血清转化生长因子β1水平与新疆哈萨克族原发性高血压的关系

为探讨哈族原发性高血压(EH)患者血清转化生长因子β1(TGF-β1)水平与高血压之间的关系,在流行病学调查的基础上采用病例一对照研究方法,对733名哈族人群进行调查问卷,测量血压、身高、体重等相关指标,用双抗体夹心ELISA法检测两组的血清TGF-β1浓度。结果显示:蔬菜摄入不是超重、肥胖、高胆固醇、低密度脂蛋白升高是哈族人群高血压危险因素。哈族人群TGF-β1水平与舒张压成正相关(r=0.158,P<0.05)。EH组TGF-β1血清浓度(35.98±12.76ng/mL)与对照组(32.43±14.27ng/mL)无统计学差异。结果提示:TGF-β1浓度升高可能参与了哈族人EH的发病过程,血清TGF-β1浓度升高可与其他环境因素(年龄、超重、肥胖)发生交互作用,增加个体患高血压的危险度。

STIM1/ORAI1复合体参与调节人脐静脉内皮细胞SOC和ROC介导的钙内流和NO生成

为研究基质交联分子1(STIM1)/钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)介导Ca^(2+)内流和NO生成中的作用。采取2-3代HUVECs随机分组,将构建的STIM1和ORAI1干扰质粒分别转染入HUVECs。用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,Real-time PCR和Western blotting检测STIM1、ORAI1 mRNA和蛋白的表达。细胞随机分组:特异性质粒转染组即实验组,未转染组即空白对照组(Control组)及空质粒组(Scrambled组),将上述3组细胞分别与四种不同处理因素刺激后用荧光探针Fura-2/AM检测[Ca^(2+)]i变化,NO荧光探针DAF-FM负载方法同步检测NO生成的变化。随后将构建的STIM1和ORAI1干扰质粒同时转染入HUVECs,与Ca R激动剂精胺孵育后检测[Ca^(2+)]i和NO,用免疫共沉淀法检测STIM1和ORAI1的相互作用。结果显示,(1)与对照组相比,STIM1及ORAI1组,m RNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);(2)在4种不同处理因素作用下,STIM1及ORAI1转染组中[Ca^(2+)]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);(3)与对照组及单转染STIM1及ORAI1组比,共转染组[Ca^(2+)]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);(4)STIM1与ORAI1相互作用形成复合体,且在Ca R激动剂的剌激下相互作用增强。由此可知,STIM1与ORAI1复合体共同调节Ca R经SOC和ROC激活介导的Ca^(2+)内流和NO生成。

小干扰RNA沉默细胞外钙敏感受体抑制人脐静脉内皮细胞钙内流和NO生成

为了探讨细胞外钙敏感受体(extracellular Ca^(2+)-sensing receptor, CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cells, HUVEC)介导钙内流和NO生成中的作用,本实验针对GenBank中人CaR的cDNA序列设计合成小干扰RNA(small interference RNA, siRNA),并将其转染入HUVEC中,采用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,Western blot检测CaR蛋白表达及转染后的干扰效率,Fura-2/AM负载检测细胞内Ca^(2+)浓度(intracellular Ca^(2+)concentration, [Ca^(2+)]i)变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载检测细胞内NO的生成及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)活性。结果显示,实验成功将CaR siRNA转入HUVEC,Western blot 检测结果显示转染48 h后,CaR蛋白表达降低(P < 0.05);与未转染对照组和阴性对照组相比,在精胺 + Ca^(2+)刺激下,CaR siRNA转染组的[Ca^(2+)]i、eNOS活性和NO含量均显著降低(P < 0.05)。上述结果表明,CaR在精胺介导的HUVEC Ca^(2+)内流和NO生成中发挥重要作用。

小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流

为了探讨小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)细胞外钙敏感受体(extracellular Ca2+-sensing receptor,CaR)介导Ca2+内流中的作用,本实验研究了细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂Filipin或Cav-1基因沉默后对CaR介导Ca2+内流的影响。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度(intracellular Ca2+ concentration,[Ca2+]i)。结果显示,HUVECs中CaR对不同浓度细胞外Ca2+刺激无反应。无论细胞外为零钙液或含钙液时,精胺(Spermine,2mmol/L)刺激CaR时均引起[Ca2+]i升高(P<0.05),其中细胞外液为含钙液时,[Ca2+]i升高较细胞外为零钙液时更明显(P<0.05),CaR的负性变构调节剂Calhex231(1μmol/L)均可完全阻断Spermine刺激引起的[Ca2+]i升高(P<0.05);相反,Spermine升高[Ca2+]i作用可被Filipin(1.5μg/mL)或Cav-1基因沉默进一步加强(均P<0.05)。免疫荧光技术检测显示HUVECs中有CaR和Cav-1表达,两者共定位于膜上。Western blot检测结果显示Cav-1干扰后,Cav-1蛋白表达降低,同时CaR的膜蛋白表达也降低(P<0.05),CaR的总蛋白表达无变化(P>0.05)。上述结果表明:Cav-1和CaR共定位于HUVECs膜,Cav-1对CaR介导的Ca2+内流有下调作用,其机制可能与Cav-1影响CaR膜定位及减弱其对激动剂反应性有关。