慢性吸烟大鼠气道平滑肌大电导的钙激活钾通道和Kv1.5表达的变化(英文)

复制大鼠的慢性吸烟模型,采用气道反应性的测定、HE 染色、免疫组织化学染色、原位杂交和免疫印迹实验等方法,观察吸烟对大鼠支气管平滑肌大电导的钙激活的钾通道(BKca)和电压依赖性延迟整流钾通道Kv1.5 蛋白和mRNA表达的影响,以阐明吸烟引起的气道高反应性发病机制中钾通道表达变化的作用。结果显示:(1)慢性吸烟可降低大鼠大气道和小气道BKca 和 Kv1.5 蛋白和 mRNA 表达;(2)大气道 BKca 的降低程度大于 Kv1.5, 小气道 BKca 和 Kv1.5 的降低程度无明显差异;(3)吸烟对全肺组织BKca 和Kv1.5 的蛋白表达无明显影响。上述结果提示, 慢性吸烟可下调大鼠气道平滑肌钾通道BKca 和Kv1.5的表达水平, 是导致气道高反应的机制之一。

慢性吸烟大鼠肺组织FIZZ1/REL Mα表达的变化

目的:研究吸烟大鼠肺组织中FIZZ1/RELMα表达的变化及其与气道炎症和气道高反应性的关系。方法:复制大鼠的慢性吸烟模型,采用气道反应性测定、HE染色、免疫组织化学染色、原位杂交等方法,研究慢性吸烟大鼠肺组织中FIZZ1/RELMα表达的变化。结果:在正常对照组,RELMα蛋白呈散在分布,吸烟组支气管平滑肌、肺血管壁、肺泡上皮和肺间质的表达明显增强,吸烟组RELMαmRNA的表达在各种细胞均明显增强,其中以肺泡上皮、肺动脉内皮和支气管平滑肌的表达增强最为明显。结论:FIZZ1/RELMα作为肺部特异性表达的一种因子,吸烟使其表达增强,与吸烟引起的气道高反应性、肺血管反应性增强密切相关。

脑动脉内皮细胞缺氧时内皮型一氧化氮合酶基因表达的变化及蛋白激酶C的作用

目的 :研究缺氧时脑动脉内皮细胞 (CAECs)内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)基因表达的变化 ,并探讨可能的分子机制。方法 :分别采用RT -PCR和蛋白质免疫印迹技术检测原代培养的猪脑动脉内皮细胞缺氧 2、6、12、2 4、4 8h后eNOSmRNA和蛋白质表达的变化 ,并观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂对缺氧 2 4h引起的eNOSmRNA和蛋白质变化的影响。加入转录抑制剂放线菌素D后观察缺氧 2 4h对eNOSmRNA稳定性的影响。结果 :缺氧 2h后脑动脉内皮细胞eNOSmRNA和蛋白质表达均增加 ,12h达到高峰 ,约分别为常氧组的 2 5倍和 2 0倍 ,缺氧 4 8h仍高于常氧组。缺氧对eNOSmRNA稳定性无明显影响。选择性PKC抑制剂BIMI(1μmol/L)、G 6 983(1μmol/L)均能降低缺氧2 4h所引起的eNOS基因表达的上调。结论 :脑动脉内皮细胞缺氧时可通过PKC信号途径上调eNOS基因的表达 ,并可能由此介导缺氧时脑血管的扩张反应 ,发挥其神经保护作用。

慢性吸烟大鼠肺动脉平滑肌细胞钾通道Kv1.5、BK_(Ca)表达的变化

目的:观察吸烟对大鼠肺动脉平滑肌大电导的钙激活的钾通道(BKCa)和电压依赖性延迟整流钾通道Kv1.5蛋白和mRNA表达的影响,以阐明吸烟引起的肺血管反应性改变中钾通道表达的变化。方法:复制大鼠的慢性吸烟模型,采用HE染色、免疫组织化学染色、原位杂交等方法。结果:(1)慢性吸烟可降低大鼠肺动脉平滑肌BKCa蛋白和mRNA表达;(2)慢性吸烟可降低大鼠肺动脉平滑肌Kv1.5蛋白和mRNA表达;(3)大动脉BKCa的降低程度大于Kv1.5,小动脉BKCa和Kv1.5的降低程度无明显差异。结论:慢性吸烟可下调大鼠肺动脉平滑肌钾通道BKCa和Kv1.5的表达水平,是导致肺血管反应性增高的机制之一。

血管紧张素Ⅱ对猪动脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶基因表达的异质性研究

目的:通过观测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体循环和肺循环系统动脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响,探讨体、肺循环系统病理生理学上的差异。方法:采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法(LSAB法)观察AngⅡ对培养的猪主动脉和肺动脉内皮细胞eNOSmRNA和蛋白质表达的影响。结果:AngⅡ分别作用6、12、24、36、48h后,主动脉内皮细胞eNOSmRNA及蛋白质的表达下调。在AngⅡ作用的早期(≤24h),肺动脉内皮细胞eNOSmRNA和蛋白质的表达也呈时间依赖性下调,但作用48h后,肺动脉内皮细胞eNOSmRNA恢复至正常水平,并且eNOS蛋白水平上调超过空白对照组,表现出先抑制后促进的特性。结论:AngⅡ对主动脉和肺动脉内皮细胞eNOS基因表达的影响不同,可能是由于不同的AT受体亚型或是不同的信使途径所调节,表明体循环和肺循环动脉之间存在着病理生理学的异质性。

缺氧对肺动脉内皮细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

目的观察缺氧对培养的猪肺动脉内皮细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达的影响。方法采用RT-PCR、Western blot、底物胶电泳(酶谱图)、免疫细胞化学等方法。结果肺动脉内皮细胞缺氧24h可使MMP-2的mRNA表达和蛋白分泌减少,酶活性减弱,与常氧组比较有显著性差异,MMP-9无明显变化。结论缺氧时MMP-2降低,溶解细胞外基质的能力降低,可能是缺氧性肺血管构型重组的机制之一。

地塞米松降低吸烟大鼠气道反应性及上调气道平滑肌细胞BKca表达

目的观察雾化吸入地塞米松对吸烟大鼠气道的反应性及支气管平滑肌高电导的钙激活的钾通道(BKca)蛋白和mRNA表达的影响。方法复制大鼠吸烟模型后雾化吸入地塞米松治疗,测定气道反应性;采用HE染色,免疫组织化学染色和原位杂交等方法检测肺组织病理形态学改变和BKca的表达。结果①吸烟组的气道反应性明显高于正常对照组(P<0.05),而吸烟加雾化吸入地塞米松治疗组的气道反应性显著低于吸烟组(P<0.05),但仍高于正常对照组;②吸烟组肺组织出现较轻的炎症反应,吸烟加雾化吸入地塞米松治疗组无炎症反应;③吸烟组大气道和小气道BKcamRNA和蛋白表达低于正常对照组,吸烟加雾化吸入地塞米松治疗组BKcamRNA表达高于吸烟组。结论吸烟引起的气道反应性的增高与气道的炎症反应不平行,雾化吸入地塞米松治疗可降低吸烟引起的气道高反应性,其机制之一可能是降低吸烟对大鼠气道平滑肌BKca表达的抑制作用。

组胺和低氧对猪肺动脉和主动脉内皮细胞eNOS基因表达的影响

目的 :观察组胺和低氧对培养的猪肺动脉和主动脉内皮细胞eNOSmRNA和蛋白质表达的影响。方法 :采用半定量RT -PCR和免疫细胞化学的方法。结果 :(1)组胺可使肺动脉内皮细胞eNOSmRNA表达增加 ,在10 -5mol/L作用 2 4h达高峰 ,为对照组的 178 2 %± 7 7% (P <0 0 1) ,eNOS蛋白质表达也上调 ,为对照组的 173%±4 7% (P <0 0 1) ,主动脉内皮细胞与肺动脉内皮细胞相似 ,可在组胺 10 -6mol/L作用 2 4h达高峰 ,为对照组的 177 4 %± 14 2 % (P <0 0 1) ,eNOS蛋白质表达也上调 ,为对照组的 16 5 %± 5 4 % (P <0 0 1) ;(2 )急性低氧 12h肺动脉内皮细胞eNOSmRNA表达增加 ,2 4h达高峰 ,为对照组的 15 1 0 %± 9 1% (P <0 0 1) ;蛋白质表达水平也增高到常氧对照组的 2 16 %± 4 4 % (P <0 0 1) ,而主动脉内皮细胞eNOSmRNA与蛋白质均未受低氧影响。结论 :组胺可使肺动脉和主动脉内皮细胞eNOS表达增加 ,但两者反应无明显差异 ;低氧使肺动脉内皮细胞eNOS表达上调 ,而对主动脉内皮细胞无明显影响。

运动应激对慢性吸烟大鼠肺动脉平滑肌钾通道BKca及Kv 1．5表达的影响

目的观察运动应激对慢性吸烟大鼠肺动脉平滑肌大电导的钙激活的钾通道(BKca)和电压依赖性延迟整流钾通道Kvl．5蛋白和mRNA表达的影响。方法复制大鼠慢性吸烟模型后进行运动训练,测定其血浆中皮质醇浓度,采用HE染色、免疫组织化学染色、原位杂交等方法检测肺组织病理形态学改变和BKca、Kvl．5的表达变化。结果(1)吸烟运动组运动后血浆中皮质醇浓度[(1 528．7±469．7)ng/L]明显高于全部运动训练后次日晨[(672．4±235．7)ng/L],差异有统计学意义(P＜0．01)。(2)HE染色显示,吸烟对照组肺组织出现明显的慢性炎症反应,吸烟运动组炎症反应轻于吸烟对照组。(3)吸烟对照组肺动脉BKca mRNA[积分光密度值(OD)值：大动脉0．220 6±0．041 5,小动脉0．393 5±0．137 8]和蛋白(OD值：大动脉0．263 4±0．121 9,小动脉0．099 5±0．085 1)表达低于正常对照组,吸烟运动组BKca mRNA(OD值：大动脉0．5022±0．113 4,小动脉0．640 8±0．213 5)表达高于吸烟对照组,但对小动脉的蛋白表达无影响。(4)吸烟对照组肺动脉Kvl．5 mRNA(OD值：大动脉0．935 4±0．329 0,小动脉0．501 2±0．117 0)和蛋白(OD值：大动脉1．111 2±0．331 0,小动脉0．473 6±0．125 0)表达低于正常对照组,在小动脉吸烟运动组Kvl．5蛋白(OD值：0．744 5±0．269 0)高于吸烟对照组,大动脉则无变化。结论适当运动应激可降低慢性吸烟对大鼠肺动脉平滑肌钾通道BKca和Kvl．5表达的抑制作用,运动引起的皮质醇分泌增加可能是其机制之一。