原花青素的药理学研究进展

综述近几年来国内外对原花青素在抗氧化、保护心血管、调节免疫活性、保护肝肾功能、抗诱变、抗病毒、抗癌、抗溃疡、抗微生物、促进毛发生长等生物药理活性的研究进展。

慢性缺氧对大鼠肺内动脉平滑肌细胞Kv1.3、Kv2.1、Kv3.1钾通道基因在急性缺氧时表达的影响

目的与方法 :用半定量RT -PCR方法 ,研究慢性连代缺氧对大鼠肺内动脉平滑肌细胞 (PASMC)Kv1 3、Kv2 1、Kv3 1钾通道基因在急性缺氧时表达变化的影响。结果 :①正常及慢性缺氧鼠PASMC中均有Kv1 3、Kv2 1、Kv3 1基因表达 ;②急性缺氧可使PASMC中Kv2 1、Kv3 1mRNA表达明显上调 ,其mRNA分别由 0 6 4 6± 0 0 92、0 782± 0 10 4升高到 1 0 5 9± 0 134、0 985± 0 116 (P <0 0 1) ;③慢性缺氧后复氧 12h再急性缺氧 6h ,PASMCKv2 1mRNA、Kv3 1mRNA水平均降低 ,其中Kv2 1mRNA由 1 0 0 8± 0 117下降到 0 6 4 9± 0 0 97,差异有极显著意义 (P<0 0 1)。结论 :Kv2 1、Kv3 1基因可能是缺氧反应基因 ,慢性缺氧可改变PASMC的Kv2 1、Kv3 1钾通道基因对急性缺氧的反应 ,使其由表达上调转变为下调 ,可能因而降低此钾通道在HPV中的作用。

人脐血来源神经元样细胞的分离与鉴定

目的 探讨人脐血单个核细胞 (MNCs)体外培养后的神经元特有分子表达和形态特征。 方法 密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞 ,部分接种于培养瓶内 ,部分细胞接种在 6孔培养板内。倒置显微镜下观察培养细胞形态变化。RT PCR方法检测MNCs培养前后神经细胞标志物nestin、NF M及MAP2mRNA的表达 ,培养 14d后行免疫细胞化学鉴定。 结果 培养前脐血MNCs胞体小呈圆形 ,神经干 前体细胞特异性抗体nestin阳性细胞、神经元特异性抗体MAP2和NF M阳性细胞散在分布 ,阳性率分别为 1 5 %、3 4 %和 2 5 %。培养 14d后 ,倒置显微镜下可见一些有多个粗长突起的细胞群 ,相邻细胞突起连成网状 ;免疫细胞化学检测MAP2、NF M染色阳性细胞成片状分布 ,阳性率分别为 2 7 6 %和 2 1 7%。RT PCR检测脐血单个核细胞nestin、NF M及MAP2基因表达呈阳性 ,培养 14d后上述基因表达上调。 结论 脐血细胞中可能沉寂有神经 (干 )前体细胞 ,经体外培养后能分化为具有一定形态的类神经细胞。

Anisomycin过度激活丝裂原活化蛋白激酶使tau发生过度磷酸化(英文)

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的病理特征之一是神经元内存在神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),后者是由过度磷酸化的微管相关蛋白tau形成的双股螺旋细丝(pairedhelical filaments,PHFs)构成。为了探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在微管相关蛋白tau磷酸化中的作用及机制,本实验用0.1μg/mL、0.2μg/mL和0.4μg/mL三种不同浓度的MAPK激动剂anisomycin处理小鼠成神经瘤细胞株(mouse neuroblastoma cells,N2a),检测MAPK活性的变化及其与tau蛋白多个AD相关位点过度磷酸化的关系,并检测糖原合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的活性变化。结果显示,anisomycin以剂量依赖的方式激活MAPK活性,但免疫印迹结果显示tau蛋白的Ser-198/199/202位点和Ser-396/404位点的过度磷酸化只在anisomycin浓度为0.4μg/mL时出现,三种浓度的anisomycin均未引起tau蛋白Ser-214位点磷酸化的改变;同时,GSK-3活性在anisomycin为0.1μg/mL时没有明显变化,当anisomycin浓度升高到0.2μg/mL和0.4μg/mL时出现明显增高,而PKA的活性没有明显的改变。使用GSK-3的特异性抑制剂氯化锂(LiCl)则完全阻断MAPK被过度激活导致的tau蛋白磷酸化水平的增高,而同时MAPK活性不受影响。以上结果提示:过度激活MAPK可以导致tau蛋白Ser-198/199/202和Ser-396/404位点过度磷酸化,其机制可能涉及MAPK激活GSK-3的间接作用。

谷氨酸及其受体拮抗剂对大鼠海马CA3区诱发电位的影响

目的 探讨谷氨酸及其受体拮抗剂对正常和脑缺血大鼠海马CA3区神经元突触传递功能的影响。方法 在体记录正常大鼠海马CA3区诱发的群峰电位 (populationspike,PS) ;结扎大鼠双侧颈总动脉 ,造成急性不完全性全脑缺血 ,观察PS幅度的变化 ;采用局部微量给药 ,观察药物对PS幅度的影响。结果 ①Glu 5、1 0、2 0nmol注入后 ,PS的幅度均升高 ;当给予Glu 5 0nmol时PS的幅度则显著降低。②急性不完全性全脑缺血 (结扎双侧颈总动脉 )后 ,PS的幅度亦显著降低。③谷氨酸受体拮抗剂MK 80 1 5 0nmol能降低正常大鼠的PS幅度 ,能部分改善脑缺血引起的PS幅度降低 ,并能减弱 1 0nmolGlu升高PS幅度的作用和 5 0nmolGlu降低PS幅度的作用。结论 谷氨酸在一定浓度范围内可增强大鼠海马CA3区的突触传递功能 ,其受体拮抗剂MK 80 1对高浓度谷氨酸和急性脑缺血所致CA3区突触传递功能减弱有明显的改善作用。

3、4-二羟基苯乙酮对大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾电流的影响

目的 研究 3、4 二羟基苯乙酮 (3、4 Dihydroxyace tophenone,DHAP)对钾通道的作用。 方法 建立大鼠肺内动脉平滑肌全细胞膜片钳方法并观察 3、4 二羟基苯乙酮对大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾离子通道的作用。结果 ①将平滑肌细胞钳制在 - 4 0mV ,给予从 - 30mV复极化至 +6 0mV、阶跃电压为 10mV、脉冲时间是 30 0ms的去极化刺激10次时 ,可记录到时间及电压依赖性的延迟整流钾电流。②在指令电位 +5 0mV、+6 0mV时 ,细胞外给予 10 -6mol·L-1DHAP 5min后 ,可使该电流由用药前 (12 97± 2 4 5 )、(16 83± 3 2 8)pA/pF ,增加至 (18 2 9± 2 6 3)、(2 2 90±3 2 1)pA/pF ,增加百分比为 4 1%和 36 % (P <0 0 5 ,n =6 )。结论 DHAP可能通过开放钾通道而舒张肺内动脉平滑肌细胞 ,这可能是其降低肺动脉高压的重要机制之一。

K^+通道在正常与慢性低氧大鼠低氧性肺血管收缩反应中的作用

目的 :探讨K+ 通道在慢性低氧致低氧性肺血管收缩反应降低中的作用。方法 :采用离体肺灌流实验 ,研究 4-AP(4-aminopyridine ,电压依赖性K+ 通道 -Kv阻滞剂 )、TEA(tetraethylamonium ,Ca2 + 激活性K+ 通道 -KCa阻滞剂 )、GLIB(glibenclamide,ATP敏感性K+ 通道 -KATP阻滞剂 )对正常与慢性低氧大鼠肺血管低氧反应的影响。结果 :4-AP、TEA均可使正常大鼠肺动脉基础压上升 ,且使其肺血管低氧反应明显增强 ;对于慢性低氧大鼠 ,其肺血管对低氧反应明显低下 ,4-AP、TEA升肺动脉基础压的作用明显低于对照鼠肺 ,GLIB也呈现升高肺动脉基础压力作用 ,4-AP、TEA、GLIB均可使肺血管低氧反应大大增强 ,增强的比例明显大于正常对照组。结论 :在离体灌流鼠肺HPV中 ,Kv、KCa的开放起调节作用 ,大鼠经慢性低氧后 ,肺血管反应性明显降低 ,可能与Kv、KCa。

悬浮生长的人脐血细胞中Nestin及MAP_2 mRNA的表达

目的 :探讨悬浮生长的人脐血细胞中神经元特有标志物的表达特性 ,进一步阐明脐血单个核细胞(MNCs)向神经细胞分化的条件和机制。方法 :取健康自然分娩产妇脐血 ,密度梯度离心法分离单个核细胞 ,以 1×1 0 6ml-1 细胞密度接种于含体积分数为 2 0 %胎牛血清的DMEM培养瓶内 ,置 37℃、体积分数为 5 %CO2 、饱和湿度的培养箱内培养 ,倒置显微镜下观察细胞形态变化。收集培养第 1d、3d、5d、7d、1 0d悬浮生长的细胞 ,用RT PCR法检测培养前后MNCs神经元特有标志物Nestin和MAP2 的mRNA的表达。结果 :培养前MNCs呈小圆形 ,Nestin、MAP2mRNA均表达阳性。培养后细胞体积增大 ,部分细胞贴壁生长 ,部分细胞呈悬浮生长。收集悬浮生长细胞 ,第 1d、3dNestinmRNA的表达升高 ,随后降低直至转阴 ,而MAP2 mRNA的表达随培养时间的延长而增强。结论 :悬浮生长的脐血细胞表达神经元特有标志物Nestin和MAP2 mRNA 。

脂氧素受体激动剂BML-111减轻佐剂诱导的关节炎

目的观察脂氧素受体激动剂BML-111对大鼠佐剂诱导的关节炎(adjuvant arthritis,AA)病理改变及炎症因子表达的影响。方法♂SD大鼠足跖部注射弗氏完全佐剂诱导建立AA动物模型,脂氧素受体激动剂BML-111于造模后每日腹腔注入。观察AA大鼠足爪肿胀情况并给予定量临床评分;取病变关节切片HE染色后,光学显微镜下观察关节组织病理改变;EILSA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)浓度。结果BML-111处理降低AA大鼠关节临床病变评分并减轻关节组织病理损伤,这一效应伴有血清中TNF-α和IL-6浓度明显降低。结论脂氧素受体激动剂BML-111可减轻佐剂诱导的大鼠关节病变,提示脂氧素可调节免疫介导的慢性炎症过程,在关节炎等慢性炎症性疾病中有潜在应用价值。

早老素与阿尔茨海默病

早老素 (presenilin ,PS)与阿尔茨海默病 (alzheimer′sdisease ,AD)密切相关 ,其基因突变是遗传性家族型AD的主要病因。PS可能作为γ分泌酶和 (或 )通过影响蛋白质的膜转运参与 β淀粉样前体蛋白质 (β amyloidprecursorpro tein ,APP)代谢生成Aβ42的过程 ,而PS多蛋白质复合物的形成可能是其中的关键步骤 ,突变的PS则通过“获得功能”的方式引起Aβ42的产生和沉积增加。PS还可能通过影响未折叠蛋白质反应等多种途径来影响神经细胞对凋亡的敏感性。

病毒感染大鼠心室肌细胞钙通道基因表达及功能改变的研究

目的研究大鼠心室肌细胞感染柯萨奇病毒B3(CVB3)后L型钙通道mRNA表达量及其电生理特性的变化。方法用CVB3感染培养的SD大鼠心室肌细胞,采用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术,检测病毒感染心室肌细胞L型钙通道各亚单位mRNA表达量的变化;用全细胞膜片钳技术,观察病毒感染前后心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的变化。结果病毒感染组心室肌细胞L型钙通道α1和β亚单位mRNA的表达量显著高于正常对照组(400±007vs221±041,P<001;206±006vs122±030,P<005),而α2/δ亚单位mRNA表达量的改变不明显(412±019vs413±027,P>005);感染组细胞ICa-L的平均电流密度明显大于正常组细胞[(-866±099)pA/pFvs(-697±175)pA/pF,P<001],且前者的电流-电压曲线下移,峰电流密度增加2574%(P<005)。结论CVB3感染心室肌细胞后,使其L型钙通道α1和β亚单位mRNA的表达量增加,ICa-L增大,可能是病毒感染导致心肌出现异常电生理活动的细胞和分子机制之一。

慢性心肌缺血大鼠膈肌舒缩功能和结构的变化

目的 探讨慢性心肌缺血大鼠膈肌结构和功能的变化及其机制。方法 2 4只大鼠随机分为 2组 ,实验组结扎冠状动脉分支 ,复制慢性心肌缺血模型 ;对照组仅做开胸手术。用组化染色法对膈肌纤维进行分类分析 ,做膈肌条等张收缩实验分析膈肌舒缩功能。结果 慢性心肌缺血大鼠膈肌Ⅰ类纤维比例增加 (4 0 %± 1%→ 48%± 1% ) ,Ⅱa类纤维比例明显下降 (4 3%± 2 % 36 %± 2 % ) ,两类纤维横截面积均下降 ,同时膈肌舒缩功能也明显减退。

利诺吡啶对豚鼠耳蜗外毛细胞和支持细胞钾电流的影响

目的 观察KCNQ家族钾通道特异性阻滞剂利诺吡啶 (linopirdine)对豚鼠耳蜗单离外毛细胞和Deiters细胞 (支持细胞 )总钾电流的影响 ,初步探讨KCNQ家族钾通道在耳蜗外毛细胞和Deiters细胞的分布。方法 运用膜片钳技术 ,在全细胞模式下记录正常细胞外液中 8个外毛细胞和5个Deiters细胞的总钾电流 ,并观察 10 0 μmol/L利诺吡啶对外毛细胞和Deiters细胞总钾电流的影响。结果 在正常细胞外液中 ,单离外毛细胞可记录到四乙基二乙胺敏感的外向性钾电流和静息膜电位附近激活的内向性钾电流 (theK+ currentactivatedatnegativepotential,IKn)两种钾电流 ,而单离Deiters细胞中只记录到外向整流性钾电流。加入 10 0 μmol/L利诺吡啶后 ,外毛细胞中的四乙基二乙胺敏感的钾电流减小 ,IKn被完全抑制 ;而Deiters细胞中的外向整流性钾电流大小无变化。结论KCNQ家族钾通道存在于豚鼠耳蜗外毛细胞 ,其介导的钾电流是四乙基二乙胺敏感的钾电流的组成部分 ,并构成全部的IKn;但KCNQ家族钾通道不存在于豚鼠耳蜗Deiters细胞。

青心酮对肺动脉内皮细胞及红细胞生物力学特性的影响

目的 观察青心酮对红细胞及肺血管内皮细胞生物力学特性的影响。方法 体外培养肺动脉内皮细胞 ,分对照组及青心酮大、中、小剂量处理内皮细胞 ,用微管吸吮技术观察细胞的变形过程。结果 与未用药组比较 ,在加用青心酮 30 min后 ,中、大剂量组内皮细胞弹性系数 K1 和 K2 增大 ,粘性系数μ变化不大 ;红细胞表观变形指数和最大变形值也明显增加。结论 青心酮可以增加肺血管内皮弹性 ,并使红细胞变形能力明显增强 。

多肽脯氨酰顺反异构酶与阿尔茨海默病

多肽脯氨酰顺反异构酶 (简称Pin1)可专一性地使蛋白质一定区段内磷酸化的丝 /苏氨酸模体发生顺反异构 ,从而改变该蛋白质的构型和功能。阿尔茨海默病中发生特征性改变的蛋白质如微管相关蛋白tau、淀粉样前体蛋白 (APP)等都含有丝 /苏氨酸模体 ,它们的活性和功能均受Pin1的变构调节。

大鼠中缝大核内一氧化氮在痛觉调制和针刺镇痛中的作用(英文)

背景:L-精氨酸是内源性一氧化氮的前体物质,而一氧化氮参与外周脊髓水平和脊髓水平以上痛觉的调制。目的:探讨延髓中缝大核内一氧化氮在痛觉调制和针刺镇痛过程的作用。设计:以动物为观察对象的随机对照实验。单位:咸宁学院医学院生理教研室。材料:实验于2002-05/2003-03在咸宁学院医学院生理教研室完成。选用63只Wistar大鼠,随机分为7组,每组9只大鼠:①L-精氨酸量效关系实验分为5组:生理盐水组,L-精氨酸1,2,4,8mmol组。②L-精氨酸与电针镇痛关系实验分为两组:生理盐水+电针组,L-精氨酸+电针组。方法:①L-精氨酸量效关系实验:5组大鼠分别延髓中缝大核微量注射生理盐水及L-精氨酸1,2,4,8mmol,容积均为1.5μL。给药后每隔10min以(50±0.5)℃热水刺激甩尾测定痛阈,连续观察90min。②L-精氨酸与电针镇痛关系实验:两组大鼠分别延髓中缝大核微量注射生理盐水1.5μL及L-精氨酸8mmol(1.5μL),10min后电针刺激大鼠双侧后肢“足三里”(位,频率为4～16Hz,强度按1,2,3V顺序递增电压,每一强度电针10min,共电针30min并测痛3次,停针后继续每隔10min测痛1次,直至注药后90min。主要观察指标:各组大鼠不同时间点痛阈变化。结果:63只大鼠进入结果分析。①L-精氨酸1mmol组大鼠各个时间点痛阈低于生理盐水组,但统计学分析无差异(P>0.05),L-精氨酸2,4,8mmol组大鼠各个时间点痛阈均显著低于生理盐水组(P<0.001),作用持续至给药后80min;且随着浓度的增加,大鼠痛阈降低的幅度增加。②L-精氨酸+电针组大鼠给药后20～50min痛阈明显低于生理盐水+电针组(P<0.01)。结论:①延髓中缝大核微量注射L-精氨酸具有降低痛阈作用,其作用呈剂量依赖性。②电针能提高痛阈,L-精氨酸可削弱电针镇痛效应。③以上提示延髓中缝大核内一氧化氮参与痛和电针镇痛的病理生理过程,其含量增加明显降低痛阈。

抑制蛋白磷酸酶对嗜铬细胞瘤细胞一氧化氮合酶活性的影响

蛋白磷酸酶降低参与阿尔茨海默病 (AD)神经元退化 ,本文旨在探讨一氧化氮 (NO)在 tau蛋白过度磷酸化引起 AD脑神经元退化中的可能作用。采用 β-还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 -黄递酶 (β- NADPH- d)组织化学技术研究不同剂量蛋白磷酸酶抑制剂岗田酸 (OA)对嗜铬细胞瘤细胞株 (PC12 )一氧化氮合成酶 (NOS)活性的影响。结果显示 1nmol/ L OA与 PC12共培养 48小时 ,NOS活性轻度增强 ;当增加 OA浓度至 10 nmol/ L 时 ,培养 2 4和 48小时均可见 NOS活性明显增强。结果表明根据 1nmol/ L OA抑制蛋白磷酸酶 (PP) - 2 A,而 10 nmol/ L OA除完全抑制 PP- 2 A外 ,还部分抑制 PP- 1,提示 PP- 2 A和 PP- 1的抑制均可增强 NOS活性使 NO产生增加。关于蛋白磷酸酶活性降低和 NO产生增多与

大鼠中缝大核微量注射L-精氨酸对痛阈及电针镇痛的影响

目的观察延髓中缝大核 (NRM )微量注射L -精氨酸 (L -Arg)对痛阈及电针镇痛作用的影响 ,以探讨NRM中一氧化氮 (NO)在痛觉调制和针刺镇痛过程的作用和作用机理。方法采用大鼠热水刺激甩尾测痛模型 ,以 5 0± 0 .5℃热水刺激大鼠尾部引起甩尾反应的潜伏期为痛阈指标 ,测定大鼠的痛阈。结果NRM微量注射 1mmolL -Arg对大鼠痛阈无明显影响 ;2mmol、4mmol、8mmolL -Arg均能降低痛阈 ,其作用呈剂量依赖性。NRM预先注入 8mmolL -Arg再电针 3 0分钟 ,大鼠痛阈明显低于生理盐水电针组。结论NRM内NO参与痛和电针镇痛的病理生理过程 ,NRM内NO含量增加明显降低痛阈 。

人脐血单个核细胞向神经细胞分化

目的 :观察培养前后人脐血单个核细胞 (MNCs)的形态学及免疫反应性变化 ,探讨其能否向神经细胞的分化及机制。方法 :密度梯度离心脐血中单个核细胞 ,接种并用EGF和bFGF刺激细胞生长 ,倒置显微镜下观察培养前后细胞形态变化 ,并行免疫细胞化学鉴定。结果 :培养前脐血MNCs胞体小呈圆形 ,nestin阳性细胞、MAP2阳性细胞散在分布 (阳性率为 1 .5 %和 3 .4% )无GFAP阳性细胞着色。培养 1 4d后 ,细胞群中相邻细胞突起连成网状 ;MAP2、GFAP染色阳性细胞成片状分布 (阳性率 3 3 .5 %和 2 4.6% ) ,未见nestin阳性细胞。结论 :脐血细胞中可能有多能干细胞 。