色信号共同存在于一条由易位形成的亚中着丝粒染色体上。在患者精液样本的精细胞FISH研究中,可以观察到5种不同类型的杂交信号,异常的配子的种类与理论推断相同,但各型所占的比例有其特点,结合精液中精细胞流式细胞术的分析表明,平衡的单倍体配子占71%,不平衡的配子占29%。通过国内外文献资料统计,对罗伯逊易位染色体的常见和罕见类型进行综述,为其生育的临床治疗方案提供建议。

HCV核心蛋白抑制干扰素α诱导的抗病毒基因表达及其机制研究

研究HCV核心蛋白对干扰素α诱导的抗病毒分子PKR和2′-5′OAS表达的影响及其机制。HCV核心蛋白表达质粒转染HepG2细胞,RT-PCR分析PKR和2′-5′OAS的mRNA水平变化,荧光素酶活性分析核心蛋白对ISRE介导的基因表达的影响;Western-blot分析SOCS3、STAT1及STAT1磷酸化水平的变化。在干扰素α刺激情况下,表达HCV核心蛋白的细胞中,PKR和2′-5′OAS的mRNA水平下降,ISRE介导的荧光素酶活性降低,STAT1磷酸化水平下降。此外,核心蛋白表达的细胞中SOCS3的mRNA和蛋白水平明显升高。结果表明,HCV核心蛋白可能通过激活SOCS3、抑制STAT1的磷酸化,从而下调干扰素α诱导的PKR和2′-5′OAS表达。

幽门螺杆菌耐甲硝唑基因分型与耐药性关系研究

目的 :了解幽门螺杆菌 (Hp )对甲硝唑的耐药株状况 ,探讨耐甲硝唑基因分型与耐药性的关系。方法 :分离培养 Hp,以纸片扩散法检测 Hp对甲硝唑的耐药性 ,再用 PCR方法扩增甲硝唑耐药基因 ,用RFLP方法进行基因分型。最后比较基因型与耐药性的关系。结果 :武汉地区人群 Hp对甲硝唑耐药率为67% ,耐药株基因型与耐药性有相关性。结论 :可以以基因型鉴定 Hp对甲硝唑的耐药性 ,此方法 ,稳定可靠。

党参注射液上调抗氧化酶表达作用的实验研究

目的观察和探讨党参注射液对快速老化模型大鼠学习记忆能力及血、肝、肾、海马、脑皮质的抗氧化酶表达的影响。方法采用氟哌啶醇造成大鼠获得性记忆缺失动物模型,用电跳台法观察对照组、模型组、实验组大鼠行为学改变,测定各组大鼠组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果与对照组、模型组比较,党参注射液能使实验大鼠多种组织SOD、GSH-Px显著升高(P<0.001)。结论党参确有上调抗氧化酶表达作用,提示党参能抵抗氧自由基损伤。

rsTRAIL诱导人肺癌细胞系A549的细胞凋亡表达谱变化研究

目的研究一定量的重组可溶性TRAIL作用于人肺癌系A549细胞培养物后,细胞凋亡基因表达谱变化。方法用50μg·L^(-1)的rsTRAIL处理人肺癌系A549细胞培养物,以未经药物处理的A549细胞培养物为对照,应用基因表达谱芯片技术进行细胞凋亡相关基因mRNA表达差异分析。结果经TRAIL处理后,所检测的96个细胞凋亡相关基因中,21个基因表达上调,17个基因表达水平下调。结论经TRAIL处理后,通过细胞凋亡相关的功能基因组群基因表达的正负调控,对人肺癌系A549细胞凋亡信号传导途径进行调控。药物处理不影响p53基因的表达变化。

114对反复流产夫妇的染色体分析

目的:分析反复流产夫妇的异常核型发生率、形成原因及其染色体分析的临床价值。方法:对114对反复流产夫妇行外周血染色体分析。结果:检出异常染色体核型13例,占受检夫妇人数的5·7%,异常核型中,平衡易位最多,占异常总数的76·92%,其中相互易位10例,罗伯逊易位3例;其次为倒位,为6号、9号以及Y染色体的臂间倒位。结论:对于不明原因的反复流产夫妇,染色体分析必须作为常规的检测方法。

不孕不育症与支原体感染关系探讨

目的:探讨不孕不育症与溶脲脲原体(UU)感染之间的关系,建立检测UU的实验方法。方法:采用培养法、聚合酶链反应(PCR)和ABC法分别对78例不孕妇女和61例不育男性患者进行UU检测,并将结果进行比较。选择有孕育史的39例女性和30例男性作为对照。结果:不孕不育组UU阳性检出率明显高于对照组(P<0.05);ABC法对临床标本的检出率与培养法和PCR法比较,在统计学上差异无显著性(P>0.05)。结论:女性不孕和男性不育均与UU感染密切相关,ABC法可作为诊断UU感染的快速检测方法。

弓形虫SAG2基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性研究

目的在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达弓形虫SAG2基因,探索一种新的有效活化机体抗弓形虫免疫反应的疫苗。方法以重组质粒pET23a-SAG2为模板,亚克隆目的片段SAG2至酵母菌分泌表达载体pPICZαA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母菌GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)分析。以整体重组酵母菌作为疫苗腹腔免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的免疫反应。结果成功构建了pPICZαA-SAG2毕赤酵母表达重组质粒。经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为22 ku的蛋白。Western blot显示,22 ku蛋白可被抗-His标签抗体识别。结论在毕赤酵母菌中成功表达了SAG2基因。整体重组酵母活菌具有免疫原性。

卫氏并殖吸虫抗原模拟表位的筛选和免疫反应性分析

目的 初步探讨卫氏并殖吸虫抗原模拟表位的免疫反应性。方法 应用卫氏并殖吸虫病患者血清免疫粗球蛋白(Pw-Ig)筛选噬菌体随机12肽库,对筛选到的抗原模拟表位用ELISA检测其免疫反应性,并与卫氏并殖吸虫成虫抗原(PwA)进行比较。结果 获得的6个卫氏并殖吸虫抗原模拟表位(即P5、P6、P7、P8、P13、P16)特异性和敏感性与PwA相比差异均无显著性(P>0.05),其中P5、P6和P7交叉反应性明显较PwA低(x2=4.630,P<0.05),其余则与PwA无明显差异(P>0.05)。结论 卫氏并殖吸虫抗原模拟表位对卫氏并殖吸虫病的诊断具有潜在的应用价值,有望代替天然抗原用于卫氏并殖吸虫病的诊断。

静脉药瘾者血源性病毒感染调查分析

目的 调查静脉药瘾者主要血源传播病毒HBV、HCV、HGV、巨细胞病毒 (CMV)和单纯疱疹病毒 (HSV)的感染率。方法 采用酶联免疫吸附法、放射免疫法、RT -PCR和荧光定量PCR法 ,检测 40 6例静脉药瘾者血清 ,其中共用注射器者 49 0 1% ,同时设立 10 2例正常健康体检者作为对照。结果 静脉药瘾者HBV、HCV、HGV、CMV和HSV的感染率分别是 3 6 45% ,69 7% ,1 97% ,2 71%和 3 45% ,其中总感染人数 3 2 1人 (79 0 6% )和重叠感染人数12 8人 (3 1 53 % ) ,有共用注射器者单项感染率及重叠感染率均高于未共用者 ,2者有显著性差异 (P <0 0 5)。对照组检测仅发现存在HBV感染 (17 6% ) ,其余病毒感染指标均为阴性。结论 静脉药瘾者血源传播病毒感染率明显增高 ,其中以HCV感染最为突出 。

静脉药瘾者HIV重叠HBV/HCV感染研究

目的探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)重叠乙型肝炎病毒(HBV)/丙型肝炎病毒(HCV)感染时,HIV对机体T辅助细胞亚群的影响及HBV/HCV核酸载量的变化。方法以静脉药瘾者(IVDUs)为研究对象,采用ELISA、免疫层析法和PCR法检测病毒感染指标,用ELISA法和间接免疫荧光法检测T细胞亚群。结果IVDUs的CD3、CD4细胞、干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4产生减少,IVDUs存在HIV感染时CD3、CD4细胞和IFN-γ产生进一步降低,HIV感染与HBV-DNA和HBeAg表达相关。结论IVDUsT细胞亚群功能减弱,HIV促进HBV复制,重叠感染可进一步干扰辅助性T细胞(TH)1/T2细胞平衡,降低机体细胞免疫功能。

一例特殊inv(Y)形成机理的研究

应用双色荧光原位杂交的方法,国内首次报道一例特殊inv(Y)异常的性质,探讨Y染色体倒位结构异常的形成机理以及与习惯性流产临床表型的关系。应用Biotin11dUTP标记的Y染色体短臂断裂点Yp11.3探针(编号889)和CY3标记的Y染色体长臂断裂点Yq12远端异染色质区探针(编号PY3.4),对1例G显带核型分析为[46,XY(90%)/46,X,inv(Y)(p11.3;q12)]的平衡易位携带者进行双色荧光原位杂交研究。双色FISH结果显示,该易位携带者异常核型比例为22%,稍高于G显带分析中确定的比例。而且,除G显带检测出的倒位类型外,又有两种类型的倒位,其中涉及到常规显带技术难以检测出的染色单体型倒位。3种倒位类型的存在说明该患者inv(Y)断裂点呈不均一性。FISH技术是一种能准确可靠检测出染色体倒位形成的重要手段。

重组TRAIL诱导肺腺癌细胞系细胞凋亡的实验研究

目的研究重组可溶性TRAIL作用于人肺癌系A549细胞培养物后,细胞凋亡的形态变化和凋亡率测定。方法MTT比色法测定重组TRAIL对肺腺癌A549细胞的生长抑制率。TRAIL处理前后细胞核、质的形态学变化。经不同浓度重组TRAIL处理后A549细胞的双色荧光变化。定量重组TRAIL与亚毒性浓度的CDDP联合使用,对肺腺癌A549细胞生长抑制率和凋亡率的影响。结果重组TRAIL对A549细胞生长有明显的抑制作用,TRAIL100μg.L-1作用24h后,抑制率达到41.6%。细胞形态学观察显示,A549肺腺癌细胞经50μg.L-1TRAIL处理24h后,可观察到典型的细胞凋亡特点。3.3mg.L-1的CDDP与50μg.L-1重组TRAIL合用,A549细胞凋亡率高达75.2%。结论重组TRAIL具有明显的诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡的作用;化疗药物CDDP能加强重组TRAIL的抗肿瘤活性。

双歧杆菌对小鼠黑素瘤B16细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨双歧杆菌对小鼠恶性黑素瘤B16细胞的增殖及细胞周期的影响。方法:用MTT比色法测定B16细胞活力,用H-E染色法观察B16细胞形态,用流式细胞术测定B16细胞周期。结果:1×109cfu/ml的双歧杆菌作用B16细胞24h后,细胞增殖抑制率为36.69%;1×108cfu/ml的双歧杆菌作用B16细胞72h后,抑制率为63.47%;由此可见,双歧杆菌对B16细胞具有显著的增殖抑制作用。经双歧杆菌处理后,B16细胞核浆比例下降,细胞变小,核仁减少,说明B16细胞胞质和细胞核都趋于成熟化;经双歧杆菌处理后B16细胞周期阻滞于G1期[对照组和处理组G1期细胞比例分别为(41.22±1·15)%和(67·25±3.13)%],但凋亡作用不明显[处理组凋亡率为(1.87±0.04)%]。结论:双歧杆菌通过影响细胞周期抑制B16细胞的生长。

Survivin靶向siRNA抑制大肠癌细胞增殖的作用

目的构建survivin靶向si RNA重组表达载体,研究其对人大肠癌细胞生长的抑制作用。方法构建sur-vivin靶向si RNA并转染结肠癌细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测survivin的表达,采用MTT法检测si RNA对细胞增殖的抑制作用。结果经酶切鉴定和测序结果证实survivin靶向si RNA重组表达载体构建成功,它对大肠癌细胞survivin mRNA和蛋白的表达抑制率分别为36.33%和44.65%,肿瘤细胞的生长受到明显抑制。结论survivin靶向si R-NA构建成功并能显著抑制survivin基因的表达。

原位反转录PCR技术及其应用的研究进展

多聚酶链式反应(ploymease chains reaction,PCR)是80年代以来广泛应用的体外液相基因扩增技术,具有高度特异性和敏感性,能对正常和许多疾病的靶序列进行分子水平的分析.但PCR需要对细胞或组织加以破碎以分离核酸,因此不能将扩增的结果直接在组织中定位,即难以确定靶序列所在的细胞和组织类型,这是PCR技术的一个明显的局限性.

CTLA4Ig修饰树突状细胞对实验动物淋巴细胞增殖及胞毒效应的影响

目的 :探讨CTLA4Ig修饰的DC对实验动物免疫功能的影响。方法 :将经CTLA4Ig基因修饰或未修饰DC腹腔注射C5 7BL 6致敏小鼠 ,以致敏或未致敏C5 7BL 6单个核细胞作为反应细胞 ,以未修饰DC细胞及修饰DC为刺激细胞 ,共培养6天 ,采用MTT比色法检测细胞增殖 ,乳酸脱氢酶法测定细胞毒活性。结果 :CTLA4Ig融合蛋白对未修饰DC致敏或未致敏小鼠的同种细胞刺激的增殖反应有明显的抑制作用。CTLA4Ig修饰DC诱导不同组小鼠淋巴细胞增殖反应均明显降低 ,CTLA4Ig融合蛋白对CTL细胞毒活性有显著抑制作用。CTLA4Ig修饰DC对不同组小鼠CTL细胞毒活性均具有抵抗作用 ,未修饰DC细胞对未致敏小鼠以及未修饰DC对致敏小鼠CTL细胞毒活性敏感。结论

结直肠癌MMP-7的表达及对微血管生成和肿瘤转移的影响

目的 探讨结直肠癌基质金属蛋白酶 7(MMP 7)的表达及对微血管生成和转移的影响。方法 应用免疫组织化学SP法 ,检测 5 6例结直肠癌组织及 8例正常组织MMP 7的表达和微血管密度 (MVD)及其与临床病理参数的关系。结果 在 5 6例结直肠癌组织中MMP 7的阳性表达率为 73.2 % ,MVD值为 36 .4 1± 5 .76 ,与对照组比较差异有极显著性意义(P <0 .0 1)。MMP 7的表达与淋巴结转移、Dukes分期有相关性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;结直肠癌的MVD值与分化程度、Dukes分期、淋巴结转移均有显著相关性 (P <0 .0 1) ;MMP 7表达阳性的结直肠癌组织MVD值明显高于MMP 7表达阴性者 (P <0 .0 1)。结论 MMP 7的表达和微血管生成与结直肠癌侵袭转移密切相关 ,联合检测MMP 7和MVD对结直肠癌的治疗、预后判定有一定的价值。