铜绿假单胞菌LasR基因反义核酸原核表达载体的构建及对该菌毒力的影响

PCR扩增LasR基因,用反向克隆法构建LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense并转化铜绿假单胞菌,经酶切、PCR及测序鉴定重组载体.RT-PCR检测LasB基因和LasI基因mRNA的表达,NAD法测定外毒素A的活性,紫外分光光度计测定绿脓菌素的产生水平.用转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染大鼠呼吸道并进行病理组织切片检查.PCR扩增出约720bp片段,与GenBank(No:NC_002516)报道的基因片段大小一致,构建了LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense,并成功转化铜绿假单胞菌,且有效表达,使转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素A和绿脓菌素表达水平均降低.与标准株感染的大鼠比较,转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染的大鼠支气管炎症明显减轻.上述结果表明,LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense可以降低铜绿假单胞菌的毒力.

多重聚合酶链反应用于检测、鉴定耐甲氧西林葡萄球菌的研究

目的建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法,用于检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性,同时对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的种进行鉴定。方法对临床分离的武汉地区金黄色葡萄球菌80株,表皮葡萄球菌70株,其余凝固酶阴性葡萄球菌60株,提取其基因组DNA,针对金黄色葡萄球菌独有的femA基因,表皮葡萄球菌的种特异性序列,决定葡萄球菌对甲氧西林耐药性的mecA基因,和细菌共有的16srRNA基因的保守序列设计四对引物,同时加入PCR体系中对相应片段进行扩增。结果在210株葡萄球菌中,mecA基因检测结果与苯唑西林敏感试验结果的一致率为96.2%。mecA基因阳性但苯唑西林敏感的5个菌株,通过由低到高浓度的苯唑西林筛选培养后,均表现出耐药性。mecA基因阴性但苯唑西林耐药的3个菌株,经过对阿莫西林-克拉维酸敏感性试验后,被证明是β-内酰胺酶的高产株。结论此多重PCR方法不仅可以对临床分离葡萄球菌菌株的甲氧西林耐药性作出判断,同时还可以对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌做出种的鉴定,是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。

PD-1／PD-L1抑制性通路在病毒性感染中的研究进展

杀伤性T细胞（CTL）是病毒感染过程中主要的效应细胞。在急性病毒性感染中，CTL细胞通过杀伤病毒感染的细胞，分泌抗病毒细胞因子从而有效清除病毒。而在慢性病毒感染过程中，病毒特异性CTL发生克隆耗竭，细胞数量少，细胞功能受损，分泌细胞因子能力下降。目前证明，CD28家族成员Programmed Death-1（PD-1）是一种重要的细胞表面分子，能够抑制CTL细胞功能，参与外周免疫耐受，维持T细胞克隆耗竭，保护机体不受免疫病理损伤。在慢性病毒性感染中，T细胞表面的PD-1与其受体PD．L1／2结合后，传递抑制性信号，下调外周T细胞功能。阻断PD-1通路，能够重建CD8^＋T细胞功能，抑制病毒复制，促进病毒清除。因此，通过干扰PD-1／PD-L1抑制途径进行免疫调节，可能是处理慢性病毒感染性疾病的一个新方法。